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旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析: 用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA 文库进行了免疫筛选,从1.6×10个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆.阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒...; 付宝权原丽红张亚兰吴秀萍李莲瑞卢强刘明远陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫肌幼虫 CDNA文库免疫筛选; 文献传递

旋毛虫新生幼虫p46 000抗原基因的克隆及序列分析: 应用感染旋毛虫猪血清,对旋毛虫新生幼虫cDNA 文库进行了免疫筛选,对阳性克隆pBK-CMV-WN10的序列分析结果表明,cDNA 全长为1352 bp,含有1个1218 bp 的完整的开放阅读框架(ORF),编码的多肽...; 付宝权吴秀萍刘明远张亚兰原丽红李莲瑞卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂; 文献传递

旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因的克隆与分析被引量：5: 2008年; 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针，对旋毛虫3日龄成虫cDNA文库进行免疫筛选，将获得的阳性克隆进行测序，用分子生物学软件对所得cDNA序列进行了分析。序列分析结果显示，阳性克隆Zh68cDNA全长为1372bp，含有1个1287bp的完整的开放阅读框架，编码由429个氨基酸组成的多肽，理论分子质量为47．5ku，等电点为8．45。SMART分析表明，1～18位氨基酸为信号肽序列，37～277位氨基酸为典型的丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶类结构域，其中His88、Asp142、Ser233为催化中心的3个主要氨基酸残基，78～80位氨基酸为N-糖基化位点（NCS），另外还有6个保守的Cys形成二硫键。BLASTn同源性分析表明，与其他生物丝氨酸蛋白酶的基因序列无明显的同源性，为1个新的cDNA分子。BLASTp蛋白质同源性分析表明，与丝氨酸蛋白酶的同源性为30％左右。Southern—blot杂交表明，此基因在旋毛虫基因组中属于多基因家族，具有基因多态性。cDNA的PCR结果表明，此基因在旋毛虫肌幼虫、新生幼虫及成虫期均有表达。; 李莲瑞付宝权卢强韩文瑜刘明远; 关键词：旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因克隆

旋毛虫肌幼虫p43cDNA的克隆及鉴定被引量：9: 2005年; 目的克隆旋毛虫肌幼虫p43cDNA并对其表达的融合蛋白酶活性进行鉴定与分析。方法用PCR技术从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因,克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希菌NovaBlue,序列测定后克隆到原核表达载体pET28a并转入表达菌DE3中。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后提取包涵体并复性,通过降解双链λDNA测定其融合蛋白脱氧核糖核酸酶II(DNase II)活性。结果成功克隆到p43 cDNA序列,该cDNA序列与美国发表的存在两个核苷酸的变异,分别为第210位的C变为T,第604位的A变为G。基于3名研究者从旋毛虫T.spiralis美国分离株获得的序列相同、6名国内研究者(含本课题组)从T.spiralis中国分离株获得的序列也相同,由此可以确定这两个核苷酸的变异为T.spiralis中国分离株特异性和特征性单核苷酸多态性(SNP)标记。p43重组蛋白能够降解双链λDNA,表明其有DNase II酶活性。结论成功克隆到p43cDNA,T.spiralis中国分离株的p43cDNA具有两个SNP标记,其表达的重组蛋白具有DNase II酶活性。; 郭恒李莲瑞刘明远吴秀萍孙树民付宝权高长玲卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫克隆

旋毛虫编码新生幼虫p46 kDa抗原基因重组融合蛋白对小鼠的免疫保护性研究: 目的探讨旋毛虫编码新生幼虫p46 kDa 抗原基因重组融合蛋白WN10对小鼠的免疫保护性。方法将纯化的重组融合蛋白WN10以20μg/只的剂量分三次免疫小鼠后,攻击感染旋毛虫肌幼虫200条/只,检查旋毛虫7日龄成虫数、雌...; 原丽红付宝权刘明远张亚兰吴秀萍李莲瑞林本夫卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫重组融合蛋白保护性免疫; 文献传递

旋毛虫编码新生幼虫p46 kDa抗原基因重组融合蛋白对小鼠的免疫保护性研究被引量：14: 2005年; 目的　探讨旋毛虫编码新生幼虫p4 6kDa抗原基因重组融合蛋白WN10对小鼠的免疫保护性。方法　将纯化的重组融合蛋白WN10以 2 0 μg/只的剂量分 3次免疫小鼠后 ,攻击感染旋毛虫肌幼虫 2 0 0条 /只 ,检查旋毛虫 7日龄成虫数、雌虫体外产生新生幼虫数、感染 35d的肌幼虫数并计算减虫率 ,同时用ELISA法检测血清中抗WN10抗体IgG滴度。结果　WN10免疫小鼠后获得旋毛虫 7日龄成虫、肌幼虫的减虫率分别为 6 4 .2 8%和 6 1.2 1% ,均与感染对照组和佐剂对照组差异显著 ;获得雌虫产新生幼虫的减虫率为 16 .4 6 % ,与感染对照组和佐剂对照组差异不显著 ;WN10免疫组小鼠在第 3次免疫后 1周可检测到高滴度的抗WN10抗体IgG ,在攻击感染旋毛虫 9周后仍维持在较高水平。结论　编码旋毛虫新生幼虫 p4; 原丽红付宝权刘明远张亚兰高飞吴秀萍李莲瑞林本夫卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫重组融合蛋白保护性免疫

旋毛虫新生幼虫WN1抗原基因的克隆及表达: 应用旋毛虫人工感染猪血清对旋毛虫新生幼虫cDNA 文库进行免疫筛选,对阳性克隆WN1 序列进行生物信息学分析,结果表明,WN1 cDNA 全长为474 bp,含有一个354 bp 的完整的开放阅读框架(ORF),编码的多...; 高长玲付宝权刘明远原丽红吴秀萍张亚兰李莲瑞卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫基因克隆; 文献传递

旋毛虫3日龄成虫cDNA文库的免疫筛选: 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫3日龄成虫cDNA 文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序,用分子生物学软件对所得cDNA 序列进行序列分析.结果从4×10个重组噬菌体中共获得33个阳性克隆.序列分析结果显示:...; 张亚兰付宝权刘明远原丽红吴秀萍李莲瑞卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫成虫免疫筛选; 文献传递

旋毛虫肌幼虫p53cDNA的克隆及鉴定被引量：5: 2007年; 根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物,用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53 cDNA,将其克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析,结果表明,克隆到1176bp的p53 cDNA,共编码391个氨基酸。序列分析表明,p53 cDNA序列与GenBank中的旋毛虫p53基因序列相比共有12个核苷酸发生改变,二者的同源性为98%,所编码蛋白质氨基酸序列的同源性为98%。将其克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star(DE3),经IPTG诱导表达后获得约48000的重组蛋白。Western blotting检测证实,p53重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有很好的抗原性。; 孙树民吴秀萍王学林付宝权卢强李莲瑞郭恒P.Boireau陈启军刘明远; 关键词：旋毛虫 P53 CDNA 克隆抗原性

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国家自然科学基金(30328020)