国家质检总局科技计划项目(2009IK011)
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
- 相关作者：季新成张玲郑培刘小兰员丽娟更多>>
- 相关机构：新疆出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 新疆地区牛新孢子虫病血清抗体检测及结果分析被引量：4
- 2011年
- 为了解新疆地区牛新孢子虫病的流行情况,用ELISA方法对采自新疆6个地区327份的牛血清进行了新孢子虫病的抗体检测,并以第一次检测结果为依据,对20头牛进行了5次连续采样检测,每次间隔30～40天。检测结果表明,该病在新疆不同地区都有不同程度的发生和流行,平均阳性率为24.5%,且在年龄大和流产牛群中阳性率偏高,血清抗体阳性持续时间至少半年以上。
- 刘小兰张军张玲季新成
- 关键词：血清抗体ELISA检测
- 牛新孢子虫二温式PCR检测方法的建立与应用被引量：5
- 2011年
- 根据已发表的犬新孢子虫种属特异性基因片段Nc-5基因序列设计合成一对特异性引物,采用均匀设计方法对引物浓度、Mg2+浓度、dNTP、Taq酶和退火温度进行了优化,建立了检测牛新孢子虫的二温式PCR方法。该方法对牛新孢子虫DNA的检测灵敏度为23.5 fg/反应。应用该方法对50份全血和8份流产胎儿样本进行了检测,有3份全血和1份流产胎儿样本为阳性。与三步法PCR相比较,该二温式PCR方法检测时间缩短了30 min,且方法具有快速、灵敏、准确、特异等优点,可用来对牛新孢子虫病的检测。
- 季新成王文牛国辉郑培张玲
- 关键词：新孢子虫二温式PCR均匀设计
- 牛新孢子虫内标双重荧光PCR检测方法的建立被引量：3
- 2012年
- 为建立牛新孢子虫的快速准确检测方法,根据犬新孢子虫种属特异性基因Nc-5序列,设计高度保守的引物和荧光探针,通过引物设计和搭桥PCR法扩增,获得Nc-5荧光PCR内标模板。对内标模板的添加量和反应条件进行优化,建立了牛新孢子虫内标双重荧光PCR检测体系。该方法具有较好的特异性;可以检测到10个拷贝/PCR反应的核酸分子,与不加内标的荧光PCR检测灵敏度相当;通过对系列稀释的核酸样品的重复性检测,变异系数为0.50%～1.30%。通过对58份临床样品分别用该方法、不含内标的荧光PCR方法和普通PCR方法检测,结果显示,该方法与不含内标的荧光PCR方法的阳性检出率均为10.3%,比普通PCR方法阳性检出率(7.0%)高;表明该方法可用于临床样品中牛新孢子虫的快速检测,并能对实验室进行质量控制。
- 季新成段晓东黄玲牛国辉郑培刘小兰
- 关键词：犬新孢子虫内标
- 新孢子虫荧光PCR检测方法的研究被引量：4
- 2012年
- 根据已知的犬新孢子虫种属特异性基因片段Nc-5基因序列,设计荧光定量PCR引物和荧光探针,经反应条件的优化,建立了检测新孢子虫的荧光定量PCR方法。该方法的检测灵敏度为10拷贝/反应。通过对系列稀释的重组质粒进行重复性检测,Ct值的变异系数为0.50%~1.18%。应用该方法对50份牛全血和8份流产胎儿样本进行检测,有5份全血和1份流产胎儿样本为阳性,阳性检出率均为10.3%,比普通PCR方法阳性检出率（7%）高。且具有较好的特异性和可重复性,可用来对新孢子虫病快速准确检测。
- 员丽娟史茜季新成牛国辉
- 关键词：新孢子虫荧光PCR
