山东省自然科学基金(ZR2011HM053)
- 作品数：14 被引量：38H指数：5
- 相关作者：徐岩刘雪梅马蕊国敏马瑞霞更多>>
- 相关机构：青岛大学青岛大学医学院附属医院潍坊市益都中心医院更多>>
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- 胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用被引量：6
- 2013年
- 目的探讨胡黄连苷Ⅱ对肾缺血再灌注(I/R)损伤的相关保护作用。方法健康雄性Wistar大鼠40只随机分为A、B、C、D、E组,A组仅暴露肾动脉不结扎,B^E组建立I/R模型,C、D、E组造模前20 min分别腹腔注射胡黄连苷Ⅱ5、10、20 mg/kg,再灌注24 h后处死动物留取血液和肾脏组织。全自动生化仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平。硫代巴比妥酸法、比色法分别测定肾脏组织中的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH),HE染色法观察肾脏病理变化。免疫组化法检测肾脏组织分别肿瘤坏死因子相关受体6(TRAF6)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白。结果 B组与A组相比MDA、TRAF6、Caspase-3明显增高,GSH明显降低,P均<0.05;C、D、E组与B组相比MDA、TRAF6、Caspase-3明显降低,GSH明显升高,P均<0.05;D、E组各指标比较无显著性差异,与C组相比,P均<0.05。结论胡黄连苷Ⅱ对肾I/R损伤具有保护作用,与剂量大小有一定关系;其机制可能是减少氧化应激,进而增加TRAF6表达,从而减少细胞凋亡的发生。
- 许瑞瑞张月月徐岩
- 关键词：肾脏损伤
- α－促黑素对大鼠肾肺缺血／再灌注损伤的保护作用和机制研究
- 2015年
- 目的：探讨大鼠肾缺血／再灌注（I／R）损伤中趋化因子2（CXCL2）、转化生长因子－α（ TGF－α）的表达及α－促黑素（α－MSH）的治疗作用。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、I／R组和α－MSH治疗组，每组各10只大鼠。通过阻断双侧肾动脉建立大鼠肾I／R模型，并在α－MSH干预后24 h处死各组大鼠，留取血液及肾、肺组织。经HE染色后在光镜下观察肾、肺组织病理变化，采用RT－PCR和ELISA方法检测大鼠肾、肺组织中CXCL2、TGF－αmRNA和蛋白表达水平。结果①I／R组血清BUN和Cr水平均高于假手术组和α－MSH治疗组（ P＜0．05），假手术组和α－MSH治疗组血清BUN和Cr水平比较差异均无统计学意义（ P＞0.05）。②肾、肺组织中α－MSH治疗组CXCL2 mRNA低于I／R组（P＜0．05），而TGF－αmRNA高于I／R组（P＜0．05）。③I／R组和α－MSH治疗组CXCL2、TGF－α蛋白表达值均高于假手术组（P＜0．05）；α－MSH治疗组CXCL2蛋白表达值低于I／R组（P＜0．05），而α－MSH治疗组TGF－α蛋白表达值高于I／R组（ P＜0．05）。结论α－MSH可能通过增加TGF－α表达水平和减少CXCL2表达水平，减轻肾I／R所导致的肾、肺组织的损伤。
- 张晓速姜燕徐岩刘雪梅
- Cyr61过表达对缺血性急性肾损伤早期细胞凋亡的影响被引量：4
- 2016年
- 目的：研究过表达富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）对缺血性急性肾损伤（AKI）早期肾组织细胞凋亡的影响及机制。方法30只SD大鼠被随机分为5组：对照组、AKI组、AKI＋碳酸氢盐组、AKI＋空病毒组和AKI＋Cyr61过表达组。造模2 h后处死大鼠并留取血清和肾组织。采用ELISA法检测肾组织肿瘤坏死因子α（TNF？α）表达，HE染色观察各组肾组织病理改变，免疫组化法测定肾组织中核因子κB（NF？κB）p65和肿瘤坏死因子1型受体（TNFR1）的表达，原位末端转移酶标记技术（TUNEL）法检测肾组织细胞凋亡率，实时定量PCR法和 Western印迹法检测肾组织NF？κB p65、TNFR1和Caspase3 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组相比，AKI组、AKI＋碳酸氢盐组、AKI＋空病毒组、AKI＋Cyr61过表达组均出现明显肾组织损伤；肾组织TNF？α、NF？κB p65、TNFR1和Caspase3的mRNA和蛋白表达量明显增高（均P＜0.05）。与AKI组、AKI＋碳酸氢盐组、AKI＋空病毒组相比，AKI＋Cyr61过表达组肾组织损伤程度、肾小管上皮细胞凋亡率、Scr增高幅度均明显降低（均P＜0.05）。AKI＋Cyr61过表达组大鼠肾组织TNF？α表达与其他AKI阳性对照组相比差异无统计学意义，但NF？κB p65蛋白表达量降低，TNFR1和Caspase3蛋白表达增高程度较其他AKI阳性对照组减轻（均P＜0.05）。结论在缺血性AKI早期时，过表达Cy61的SD大鼠肾小管上皮细胞凋亡减轻，可能与Cy61蛋白抑制TNFR1的转录表达，干扰TNFα信号途径有关。
