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大鼠气管损伤修复过程中ABCG2转运蛋白的表达被引量：10: 2006年; 目的观察离体大鼠气管上皮损伤修复过程中气管干细胞的动态变化.方法用氟脲嘧啶（5-FU）造成离体大鼠气管上皮损伤,应用间接免疫荧光法和Western blotting动态观测了修复过程中各时间点气管上皮ABCG2的表达.结果 1.5-FU作用12 h后大部分气管上皮脱落,残留的G0期细胞中部分可见ABCG2表达阳性.去除5-FU后3 h细胞数目增多,为扁平状,ABCG2阳性细胞数也随之增多;6～9 h上皮细胞由扁平变为立方,ABCG2阳性细胞数继续增多;24 h上皮细胞呈立方状,并连接成片,ABCG2阳性细胞较前明显减少;48 h气管上皮接近恢复假复层结构,此时仅见极少量ABCG2阳性细胞.正常气管上皮未检测到ABCG2表达.2.Western blotting分析表明,ABCG2表达量的变化趋势与免疫荧光结果一致.结论 ABCG2的表达与干细胞的数量呈正相关,可作为气管干细胞的标志物.; 王琳琳贾兰玲贾心善; 关键词：ABCG2 干细胞氟脲嘧啶间接免疫荧光法免疫印迹法

Wnt-1在大鼠气管干细胞早期增殖与分化过程中的表达被引量：5: 2006年; 目的检测Wnt-1在大鼠气管上皮损伤修复中的表达及其变化,探讨影响气管干细胞早期增殖分化的分子调控机制。方法氟脲嘧啶(5-FU)作用大鼠离体气管,去除5-FU后分别于0、6、12、24及48 h用Westernblotting及免疫组织化学方法检测气管上皮中Wnt-1的表达。结果5-FU损伤后12 h,气管上皮脱落,仅残留少量G0期细胞表达Wnt-1;去除5-FU后6 h,上皮细胞数目增多,呈扁平状间断分布,Wnt-1表达最强;12 h后,上皮细胞呈立方状,并连接成片,Wnt-1表达逐渐减少;恢复48 h,气管上皮内出现假复层结构,仅见极少量Wnt-1阳性细胞。正常气管上皮Wnt-1表达极少。结论Wnt-1时间依赖性表达与气管上皮损伤修复进程相吻合,说明其在气管干细胞早期增殖分化中起重要调控作用。; 吕威力贾心善; 关键词：WNT-1 气管干细胞分化免疫印迹法

气管干细胞分化过程中Shh信号通路的动态观察: 2005年; 目的:探讨大鼠气管上皮损伤后,气管干细胞增殖分化过程中Shh信号通路的动态变化。方法:应用5-氟尿嘧啶(5-FU)诱发气管上皮损伤,通过RT-PCR检测气管上皮Shh的表达。结果:5-FU作用30 m in后大鼠气管上皮细胞绝大部分脱落,仅残留少量裸核样G0期细胞位于基底膜上。之后细胞数目逐渐增多,经过扁平、立方形态,向纤毛细胞、黏液细胞、基底细胞等分化,去除5-FU后48 h接近恢复假复层纤毛柱状上皮;正常气管上皮及5-FU作用30 m in气管上皮Shh无表达,去除5-FU恢复3 h后Shh轻度表达,6 h后表达增强,12 h达高峰,之后表达减弱,48 h已极微弱。结论:Shh参与了气管干细胞的增殖分化过程。; 廖爱军贾心善周莹; 关键词：SHH 干细胞分化

大鼠海马神经细胞原代培养及塑料孔板原位鉴定: 2009年; 目的原代培养大鼠海马神经细胞,探讨简单、有效的塑料孔板原位鉴定方法。方法采用Hiroaki等的方法并做了改良,在塑料孔板里进行胎鼠海马神经细胞原代培养,7d后分别用传统和改良的甲苯胺蓝(TB)染色法、改良的神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)染色法对海马神经细胞进行鉴定。结果无血清细胞培养法神经细胞结构特征明显,能形成明显的神经网络结构。传统的TB染色法染色单一,均为淡蓝色;改良的TB染色法红蓝匹配,对比度好;改良的免疫组化NSE染色法胞质阳性。结论无血清培养法是海马神经细胞培养的理想方法,塑料孔板细胞培养原位染色简单易行,对细胞及分子水平研究有重要意义。; 贾兰玲陈相庹航行贾心善陈颖李继光; 关键词：海马神经细胞原代培养甲苯胺蓝

