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将RGD模体改变为RGDNM可减弱Echistatin对血小板聚集的抑制但增强血管新生的抑制作用被引量：1: 2009年; 为了研究去整合素echistatin RGD(Arg-Gly-Asp)模体周边氨基酸突变后对其生物学功能的影响,根据echistatin序列设计合成6个片段,利用重叠延伸PCR法合成cDNA,使echistatin RGD模体周边序列变为ARGDNM(D27→N),与载体pTXB1连接后转化E.coliBL21(DE3),建立echistatin(ARGDNM)的表达体系.工程菌经IPTG诱导后融合蛋白表达量占菌体总蛋白约30%,几丁质亲和纯化后,DTT裂解释放目的蛋白分子量约5.4kD.体外血小板聚集和体内鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管新生实验结果表明,echistatin(ARGDNM)抑制血小板聚集的作用减弱,而其抑制血管新生的作用增强.RGD模体周围氨基酸的改变影响了去整合素的生物学功能,echistatin(ARGDNM)增强了与αⅤβ3结合的特异性,本工作为研究特异性更强的去整合素药物奠定了基础.; 杨涛牛勃程牛亮解军张悦红杨利军; 关键词：去整合素 ECHISTATIN

添加金属离子对沼气发酵及减硫影响的研究被引量：1: 2015年; 目前的沼气脱硫技术基本上都是对沼气进行后期处理,鲜有文献报道从沼气发酵源头减少硫化氢生成。试验以马铃薯和红薯皮渣混合物为原料,添加氯化镍和氯化镁进行了厌氧发酵试验,考察金属离子对沼气发酵过程中减硫的影响。研究结果表明,氯化镍和氯化镁添加量为0~500mg/kg时可以促进沼气发酵的进行,并减少硫化氢的生成量,但添加量增大时会导致沼气中甲烷含量降低,甚至发酵停止。; 黄黎陶红歌苏耀华张文武唐亚婷杨永涛刘慧慧; 关键词：沼气厌氧发酵金属离子

抗TNFα单链抗体在大肠杆菌中可溶性表达条件的研究被引量：8: 2010年; 抗TNFαscFv在E.coliHB2151中以可溶性形式在胞周质中表达,为了进一步提高其表达量,文章通过摇瓶培养对其诱导表达条件进行了研究。将噬菌体抗体库筛选到的阳性克隆感染E.coliHB2151,分别改变诱导温度、诱导时间和诱导剂IPTG的浓度,并在培养基中加入甘氨酸和Triton X-100等添加剂,观察诱导条件的改变对scFv表达和分泌的影响。结果表明,E.coliHB2151在培养5 h对数生长期时开始诱导,在ITPG浓度为0.5 mmol/L条件下,30℃诱导20 h,胞周质中scFv的表达量比优化前增加了一倍,而且在诱导后期加入甘氨酸和Triton X-100后可增加scFv向培养基的分泌量。免疫学印迹法检测抗TNFαscFv能够与天然结构的TNFα结合,识别抗原的构象表位。该工作为其他可溶性scFv表达量的提高提供了可参考的模式。; 杨涛杨利军张建林张悦红牛勃; 关键词：单链抗体肿瘤坏死因子Α 大肠杆菌

抗TNF-α单链抗体噬菌体展示文库的建立和鉴定被引量：1: 2010年; 应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ/NotⅠ位点定向插入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化E.coli TG1,构建了库容为4.6×108的抗TNF-α单链抗体库.对抗体库进行3轮富集筛选后,ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析.结果表明,抗TNF-αscFv基因序列长774bp,编码258个氨基酸.将此阳性克隆转化E.coliHB2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,scFv的分子量约为28kD.经亲和纯化后的scFv可与rhTNF-α结合,并可中和由rhTNF-α引起的L929细胞毒性.本文利用噬菌体抗体库筛选到了高亲和力的抗TNF-αscFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础.; 杨涛柴蔚然杨利军程牛亮解军牛勃; 关键词：噬菌体展示技术肿瘤坏死因子-Α 单链抗体

一种小肽的多顺反子串联表达方法被引量：1: 2006年; 目的:构建蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)多顺反子串联多拷贝基因。方法:以pMD18T-Ecs为模板,利用三对引物分别扩增Ecs基因,每个Ecs基因都有独立的起始和终止密码子,然后通过三个Ecs基因之间合适的酶切位点使之串联,再与表达载体pET30a连接后得到三拷贝重组质粒,在三个Ecs基因之间分别有SD序列和SD间隔序列。将质粒转化E.coliBL21(DE3)后IPTG诱导表达,18%SDS-PAGE和Westernblot鉴定结果。结果:Ecs的表达量占全菌总蛋白的18%,实现了Ecs的串联表达。结论:Ecs多顺反子的串联表达为小分子蛋白的体外制备提供了一种全新的思路和方法。; 杨利军杨涛程牛亮解军张悦红牛勃; 关键词：多顺反子大肠杆菌

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国家自然科学基金(30600226)