北京市自然科学基金(7062009)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：张玉祥余和芬周少贞李相辉张凯举更多>>
- 相关机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种高效扩增小片段DNA方法的建立
- 2011年
- 目的建立一种高效扩增小片段DNA的方法。方法 本方法利用单链DNA连接酶(single strand DNA ligase,ssDNA ligase)可以连接单链DNA的性质将小片段DNA自连成环,随后利用phi29DNA聚合酶进行恒温的滚环复制,将扩增产物进行酶切,得到了扩增后的小片段DNA。结果 单链DNA连接酶可以有效的将30bp的小片段DNA自连成环,phi29DNA聚合酶可以扩增出大于10kb的DNA片段,扩增产物经酶切后又可进行第二轮扩增,并且证明了其成环方式为自成环。结论 通过单链成环后滚环复制的这种方法可以有效的将小片段DNA进行扩增,解决了PCR无法扩增小片段DNA的问题,并有着广阔的应用前景。
- 李岩李珊珊张玉祥
- Rab5在胰腺癌细胞BxPC3中对Notch1活性的调节被引量：1
- 2008年
- 目的本研究拟阐明内吞调节蛋白Rab5在Notch活化中的作用。方法用RNA干扰的方法抑制BxPC3细胞中Rab5蛋白的表达,用Western blot测定Notch1活性型Notch ICD的表达。用Wortmannin和LY294002抑制PI3激酶的活性,观察Notch活性的变化。结果抑制Rab5蛋白的表达,或者抑制PI3激酶的活性后,Notch1的活性型Notch ICD的表达量均显著下降,同时BxPC3细胞的生长受到抑制。结论在胰腺癌细胞BxPC3中内吞调节蛋白质Rab5和PI3激酶在Notch活化中起着关键的作用,提示Notch的活化依赖于内吞。
- 张娟余和芬王泽生张玉祥
- 关键词：胰腺癌BXPC3NOTCH1WORTMANNINLY294002内吞
- 人源性Notch1跨膜段真核表达载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建人源性Notch1跨膜段(notch1 transmembrane domain,NTM)真核表达载体pcDNA3-NTM,并观察其在真核细胞中的表达。方法通过反转录-聚合酶链反应从人胰腺癌细胞系BxPC3细胞中获得编码Notch1跨膜段的cDNA,定向克隆至C端带flag蛋白标签序列的真核表达载体pcDNA3中,经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内Notch1跨膜区的表达。结果构建了真核表达载体pcDNA3-NTM,将其转染HeLa细胞48h后,蛋白免疫印迹法检测到细胞内Notch1跨膜段的表达显著增高。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3-NTM,为研究Notch信号的活化机制及其在胰腺癌发生发展中的作用奠定了基础。
- 张凯举余和芬张玉祥
- 关键词：NOTCH信号NTM人胰腺癌
- EGFR基因启动子区甲基化状态分析被引量：6
- 2010年
- 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是HER/ERB-B跨膜受体激酶家族成员之一.EGFR的过表达促进细胞的增殖、存活和迁移,与许多实体瘤病人的低存活率相关.EGFR的表达受其启动子DNA甲基化调控.EGFR的转录沉默与CpG岛高甲基化相关.EGFR基因5′调控区包括1个富含GC的启动子,缺保守序列TATA盒和CAAT盒,有多个位点可以起始转录.本实验运用Bisulfite Sequencing PCR(BSP)方法检测了2种肿瘤细胞HeLa(EGFR+)和K562(EGFR)EGFR基因-1300～+600的甲基化状态.所检测目的片段共包含178个CpG位点.发现EGFR阳性与EGFR阴性两种细胞系的甲基化状态不同:宫颈癌细胞系HeLa转录起始点附近包括第一外显子区(-244～+91)处于非甲基化状态,白血病细胞系K562转录起始点附近包括第一外显子区呈嵌合性的高甲基化状态.因此,第一外显子比启动子区的甲基化状态更能反映基因的活化状况.
- 周少贞李相辉张玉祥
- 关键词：表皮生长因子受体基因启动子甲基化
