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国家高技术研究发展计划(2003AA001039)

作品数:14 被引量:39H指数:4
相关作者:黄日波韦宇拓齐向辉孟晓蕾唐悦更多>>
相关机构:广西大学广西科学院南宁中诺生物工程有限责任公司更多>>
发文基金:国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域:生物学医药卫生理学更多>>

文献类型

  • 14篇中文期刊文章

领域

  • 13篇生物学
  • 1篇医药卫生
  • 1篇理学

主题

  • 7篇基因
  • 6篇杆菌
  • 6篇大肠杆菌
  • 5篇脱水酶
  • 5篇甘油
  • 5篇甘油脱水酶
  • 4篇克隆
  • 4篇1,3-丙二...
  • 3篇酶学性质
  • 3篇丙二醇
  • 3篇纯化
  • 2篇1,3-丙二...
  • 2篇LACTOB...
  • 1篇丁酸
  • 1篇丁酸梭菌
  • 1篇氧化还原酶
  • 1篇杂合酶
  • 1篇梭菌
  • 1篇重组菌
  • 1篇株产

机构

  • 13篇广西大学
  • 4篇广西科学院
  • 1篇广西亚热带生...
  • 1篇南宁中诺生物...

作者

  • 13篇黄日波
  • 11篇韦宇拓
  • 6篇齐向辉
  • 4篇孟晓蕾
  • 3篇唐悦
  • 3篇杨登峰
  • 2篇周兴
  • 2篇韦旭钦
  • 2篇周文广
  • 1篇黄志民
  • 1篇陈云来
  • 1篇杜丽琴
  • 1篇黄鲲
  • 1篇吴杰群
  • 1篇左文朴
  • 1篇黄志明

传媒

  • 3篇广西农业生物...
  • 3篇生物加工过程
  • 1篇工业微生物
  • 1篇生物技术
  • 1篇科学通报
  • 1篇化工学报
  • 1篇生物化学与生...
  • 1篇精细化工
  • 1篇中国生物工程...
  • 1篇Scienc...