- 徐岩蒋伟马蕊马瑞霞刘雪梅
- 关键词：肾小管坏死细胞凋亡肿瘤坏死因子
- Cyr61对急性肾损伤保护作用及其机制研究进展被引量：1
- 2016年
- 富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)是一种分泌蛋白,在肾脏发生缺血再灌注损伤后,可在近端小管上皮中检测到Cyr61的表达,Cyr61可能对肾脏细胞具有一定的保护作用。对Cyr61在缺血性急性肾损伤(AKI)中作用及机制进行研究,可为AKI的诊断和治疗提供更多的理论依据。
- 徐岩马蕊陈锋
- 关键词：急性肾损伤
- 7，8-二羟基黄酮对缺氧诱导下肾小管上皮细胞内质网应激的抑制作用被引量：1
- 2016年
- 目的观察7，8-二羟基黄酮（7，8-DHF）对缺氧诱导的人近端肾小管上皮细胞内质网应激（ERS）损伤的影响，并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞（HK-2），采用缺氧培养箱建立细胞缺氧损伤模型，排除含血清培养基对缺氧的影响后，实验分为5组，分别为缺氧0h、4h、8h、12h、16h组。实时荧光定量PCR（RT-PCR）法筛选缺氧诱导ERS的最佳缺氧时间。用不同浓度（50、100、150、200、250wm01／L）7，8．DHF处理HK-2细胞，采用细胞增殖与活性实验筛选7,8-DHF的安全浓度。用7,8-DHF预处理HK-2细胞缺氧模型，按以下处理因素分组：对照组、缺氧＋DMSO组、缺氧＋7，8-DHF组（包括100μmol／L组和150μmol／L组），通过检测细胞增殖与活性筛选最佳给药浓度。后将细胞随机分为缺氧组、缺氧＋7，8-DHF组（100μmol／L），Western印迹法检测细胞蛋白激酶（Akt）、磷酸化蛋白激酶（p-Akt）、富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）、ERS相关促凋亡蛋白CCAAT增强子结合蛋白（CHOP）的表达。用重组Cyr61慢病毒载体构建稳定表达Cyr61蛋白的Cyr61-HK-2细胞株进行缺氧实验，按如下处理因素分组：缺氧＋空质粒转染组，缺氧＋Cyr61过表达组，膜连蛋白V和碘化丙啶（AnnexinV．FITC／PI）染色后，采用流式细胞仪检测细胞凋亡，Western印迹法检测Cyr61和CHOP蛋白的表达情况。结果（1）与对照组细胞相比，RT-PCR实验结果显示12h为诱导ERS的最佳缺氧时间（P〈0．01）。（2）与对照组相比，细胞增殖与活性实验结果显示100μmol／L的7，8-DHF组为最佳给药浓度（P〈0．01）。（3）与缺氧＋DMSO组相比，缺氧＋7，8-DHF细胞p-Akt、Cyr61表达量均明显增加，CHOP表达量明显降低（均P〈0．05）；LY294002处理可抑制p-Akt的表达，减少Cyr61及增加CHOP的表达（均P〈0．05）。（4）与缺氧＋空质粒转染组相比，过表达C
- 马蕊岳少妲赵晴徐岩
- 关键词：内质网应激富含半胱氨酸蛋白61蛋白激酶类
- 富含半胱氨酸蛋白61对缺氧后肾小管上皮细胞氧化应激的影响被引量：3
- 2014年
- 目的 观察富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）对缺氧后人肾小管上皮细胞（HK-2）氧化应激的影响,探讨Cyr61对HK-2的保护机制.方法 将HK-2细胞分为5组：空白组、Cyr61处理组、MAPK抑制剂组（Cyr61＋ PD98059预处理）、p38抑制剂组（Cyr61 ＋SB203580预处理）、PI3K抑制剂组[Cyr61＋渥曼青霉素（Wortmannin）预处理].各组细胞预处理12h后进行缺氧培养.采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测缺氧前后细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,双氯荧光黄乙酸乙酯（DCFH-DA）染色检测细胞内活性氧簇（ROS）的生成量,比色法检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性,Western印迹法检测细胞磷酸化（p）Akt及细胞核内Nrf2蛋白表达水平. 结果 缺氧培养后空白组HK-2细胞内ROS含量和Nrf2蛋白表达增加,SOD、CAT活性下降,同时细胞存活率下降,凋亡率增高（均P＜0.05）.Cyr61处理组缺氧后存活率、细胞内SOD、CAT活性和p-Akt、Nrf2蛋白显著高于空白组,同时其凋亡率及ROS含量明显低于空白组（均P＜ 0.05）.与Cyr61处理组相比,缺氧后PI3K抑制剂组HK-2细胞存活率、细胞内SOD、CAT活性和p-Akt、Nrf2蛋白显著下降,凋亡率及ROS含量显著增加（均P＜0.05）;而MAPK抑制剂组和p38抑制剂组HK-2细胞的各项指标同Cyr61处理组相比差异无统计学意义（均P＞ 0.05）.结论 Cyr61可通过PI3K途径促进Nrf2表达,增强抗氧化物质SOD、CAT产生,减少ROS生成,在缺氧诱导的HK-2细胞氧化应激损伤中发挥保护作用.