大鼠体内气管损伤修复过程及气管干细胞的定位研究被引量：9: 2005年; 目的观察大鼠体内气管损伤修复过程,进行气管干细胞的定位。方法应用氟尿嘧啶(5FU)诱发在体气管上皮损伤,动态观察修复过程;对损伤后气管上皮细胞行Hoechst33342荧光染色,并用RTPCR法检测ABC转运蛋白ABCG2/bcrp1基因。结果1.5FU作用30min后大鼠气管上皮细胞绝大部分脱落,可见少量间隔分布的类似裸核的细胞呈钉状位于基底膜上,免疫组化检测增殖细胞核抗原阴性,证明为G0期细胞。其中部分细胞Hoechst33342染色阴性,为侧群(sidepopulation,SP)细胞。2.将5FU去除3-6h后,上皮细胞形态变为扁平,9-12h后细胞变为立方,细胞数目逐渐增多,24h上皮细胞数更多,连接成片,可见纤毛,48h接近恢复假复层纤毛柱状上皮。3.RTPCR检测ABCG2/Bcrp1阳性反应产物长度为272bp。结论5FU打击后,残余的G0期气管上皮细胞中含有干细胞。; 廖爱军贾心善曲杨; 关键词：气管干细胞氟尿嘧啶 ABC转运蛋白

氟尿嘧啶诱发人支气管损伤修复过程及支气管干细胞的定位被引量：14: 2003年; 目的　观察离体人支气管损伤修复过程 ,进行支气管干细胞的定位。方法　取肺癌手术切除的人支气管的正常部分进行组织培养 ,应用氟尿嘧啶 (5 FU)诱发支气管上皮损伤 ,动态观察修复过程 ,用免疫组化SP法检测PCNA ,β1 整合素及CK 19的表达 ,同时进行Hoechst33342荧光染色。结果　 1. 5 FU作用 12h后人支气管上皮细胞绝大部分脱落 ,可见少量间隔分布的类似裸核的细胞呈钉状位于基底膜上 ,PCNA染色阴性 ,证明为G0 期细胞。其中部分细胞Hoechst33342染色阴性。 2 .将 5 FU去除 3～ 6h后 ,细胞形态变为扁平 ,PCNA染色见核染色阳性的细胞与阴性细胞 (G0期细胞 )间隔分布 ;12h后细胞变为立方 ,细胞数目逐渐增多 ,到 4 8～ 72h恢复假复层柱状上皮。 3.β1 整合素及CK 19在已分化细胞中呈阳性反应。结论　在 5 FU的打击下 ,进入增殖期细胞死亡、脱落 ,仅余G0 期细胞 ,其中含有支气管干细胞。正是这些干细胞增殖分化使支气管上皮修复。; 周莹贾心善丁强; 关键词：氟尿嘧啶支气管免疫组织化学

ABCG2/Bcrp1可能是大鼠气管上皮干细胞的标记物: 2008年; 目的:探索气管上皮干细胞的表面标记物。方法:取2周龄的Wistar大鼠,取出气管环,5-FU损伤12h后,取气管上皮涂片进行增殖细胞核抗原、ABCG2/Bcrp1抗原染色、RT-PCR检测ABCG2/Bcrp1基因表达。结果:5-FU损伤后大鼠气管上皮气管环的上皮全部脱落,残留间隔分布的裸核样细胞,基底膜完整。气管上皮涂片免疫组织化学染色可见PCNA染色阳性的细胞与阴性细胞间隔分布,间接免疫荧光染色可见ABCG2/Bcrp1阳性细胞;RT-PCR检测ABCG2/Bcrp1阳性反应产物与预计长度符合。结论:ABCG2/Bcrp1可以作为气管上皮干细胞的标记,为进一步分离纯化扩增奠定基础。; 丁强杨扬贾心善孙善亮马小波; 关键词：气管上皮干细胞氟脲嘧啶

