目的:观察小鼠心、肝、脾、肺、肾等器官干扰素诱导蛋白IFIT1(Interferon—induced protein with tetratfieopetide repeats1)的表达情况,探讨颈交感神经阻滞(cervical sympathetic block,SB)对烧伤后早期小鼠各器官IFIT1表达状况的影响.方法:将雄性昆明小鼠18只随机分为正常对照组、烧伤组和颈交感神经阻滞(SB)治疗组、烧伤组和SB治疗组采用体表总面积(Total body surface area,TBSA)15%-20%Ⅲ度小鼠烧伤模型,SB治疗组于烧伤后即刻进行双侧颈交感神经阻滞,各组分别于4h后取心、肝、脾、肺、肾组织,提取RNA,以RT—PCR检测IFIT1表达情况.结果:RT—PCR显示IFIT1在各组的各器官均有表达,并存在差异.烧伤组IFIT1在心、肝、脾表达低于正常组,同时在肺、肾表达高于正常组,差异显著(P〈0.01).SB治疗组IFIT1的表达均低于正常组(P〈0.01);同时,SB治疗组IFIT1在心、肝、肺、肾的表达也低于烧伤组(P〈0.01).另外,在各组内的不同器官的IFIT1表达量存在差异(P〈0.05).结论:烧伤后早期小鼠各器官IFIT1表达有不同的变化,可能与不同器官在烧伤应激反应过程中损伤程度不同有关.SB可显著降低各器官IFIT1的表达.
目的获取小鼠IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1)特异性多克隆抗体。方法扩增培养高效表达IFIT1的重组子pMAL-C2X-IFIT1,超声破碎后的细胞上清过Amylose Pre-packed column亲和层析柱,将所得纯化的融合蛋白MBP-IFIT1作为抗原,添加福氏佐机剂后免疫兔,收集抗血清,用Western blot和ELISA方法测定抗血清特异性反应和效价。结果纯化的MBP-IFIT1可诱导兔产生特异性免疫应答,所得抗体能够特异性识别融合蛋白中的IFIT1,ELISA结果显示其效价为1∶12800。结论MBP-IFIT1具有良好的抗原性,以该融合蛋白为抗原免疫兔成功制备出IFIT1特异性多克隆抗体。
目的:观察小鼠应激相关蛋白IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)和JAB1(c-Jun平activation共处五项原则domain-binding protein 1)在肝脏的表达的细胞定位及氯胺酮对烧伤后早期肝脏IFIT1和JAB1表达的影响,初步探讨氯胺酮调节炎症反应的分子机制。方法:将15只健康C57/129小鼠随机分为3组(n=5),正常对照组、烧伤组、烧伤+氯胺酮组。采用TBSA 15~20%Ⅲ度小鼠烧伤模型;氯胺酮10mg/kg,肌肉注射,烧伤15min给予。分别于烧伤后4h脱臼处死,取肝。采用免疫印迹法(Western blot)察各组肝IFIT1和JAB1的表达情况。取正常对照组肝组织作病理切片,行免疫组织化学方法对IFIT1和JAB1的表达做细胞定位。结果:烧伤组IFIT1表达较正常对照组显著增高(P〈0.01).烧伤组JAB1表达较正常对照组显著降低(P〈0.01):氯胺酮治疗组IFIT1表达较正常对照组、烧伤对照组显著降低(P〈0.01).氯胺酮治疗组JAB1表达较正常对照组显著降低(P〈0.05)、较烧伤组显著升高(P〈0.05)。免疫组织化学方法显示.IFIT1在肝细胞胞浆表达为阳性.JAB1在肝细胞胞浆和胞核均表达为阳性。结论:烧伤早期小鼠肝组织IFIT1表达增高而JJAB1表达降低,氯胺酮可降低烧伤早期小鼠肝组织IFIT1的高表达,增高JAB1表达;氯胺酮可通过调控严重烧伤应激中IFIT1和JAB1的表达而在全身炎性反应综合症(Systemic inflammatory response syndrome SIRS)中发挥作用。
目的检测干扰素诱导蛋白IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)在小鼠各器官组织的表达状况,并在此基础上探讨颈交感神经阻滞(SB)对烧伤后早期小鼠肝脏IFIT1表达的影响。方法雄性C57/129小鼠50只,分为对照组和SB治疗组,TBSA15%~20%Ⅲ度小鼠烧伤模型,分别于烧伤前、烧伤后1、6、12h和24h取肝组织,采用免疫印迹法(Western blot)观察IFIT1的蛋白表达情况,同时提取正常小鼠心、肝、脾、肺、肾、小肠、淋巴细胞和骨骼肌组织RNA,以RT-PCR检测IFIT1表达情况。结果RT-PCR结果显示IFIT1在正常小鼠各组织均有表达,但组织间的表达量存在差异。Western blot结果表明对照组烧伤后肝组织IFIT1表达显著增高(P<0.01),烧伤后SB治疗组IFIT1表达量较对照组相应时相点降低非常显著(P<0.01)。结论IFIT1在小鼠体内广泛表达。SB对严重创伤的治疗作用可能是通过抑制肝内IFIT1表达来实现的。