- 徐岩沈学飞宋年华刘雪梅
- 关键词：氧化性应激NF-E2相关因子2磷脂酰肌醇3-激酶
- 富含胱氨酸蛋白61对缺氧状态下肾小管上皮细胞的保护作用被引量：5
- 2015年
- 目的 探讨富含胱氨酸蛋白61 （cysteine-rich protein 61,Cyr61）蛋白在缺氧缺血性急性肾损伤（AKI）中肾小管上皮细胞的表达,对肾小管上皮细胞的保护作用及可能机制.方法 以重组Cyr61慢病毒载体构建稳定表达Cyr61蛋白的人肾小管上皮细胞株Cyr61-HK2.溴脱氧尿苷核素掺入法检测细胞增殖,膜联蛋白V和碘化丙啶染色后流式细胞仪分析细胞凋亡,Western印迹检测BAD、Akt和ERK蛋白水平.结果 （1）与野生型HK2细胞相比,缺氧状态下Cyr61-HK2细胞的增殖能力更强;（2）缺氧状态下,野生型HK2细胞和Cyr61-HK2细胞的凋亡都随时间延长而增加,但与野生型HK2细胞相比,Cyr61-HK2细胞的凋亡减少;（3）与野生型HK2细胞相比,Cyr61-HK2在细胞缺氧0h、0.5 h、1h时的磷酸化BAD、磷酸化Akt和磷酸化ERK均增强,差异有统计学意义（均P＜0.05）.结论 缺氧状态下Cyr61蛋白能够促进肾小管上皮细胞增殖,抑制凋亡,Akt/ERK途径可能参与了Cyr61的抗凋亡作用.
- 徐岩国敏董晖刘雪梅马瑞霞
- 关键词：缺氧急性肾损伤
- 临床指标对急性肾损伤伴心肾综合征患者行肾脏替代治疗时机的预测价值被引量：7
- 2015年
- 目的探讨多项指标在预测急性肾损伤伴心肾综合征（cardiorenal syndrome，CRS）患者行肾脏替代治疗（RRT）时机的价值。方法选取75例心肾综合征住院患者为对象，所有患者给予保守治疗3d，心功能好转者为对照组（n=39），心功能无好转者进入RRT组（n=36）。记录患者入院第1天的一般情况，血白蛋白、血红蛋白、血肌酐-Ⅰ、尿素氮-Ⅰ、B型钠尿肽-Ⅰ（BNP—Ⅰ）、24h尿量-Ⅰ、呋塞米用量（呋塞米-Ⅰ），治疗第4天的呋塞米用量（呋塞米-Ⅱ）、24h尿量-Ⅱ、肌酐-Ⅱ、尿素氮-Ⅱ、BNP—Ⅱ等指标，计算治疗前后部分指标的比值：24h尿量Ⅱ/Ⅰ、肌酐Ⅱ／Ⅰ、尿素氮Ⅱ／Ⅰ、BNPⅡ／Ⅰ（第1天指标以“Ⅰ”标记，治疗第4天指标以“Ⅱ”标记，指标的动态变化以第4天指标与第1天指标的比值表示，以“Ⅱ／Ⅰ”标记）。运用受试者工作特征曲线（ROC）下面积评价上述各指标预测患者行RRT治疗的敏感性与特异性。结果对照组与RRT组在24h尿量-Ⅰ、24h尿量-Ⅱ、肌酐Ⅱ／Ⅰ、BNP-Ⅱ、BNPⅡ／Ⅰ方面的差异有统计学意义（均P〈0．01）。计算各指标ROC曲线下面积，其中24h尿量-Ⅰ（AUC=0．736）、24h尿量-Ⅱ（AUC=0．875）、肌酐Ⅱ／Ⅰ（AUC=0．747）、BNP—Ⅱ（AUC=0．779）、BNPⅡ／Ⅰ（AUC=0．894）在预测患者行RRT治疗方面均有较高价值。对上述阳性指标，当分别选取截点值为：24h尿量-Ⅰ=905ml（敏感度75．0％，特异度94．9％）、24h尿量-Ⅱ=1450ml（敏感度75．0％，特异度100％）、BNP—Ⅱ=3360ngCL（敏感度72．2％，特异度100％）、BNPⅡ／Ⅰ=1．37（敏感度75．0％，特异度100％）、肌酐Ⅱ／Ⅰ=1．25（敏感度72．2％，特异度94．4％）时，对于是否行RRT治疗有较高的预测价值。结论24h尿量、治疗后的BNP数值及BNP与肌酐的动态变化，可以较好地预测伴CRS的急性肾损伤患者是否要行RRT治疗�
- 崔永军万美燕夏平张树俭徐岩
- 关键词：肾替代疗法急性肾损伤心肾综合征
- 富含半胱氨酸蛋白61对转化生长因子β1活化肾脏成纤维细胞的抑制作用及机制被引量：2
- 2017年
- 目的观察富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）在转化生长因子p1（TGF-β1）活化的肾成纤维细胞（NRK-49F）中的表达，探索Cyr61的作用及可能机制。方法（1）0．0、0．5、1．0、2．0、5．0μg／LTGF．B1刺激活化NRK-49F细胞，Western印迹检测细胞Cyr61蛋白表达，CCK-8法检测细胞增殖活性。（2）质粒转染构建过表达及低表达Cyr61的NRK-49F细胞，分为对照组（转染空质粒组）、过表达组和低表达组。CCK-8法检测3组细胞培养24、48、72h的增殖活性。5．0μg／LTGF-β1诱导活化3组细胞，CCK-8法检测细胞增殖活性，流式细胞术分析细胞周期，实时荧光定量PCR检测纤维化标志物（Co11α1、Col3α1、MMP9、MMP13）、细胞衰老信号通路分子（p53、p21、Rb、p16）的mRNA表达，Western印迹检测C013、MMP9蛋白的表达。结果（1）与0．0μg/L TGF-β1组比较，0．5、1．0、2．0、5．0μg／LTGF-β1组NRK-49F细胞的增殖活性均增加（均P〈0．05），1．0μg／L组Cyr61蛋白表达降低，5．0μg／L组Cyr61蛋白表达升高（均P〈0．05）。（2）Cyr61过表达组NRK-49F细胞24、48、72h的增殖活性均低于对照组（均P〈0．05），且呈时间依赖性。（3）TGF-β1刺激后，与对照组比较，Cyr61过表达组NRK-49F细胞增殖活性降低，促纤维化因子Col1α1和Col3α1表达减少，同时抗纤维化因子MMP9和MMP13的表达增加，周期停滞在G1期的细胞比例增加，细胞衰老信号通路基因p53、p21和RbmRNA表达增加（均P〈0．05），而Cyr61低表达组上述效应正好相反（均P〈0．05）；3组细胞p16基因mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Cyr61抑制肾成纤维细胞增殖及纤维化表型分泌，从而减缓肾脏纤维化进程，p53／p21／Rb细胞衰老信号通路可能参与Cyr61的抑纤维化作用。
- 刘航张继生刘晓宇李宸羽马蕊徐岩
- 关键词：成纤维细胞纤维化衰老富含半胱氨酸蛋白61
- Cyr61蛋白在缺血性急性肾损伤间质纤维化中作用
- 2016年
- 损伤后肾间质纤维化在缺血性急性肾损伤(AKI)发展过程中起重要作用,富含半胱氨酸蛋白质61(Cyr61)作为一种损伤早期诱导蛋白能调节纤维化的病变过程。本文论述了缺血性AKI后肾间质纤维化的病理过程和相关研究进展,阐述Cyr61作为一种潜在保护性因子的依据。
- 徐岩国敏邢昂
- 关键词：急性肾损伤纤维化