组蛋白去乙酰化酶1在人支气管干细胞增殖分化过程中的时空表达: 目的检测组蛋白去乙酰化酶1在气管干细胞增殖分化过程中动态表达情况,并探讨其在气管干细胞增殖分化过程中的作用。方法取因肺癌肺叶切除组织中取距肺癌组织2cm处支气管进行组织培养,应用氟尿嘧啶（5-FU）诱发支气管上皮损伤。免...; 曲杨贾心善; 文献传递

5-氟尿嘧啶诱发人支气管上皮损伤前后P糖蛋白表达的研究: 2006年; 目的:研究离体人支气管上皮经5-氟尿嘧啶(5-FU)损伤前后P糖蛋白(P-gp)的表达。方法:5-FU造成离体人支气管环严重损伤,分别取正常组及5-FU作用后的支气管上皮,应用流式细胞仪和蛋白印迹法检测P-gp的表达;RT-PCR法检测其mRNA的表达。结果:5-FU作用后支气管上皮细胞中P-gp阳性细胞所占比例较正常组增高,在蛋白及mRNA水平,5-FU作用后支气管上皮P-gp的表达均较正常组增加。结论:5-FU作用后,表达P-gp的支气管干细胞占残留活细胞的比例增多,由它们完成损伤的修复。; 周莹贾心善廖爱军; 关键词：支气管干细胞 5-氟尿嘧啶 P糖蛋白

Wnt信号通路在大鼠气管干细胞增殖分化过程中的时空表达: 2008年; 背景:实验前期项目已协同有关人员创立了体外观察气管干细胞的模型,并解决了气管干细胞的定位、分离及性状分析。但在气管干细胞的增殖分化过程中,究竟有哪些基因参与及其各自作用、气管干细胞可产生功能细胞的分化程序至今仍不清楚。目的:利用氟尿嘧啶诱发离体气管上皮损伤,检测气管干细胞增殖分化损伤重建过程中Wnt信号途径成员的时空表达变化。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-06/2007-06在沈阳医学院中心实验室完成。材料:清洁级2周龄Wistar大鼠18只,用于制备离体气管环。氟尿嘧啶由天津人民制药厂生产。方法:将镜下观察纤毛摆动情况良好的气管环分为两组:损伤组将气管环置于含12.5mg/L氟尿嘧啶的HamsF-12液中,作用12h后去除氟尿嘧啶,换成新鲜的HamsF-12液继续培养,分别于3,6,12,24,48h取部分等量组织块。对照组用等体积HamsF-12液代替氟尿嘧啶,其余培养条件及取材时间同损伤组。主要观察指标:RT-PCR法检测气管上皮中Wnt-1、β-连环蛋白、T细胞因子、c-myc基因表达的变化。结果:氟尿嘧啶作用12h后,光镜下可见少数间隔分布、近于裸核的细胞,呈钉状位于基底膜上,前期实验已证明其为气管干细胞。RT-PCR结果显示,对照组气管上皮无Wnt-1和T细胞因子mRNA的表达,β-连环蛋白与c-myc mRNA轻度表达。损伤组经氟尿嘧啶作用后,可检测到Wnt-1 mRNA的表达,β-连环蛋白mRNA一时性轻度下降;Wnt-1、β-连环蛋白、T细胞因子、c-myc mRNA分别于去除氟尿嘧啶后3,6,12h达到高峰;24h后三者mRNA表达水平均下调;至48hWnt-1 mRNA无表达,后三者mRNA少量表达。结论:在整个气管上皮重建过程中,Wnt1、β-连环蛋白、T细胞因子和c-myc mRNA的表达变化基本遵循相似的规律,提示Wnt信号通路作为一个整体参与气管干细胞增殖分化过程的调控。; 吕威力邢雪松; 关键词：气管干细胞 WNT-1 Β-连环蛋白 T细胞因子

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