国家教育部博士点基金(D002003003)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：中山大学附属第二医院广东省中医院东莞市人民医院更多>>
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- 含NURR1基因腺病毒修饰神经干细胞移植治疗帕金森病的试验
- 2006年
- 目的:观察含NURR1基因腺病毒修饰的C17.2神经干细胞移植治疗对帕金森病模型症状和组织学的改善。方法:实验于2004-03/2005-01在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。6-羟基多巴脑内立体定向及单侧纹状体两点定位注射制作SD大鼠帕金森病模型,1周后,行阿朴吗啡行为学检测,即阿朴吗啡(0.5mg/kg)腹腔内注射后30min内,计数大鼠平均每分钟身体旋转360°的次数,达到6圈/min及以上者为合格帕金森病模型,每周测1次,连续4周,获取稳定动物模型共31只,分为帕金森病模型对照组10只、帕金森病+C17.2组11只、帕金森病+C17.2+腺病毒组10只,无菌收集所需的C17.2神经干细胞、含NURR1基因腺病毒载体修饰C17.2神经干细胞,浓度为(1.0～4.0)×109L-1细胞,对入组的帕金森病模型进行无菌细胞注射移植,注射点与造模时注射点相同,每点约3μL,帕金森病模型对照组注射生理盐水。细胞移植后10d和4周进行阿朴吗啡诱发的帕金森病模型旋转试验,免疫组化检测帕金森病模型纹状体内酪氨酸羟化酶阳性神经元数量。结果:在实验过程中又有4只死亡,共有27只帕金森病模型鼠进入试验。①帕金森病模型旋转圈数:移植后10d和4周帕金森病+C17.2组和帕金森病+C17.2+腺病毒组均少于帕金森病模型对照组,帕金森病+C17.2+腺病毒组少于帕金森病+C17.2组(移植后10d:帕金森病模型对照组21.57±5.26,帕金森病+C17.2组3.90±0.90,帕金森病+C17.2+腺病毒组1.56±0.58;移植后4周:帕金森病模型对照组18.40±5.84,帕金森病+C17.2组3.60±0.67,帕金森病+C17.2+腺病毒组1.00±0.55,P<0.05)。②纹状体内酪氨酸羟化酶阳性细胞数:移植后10d帕金森病+C17.2组和帕金森病+C17.2+腺病毒组多于帕金森病模型对照组,帕金森病+C17.2+腺病毒组多于帕金森病+C17.2组(帕金森病模型对照组3.50±0.67,帕金森病+C17.2组13.17±1.89,帕金森病+C17.2+腺病毒组20.50±1.67,P<0.05)。结�
- 李庆军周道友肖颂华刘军江东新邢诒刚
- 关键词：腺病毒科帕金森病基因
- 含有NuRR1基因的重组复制缺陷性腺病毒的构建和鉴定被引量：4
- 2004年
- [目的]构建并鉴定携带NURR1基因的重组复制缺陷腺病毒高效表达载体,为基因调控神经于细胞分化后治疗 帕金森病奠定基础。[方法]将测序鉴定正确的NURR1基因插入穿梭质粒pTrack-CMV后,与Adeasy整合,重组Adeasy质粒在 肾293A细胞内包装成病毒,PCR鉴定并测定病毒滴度,电镜鉴定病毒颗粒。[结果]成功构建的穿梭质粒pTrack-CMV-MURR1 与pAdeasy整合后,重组Adeasyr质粒在肾293A细胞内包装和复制时,细胞病变效应(cytopathogenic effect,CPE)明显,PCR鉴 定病毒DNA中有NURR1基因,病毒滴度测试表明病毒含量高,电镜显示病毒为多面体。[结论]成功构建出含有NURR1基因 的重组复制缺陷性腺病毒表达载体。
- 李庆军刘军赵东晖肖颂华黎祥喷沈庆煜阎俊邢诒刚
- 关键词：NURR1基因腺病毒细胞内电镜病毒滴度性腺
- 6-羟基多巴对C17.2神经干细胞毒性及NURR1基因对其保护作用被引量：7
- 2004年
- 【目的】初步鉴定C17.2神经干细胞的特性并研究不同浓度6-羟基多巴对C17.2神经干细胞毒性及NURR1基因对C17.2神经干细胞的保护作用。【方法】免疫组化检测神经干细胞特异性抗原nestin,X-gal染色检测LacZ基因的表达,流式细胞仪检测剂量为0.02、0.04、0.06g/L6-羟基多巴在添加含有NURR1基因的重组复制缺陷性病毒前后诱发神经干细胞的坏死和凋亡。【结果】C17.2神经干细胞nestin抗原染色阳性,绝大部分细胞呈X-gal染色阳性,0.02g/L时6-羟基多巴以诱导神经干细胞凋亡为主,随着剂量增加,细胞坏死增多,0.06g/L时则以神经干细胞的坏死为主,NURR1基因过表达能明显减少神经干细胞的坏死和凋亡。【结论】C17.2神经干细胞具有明显的特性,6-羟基多巴诱发的C17.2神经干细胞凋亡或坏死与其剂量有关,NURR1基因对神经干细胞有保护作用。
- 李庆军刘军肖颂华阎俊黎祥喷邢诒刚
- 关键词：神经干细胞6-羟基多巴NURR1基因流式细胞仪多巴胺能神经元