年份

  • 2篇2008
  • 1篇2007
  • 7篇2006
  • 2篇2005
  • 2篇2004
14 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
丁酸梭菌1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量:2
2008年
以丁酸梭菌(Clostridium butyricum)基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增得到1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT,将它连接到pMD 18-T载体上,得到重组质粒pMD-dhaT,对此重组质粒进行序列测定,对其DNA序列分析表明,dhaT基因全长为1 158 bp。将dhaT基因插入表达载体pSE-380中,构建成重组子pSE-dhaT,并在大肠杆菌JM109中进行诱导表达。研究表明,以1,3-丙二醇为底物时,基因工程菌在37℃下,以1.0 mmol/L IPTG诱导14h,酶活力达到16.28 U/mL,比原始菌株提高5.6倍。
杨登峰韦宇拓黄日波
关键词:克隆丁酸梭菌氧化还原酶3-丙二醇
Rational design of glycerol dehydratase:Swapping the genes encoding the subunitsof glycerol dehydratase to improve enzymatic properties被引量:4
2006年
1,3-propanediol (1,3-PD) is an important material for chemical industry,and there has been always much interest in the production of 1,3-PD using all possible routes. The genes encoding glyc-erol dehydratase (GDHt) from Citrobacter freundii,Klebsiella pneumoniae and metagenome were cloned and expressed in E. coli. All glycerol dehy-dratases but the one from metagenome could be detected to show enzyme activities. In order to im-prove the enzymatic properties of GDHts,the genes encoding α and β-γ subunits were cloned,and the enzyme characteristics were evolved by rational de-sign based on their 3D structures which were con-structed by homology modeling. Six heteroenzymes were obtained by swapping the α subunit genes of these three different-source-derived GDHts. The pH,thermal stability and Vmax of some heteroenzymes were dramatically improved by 2―5 times compared with the wild one (GDHtKP). The GDHt cloned from metagenome,originally proved to be with no enzyme activity,was converted into active enzyme by swap-ping its subunits with other different GDHts. In addi-tion,the effect of subtle 3D structural changes on the properties of the enzyme was also observed.
QI XianghuiSUN LiangLUO ZhaofeiWU JiequnMENG XiaoleiTANG YueWEI YutuoHUANG Ribo
关键词:甘油脱水酶基因克隆
甘油脱水酶的理性设计:基因杂合改善酶的性质被引量:1
2006年
1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,越来越受到广泛的关注.以弗氏柠檬酸菌和克雷伯氏菌的总DNA以及宏基因组为模板,克隆并表达了3个不同来源的甘油脱水酶基因,前两者均有活力,而后者则没有活力.为了改造甘油脱水酶使其更有利于工业化生产,通过同源建模(homology modeling)构建了这3个甘油脱水酶的三维结构,并利用一些生物信息学软件对这3个甘油脱水酶进行亚基之间的杂合改组(gene swapping)的理性设计,根据设计结果对这3种不同来源的甘油脱水酶的大、中小亚基基因分别进行了克隆.通过基因交换的方法对甘油脱水酶大、中小亚基进行了杂合,得到6种异源亚基杂合酶.部分杂合酶的酸碱稳定性、热稳定性及Vmax得到了明显的改善,同时杂合改组使本没有活力的来源于宏基因组的甘油脱水酶具有了活力而且杂合酶的热稳定性也得到了显著提高.根据构建的三维结构分析了结构差异对酶学性质的影响.
齐向辉罗兆飞吴杰群孟晓蕾唐悦韦宇拓黄日波
关键词:甘油脱水酶宏基因组基因置换杂合酶
巴斯德梭菌甘油脱水酶基因的克隆表达、纯化及酶学性质的研究被引量:4
2006年
用聚合酶链反应(PCR)技术,从巴斯德梭菌(Clostridium pasteurianum)扩增出甘油脱水酶基因(dhaBCE),在大肠杆菌中高效表达,SDS—PAGE(聚丙烯酰胺凝胶)电泳结果显示,分别有相对分子质量为66、21、16kD三条特异性蛋白表达条带。用金属镍亲和层析及S-300H凝胶层析将重组蛋白进行分离纯化,所得纯酶的比活为4·26U/mg。重组酶的最适反应温度42~44℃,最适作用pH=9.10~9.50,它对三个底物结构类似物的米氏常数(Km)值分别是:1,2-丙二醇0.38mmol/L,甘油0.29mmol/L,1,2-乙二醇2.0mmol/L;对辅酶B12的Km值为0.22μmol/L。
唐悦孟晓蕾齐向辉韦宇拓黄日波
关键词:甘油脱水酶基因表达酶学性质
大肠杆菌yqhD基因的克隆与表达被引量:1
2005年
以大肠杆菌E scherich ia coli K-12基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增得到假定的氧化还原酶(pu tative ox idoreductase)基因yqhD,将它连接到克隆质粒pGEM-3zf(+)上,得到重组质粒pGEM-yqhD,对此重组质粒进行序列测定,对其DNA序列分析表明,yqhD基因全长为1 164 bp。再将yqhD基因插入表达载体pSE 380,构建成重组子pSE 380-yqhD,并在E.coli BL 21中获得表达。研究表明,以1,3-丙二醇为底物时,基因工程菌在30°C下,以1.0 mm o l/L IPTG诱导12 h的酶活力达到3.13 U/mL,比对照菌株提高4.4倍。
韦旭钦韦宇拓黄日波
关键词:大肠杆菌
克雷伯氏菌1,3-丙二醇氧化还原酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量:8
2004年
以基因组DNA为模板,利用PCR技术从克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)中扩增得到含有1,3丙二醇氧化还原酶基因(dhaT)的DNA片段,将其定向连接到克隆质粒pGEM-3zf上,得到重组质粒pGEMdhaT。将此重组质粒转化到受体菌EscherichiacoliDH5α中,通过蓝白斑鉴定挑选出阳性菌株。DNA序列分析表明其基因全长为1185bp。将该片段插入表达载体pSE380,构建成重组子pSE-dhaT,并在E.coliJM109中获得表达,经SDS-PAGE检测,表达产物分子质量与天然纯1,3丙二醇氧化还原酶(DHAT)相同,约为43ku。
周文广黄日波
关键词:克雷伯氏菌1,3-丙二醇氧化还原酶大肠杆菌克隆
微生物酶DNA shuffling的改进及应用被引量:2
2004年
介绍了DNAshuffling技术的基本原理以及技术改进 ,对此技术在提高微生物酶的活性、稳定性、抗性以及改变底物专一性等方面的应用进行了综述 。
齐向辉黄日波
一株产丙烯酸和一株耐高浓度丙烯酸细菌的筛选与鉴定被引量:2
2008年
从广西大学农场、养猪场排水沟、奶牛场的排水沟、屠宰场的废液池及鱼塘的污泥和废水中分离到1株能产丙烯酸和1株耐高浓度丙烯酸的菌株。经高效气相色谱检测其培养提取物,能产丙烯酸的菌株在培养物中丙烯酸的摩尔浓度达到3.5 mmol/L;耐高浓度丙烯酸的菌株其耐受丙烯酸的摩尔浓度可以达到2 mol/L,对这2个菌株进行16S rDNA鉴定,它们分别属于Cellulosimicrobium属和Brevundimonas属。
陈云来左文朴杜丽琴韦宇拓黄日波
关键词:丙烯酸
pfl-act基因在大肠杆菌中的高效表达及其纯化
2006年
丙酮酸甲酸裂解酶是肠道细菌在厌氧代谢中十分关键的酶,丙酮酸甲酸裂解酶激活因子(pyruvateform ate lyase activator,PFL-A)在功能上具有重要的作用。为进一步研究PFL-A的激活机理,以大肠杆菌K-12的基因组为模板,通过G enB ank上公布的序列设计引物,扩增出目的基因,克隆到pM D 18-T载体,经测序,所扩增出的基因与p f l-act基因具有99%的同源性。将p f l-act连接到高效表达载体pET-22b(+)中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,结果发现,p f l-act以包涵体形式表达。改变诱导剂、诱导剂量或培养温度,对包涵体的形成均没有明显的影响。
杨登峰韦宇拓黄志明周兴黄日波
关键词:包涵体
产1,3-丙二醇基因工程菌发酵条件的研究被引量:3
2006年
利用途径工程的方法,将来源于克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)的甘油脱水酶基因dhaB和1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT构建成多顺反子重组质粒pSE-dhaB-dhaT并在大肠杆菌JM 109中进行表达,在大肠杆菌中构建一条新的产1,3-丙二醇代谢途径。研究表明,重组菌株JM 109/pSE-dhaB-dhaT在微好氧条件下,尝试用廉价的乳糖为诱导物、维生素B12为辅酶,可以将甘油转化为1,3-丙二醇,产量达15.34 g/L,甘油转化率为35.7%,对低成本生产1,3-丙二醇作了有益的探索。
韦旭钦陈发忠罗兆飞韦宇拓周文广黄日波
关键词:1,3-丙二醇重组菌发酵条件
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