国家质检总局科技计划项目(2009IK003)
- 作品数：3 被引量：43H指数：3
- 相关作者：杨俊兴阮周曦吕建强曹琛福孙洁更多>>
- 相关机构：深圳出入境检验检疫局云南出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立被引量：20
- 2009年
- 根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度至少高出100倍。表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。
- 曾少灵花群义张彩虹曹琛福秦智锋阮周曦杨俊兴卢体康吕建强孙洁陈兵林庆燕杨云庆
- 关键词：非洲猪瘟病毒聚合酶链反应
- 非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立被引量：16
- 2013年
- 为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。
- 曾少灵廖立珊唐金明杨俊兴阮周曦张彩虹曹琛福吕建强秦智锋林庆燕孙洁叶弈优谢晓露花群义
- 关键词：非洲猪瘟病毒间接ELISA
- 非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法的建立被引量：18
- 2010年
- 依据非洲猪瘟病毒(ASFV)的vp73基因保守序列,设计了特异性引物与TaqMan探针,扩增片段69bp,建立了ASFV实时荧光PCR检测方法。与OIE推荐用于检测ASFV的实时荧光PCR和普通PCR方法进行比对,结果显示,本文建立的方法与OIE两种检测方法的特异性相当,灵敏度与OIE荧光PCR方法相当,但比普通PCR方法高出至少10倍。标准定量曲线显示,本文方法最低检测限可达10 copies/μL病毒DNA(相关系数为0.993046)。重复性试验的批内CV值为0.61%～1.14%,批间CV值为1.37%～3.14%,表明本文方法的重复性和稳定性良好。可见,本文建立的基于vp73基因的ASFV实时荧光PCR检测方法具备快速、准确、灵敏的特点,将为检验检疫部门防御ASFV传入我国提供更多技术支持。
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- 关键词：非洲猪瘟病毒实时荧光PCR
