福建省自然科学基金(2011J01134)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- TK1和TIMP1基因共表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建含人组织激肽释放酶1(hTK1)和基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP1)基因的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中的表达。方法选择相对应酶切位点,酶切含人TIMP1基因片段的原始质粒和腺病毒穿梭质粒pDC316,经连接、热激、转化等亚克隆而构建成重组穿梭质粒。之后,应用限制性内切酶BglⅡ/SalⅠ,酶切含启动子和hTIMP1基因片段,再通过回收片段以及连接、热激等步骤亚克隆至pDC316-hTK1载体中,构建含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组病毒穿梭质粒。利用AdMax腺病毒Cre/loxP重组酶系统,将该质粒和骨架病毒质粒于293A细胞中同源重组包装产生双基因的重组腺病毒载体。采用Western blot测定在VSMCs中的表达。结果经PCR、双酶切和测序证实,重组病毒穿梭质粒pDC316-hTIMP1-EGFP和pDC316-hTK1-hTIMP1构建正确。在293A细胞里成功包装产生含双基因的重组腺病毒载体Ad5-hTK1-hTIMP1感染VSMCs后,hTK1和hTIMP1蛋白呈独立高表达,表达水平呈浓度依赖性增加。结论首次成功构建并包装了含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组腺病毒载体,目的蛋白在VSMCs中呈现独立高表达。
- 余惠珍向红黄舒洁朱鹏立潘玮张枫
- 冠脉结扎法在大鼠急性心肌梗死模型制作中的应用被引量：6
- 2016年
- 目的 探讨冠脉结扎法制作大鼠急性心肌梗死模型.方法 40只Sprauge-Dawley大鼠随机分为冠脉结扎组和假手术组.大鼠经麻醉后,气管插管连接小动物呼吸机,打开左侧胸腔,暴露心脏,结扎组结扎左冠状动脉前降支,假手术组只用线穿过左前降支而不结扎.手术前后均行心电图检查,4周后行血流动力学检测,取出心脏,观察其外形变化,行HE染色后于显微镜下观察其病理变化.结果 冠脉结扎组制作心梗模型成功率为100％,术后存活率为65％;假手术组术后存活率为80％.冠脉结扎组术后4周取出的心脏,左心室较假手术组扩大,缺血区室壁变薄.结论 冠脉结扎法制作大鼠心肌梗死模型,效果稳定,成功率高,制作方便,经济易推广.
- 余惠珍高洁郑熙朱鹏立
- 关键词：急性心肌梗死动物模型
- 人组织激肽释放酶1和基质金属蛋白酶组织抑制物1基因共表达抑制大鼠颈动脉球囊拉伤后内膜增生被引量：3
- 2016年
- 目的将介导人组织激肽释放酶1（hTK．1）和人基质金属蛋白酶组织抑制物1（hTIMP—1）基因共表达的重组腺病毒载体转染大鼠颈动脉球囊损伤模型，探讨其对颈动脉球囊损伤后血管内膜增生的影响及可能的机制。方法将46只雄性Sprague—Dawley大鼠按照体重编号后，采用随机数字表法随机分为假手术组（6只）、单纯拉伤组（8只）、对照病毒组（8只）、hTK-1组（8只）、hTIMP-1组（8只）和双基因组（8只）。除假手术组外，其余各组均构建大鼠颈动脉球囊损伤模型，并分别在大鼠球囊损伤处注射生理盐水、对照病毒、hTK-1重组腺病毒、hTIMP-1重组腺病毒、hTK-1和hTIMP-1-基因共表达重组腺病毒。14d后，处死大鼠并取材。苏木精-伊红（HE）染色后比较内膜增生程度；采用共聚焦免疫荧光观察hTK-1和hTIMP．1基因的表达；采用Westernblot检测hTK-1、hTIMP-1、基质金属蛋白酶2（MMP．2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达水平；采用免疫组织化学法检测内膜增殖细胞核抗原（PCNA）的表达水平。结果（1）单纯拉伤组、对照病毒组与假手术组比较，颈动脉内膜面积、内膜与中膜面积比值均较大，MMP-2、MMP-9和PCNA表达水平均较高（P均〈0．01）。对照病毒组与单纯拉伤组比较，颈动脉内膜面积、内膜与中膜面积比值、MMP-2、MMP-9和PCNA表达水平差异均无统计学意义（P均〉0．05）。（2）对照病毒组、hTK-1组、hTIMP-1组和双基因组的内膜面积分别为（0．160±0．010）、（0．110±0．015）、（0．121±0．016）和（0．081±0．008）mm^2，其中hTK-1组与hTIMP-1组间差异无统计学意义（P〉0．05），其余各组间差异均有统计学意义（P均〈0．01）；内膜与中膜面积比值分别为2．035±0．117、1．443±0．097、1．522±0．078和0．972±0．072，其中hTK-1组与hTIMP-1组间差异无统计学意义（P〉0．05），其余各组�
- 余惠珍张枫朱鹏立潘玮黄舒洁向红
- 关键词：血管内膜增生基质金属蛋白酶类
