您的位置： 专家智库
>
资助详情>
河南省自然科学基金(0311031000)
河南省自然科学基金(0311031000)
- 作品数：6 被引量：4H指数：2
- 相关作者：程相朝李银聚张春杰吴庭才廖成水更多>>
- 相关机构：河南科技大学更多>>
- 发文基金：河南省自然科学基金洛阳市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 鸡IL-2基因cDNA输卵管组织特异性表达载体的构建与表达被引量：2
- 2005年
- 将克隆并测序的鸡卵清蛋白基因5′端调控序列和鸡IL-2基因cDNA,以串联方式置于真核表达载体pcDNA3的CM V启动子下游,构建了鸡输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2。将真核表达载体pcDNA3-IL 2和构建的输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2分别转染鸡输卵管上皮细胞,激素诱导72 h后,用淋巴细胞转化试验检测细胞培养液中IL-2的表达水平及生物学活性。结果显示,转染细胞均可表达IL-2,且所表达的IL-2有促进T淋巴细胞转化和淋巴母细胞成熟的活性;转染pcDNA3-OVP-IL 2的输卵管上皮细胞表达产物在1∶256稀释水平下仍具有促进T淋巴细胞转化和淋巴母细胞成熟的活性。转染pcDNA3-IL 2载体的输卵管上皮细胞虽有IL-2表达,但水平较低。
- 吴庭才李银聚张春杰程相朝
- 关键词：转染
- 鸡IL-2基因在输卵管上皮细胞中的表达及其活性检测
- 2009年
- 探讨鸡IL-2基因cDNA在输卵管上皮细胞中的定位表达和生物学活性。利用卵清蛋白和卵清溶菌酶基因5′端调控区序列构建输卵管定位表达盒,将鸡IL-2基因cDNA分别置于表达盒的调控序列下游,构建定位表达载体pcDNA3-OVP-IL2和pcDNA3-LGP-OVP-IL2。表达载体转染鸡输卵管上皮细胞,激素诱导48h。经Western blot和ELISA检测,转染pcDNA3-OVP-IL2和pcDNA3-LGP-OVP-IL2表达载体的细胞培养液中均有Mr22 ku的蛋白,96 h细胞上清液中IL-2的表达量分别为2.659μg/L和5.724μg/L;淋巴细胞转化试验检测显示,所表达的重组蛋白具有促进T淋巴细胞转化和促进淋巴母细胞成熟的活性。实验表明融合调控序列能够调控IL-2基因在鸡输卵管上皮细胞中表达具有生物学活性的IL-2。
- 李银聚吴庭才张春杰程相朝刘一尘王臣赵战勤
- 关键词：IL-2基因输卵管上皮细胞活性检测
- 鸡卵清溶菌酶5′端激素受体结合位点的克隆与序列分析被引量：1
- 2004年
- 应用PCR技术从鸡输卵管组织基因组中扩增出0.35kb的鸡卵清溶菌酶5′端激素受体结合位点的基因片段。序列分析表明,该区域含有2个睾酮激素受体识别位点和2个皮质酮激素受体识别位点,具备输卵管定位表达调控增强能力,为构建融合定位表达启动子调控外源基因在鸡输卵管定位表达奠定了基础。
- 吴庭才李银聚张春杰程相朝
- 关键词：睾酮皮质酮转基因动物
- 生物技术减毒沙门氏菌介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达和在卵黄中沉积的研究
- 2011年
- 目的探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性。方法将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crpSL1344中,阳性重组菌静脉注射高产蛋鸡,收集不同时期鸡蛋,涂片荧光镜检和ELISA检测表达产物在卵黄中沉积情况和表达水平,平板溶圈法检测卵黄中表达产物的活性。结果注射表达质粒第8天开始卵黄中有荧光颗粒出现,第21天表达量最高,为10.4μg.mL-1,活性相当于50.2μg.mL-1标准品t-PA。结论研究表明,减毒沙门氏菌能够介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达,且apo载脂蛋白能够引导t-PA透过卵黄膜实现在卵黄中沉积,这一途径简捷、方便,为外源基因在动物体内的表达研究提供了理论和技术基础。
- 王晓利李银聚廖成水程相朝张春杰吴庭才
- 关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌卵黄
- 鸡卵清蛋白基因5′端调控区的克隆及其序列分析被引量：3
- 2004年
- 应用PCR技术从鸡输卵管组织基因组中扩增出了 1.0 0kb的鸡卵清蛋白基因 5′端调控区序列。序列分析表明 ,该区域含有TATA框及激素识别位点 ,具备输卵管定位表达的调控能力。为外源基因在鸡输卵管中的定位表达奠定了基础。
- 吴庭才李银聚张春杰程相朝
- 关键词：PCR克隆
- 人组织型纤溶酶原激活剂转基因功能鸡蛋的研究及其活性分析
- 2010年
- 为探索人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在鸡卵黄中积淀的可行性,开发具有抗心血管疾病的功能性鸡蛋,应用分子生物学技术分别构建含有人t-PA基因和t-PA与鸡卵黄高磷蛋白融合基因的真核表达质粒pcDNA3-tPA和pPhosvitin-tPA,脂质体包裹后分别注射于初产蛋鸡的肝脏,Western blotting和ELISA检测t-PA基因在鸡肝脏中的表达和在卵黄中的积淀情况,琼脂糖平板溶圈法检测期其活性。结果显示,注射重组质粒后7d,卵黄中有分子质量为63kD的t-PA积淀,表达可持续5周,高峰表达量分别为39.16mg/L和53.92mg/L;琼脂糖平板溶圈法检测其活性表明,卵黄中的t-PA具有激活组织纤溶酶的活性。实验证明了外源基因表达产物在卵黄中积淀这一途径的可行性。
- 李银聚程相朝张春杰吴庭才杜瑞玲余祖华
- 关键词：人组织型纤溶酶原激活剂卵黄高磷蛋白功能性食品卵黄转基因
