安徽省自然科学基金(070413260X)
- 作品数：10 被引量：26H指数：4
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- 鼠源性乙酰胆碱受体α亚基97—116肽段（V108A）鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的影响被引量：7
- 2008年
- 目的 研究鼠源性乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段丙氨酸替代108缬氨酸[Rα97—116（V108A）]鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠肌无力表现及免疫功能的影响。方法将采用Rα07-116强化免疫接种方法成模的22只EAMG大鼠随机分成耐受组和对照组，分别经鼻黏膜给予Rα07-116（V108A）和PBS缓冲液免疫耐受处理10d后，观察不同时间点两组大鼠体质量、Lennon肌无力评分、血清AChR—ab（ELISA法）及CD28、CTLA4、B7共刺激分子（流式细胞仪）变化。结果耐受组EAMG大鼠体质量[（228．1±5．8）g]较对照组[（215．0±16．2）g]增加（t=2．395，P〈0．05）；肌无力临床评分[耐受组（1．55±0．44）分，对照组（2．10±0．66）分]下降（t=-2．20，P〈0．05）；血清AChR-ab（耐受组0．97±0．20，对照组1．27±0．26，t=-2．857，P〈0．05）和外周血CD28、B7-1、B7-2、CTLA4分子的表达（％）耐受组（分别为27．35±7．05、4．73±0．58、2．71±0．35、1．72±0．44）较对照组（分别为40．02±8．81、9．52±1．25、5．88±1．09、2．64±0．47）明显下调（t=3．479、10．861、8．755、4．403，均P〈0．01）。结论Re07—116（V108A）鼻黏膜耐受能明显减轻EAMG的肌无力症状，并能引起特异性T细胞活化和B细胞免疫功能抑制。
- 吴怀国杨毅熊小平许文华任明山
- 关键词：鼻黏膜
- β-巯基乙醇和脑匀浆上清对骨髓间充质干细胞的神经诱导作用被引量：5
- 2008年
- 目的探讨β-巯基乙醇(BME)和大鼠脑匀浆上清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为类神经元样细胞的作用。方法采用全骨髓培养法从SD大鼠骨髓中分离培养MSCs,经贴壁法体外扩增、传代和流式细胞仪鉴定。①以1mmol/L浓度BME的含血清DMEM培养基预诱导24 h,再以含5 mmol/L BME的无血清DMEM培养基诱导5 h至MSCs神经分化。②使用大鼠脑匀浆上清诱导MSCs,48 h至神经分化。免疫细胞化学染色分别检测两种诱导方法MSCs培养物神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果第5代MSCs有97.5%表达CD90抗原,1.72%表达CD45抗原。两种方法诱导后的细胞均具有神经细胞的形态特征;相比脑匀浆上清BME诱导组细胞形态变化更快。两种方法都可诱导MSCs表达NSE;鼠脑匀浆上清可诱导MSCs表达GFAP。结论MSCs具有向神经细胞分化的可塑性,相比BME,鼠脑匀浆上清具有诱导MSCs向胶质细胞分化的倾向。
- 王嵘峰陈荣志薛绍礼任明山
- 关键词：间质干细胞神经胶质巯基乙醇细胞培养技术
- 鼻黏膜耐受对实验性重症肌无力大鼠胸腺细胞凋亡的影响
- 2010年
- 目的探讨鼻黏膜耐受处理对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠胸腺细胞凋亡及Caspase-3表达的影响。方法将实验大鼠随机分为正常对照组、EAMG组和耐受组,将EAMG组及耐受组大鼠采用Rα97-116肽段多点皮下注射法制备成EAMG大鼠模型后,再将耐受组大鼠经鼻腔滴注Rα97-116(V108A)行免疫耐受处理,10d后评估疗效(临床症状、体质量、抗体滴度等),并采用TUNEL法计数对照组、EAMG组及耐受组大鼠胸腺细胞的凋亡程度,用免疫组化法检测3组大鼠胸腺淋巴细胞内Caspase-3的表达,并分析其阳性细胞染色强度。结果 EAMG组大鼠胸腺细胞的凋亡数较对照组显著减少,鼻黏膜耐受处理能明显促进EAMG大鼠胸腺细胞的凋亡,并改善EAMG大鼠的肌无力症状,增加其体重及降低AchR抗体滴度。EAMG组胸腺中Caspase-3阳性细胞表达较对照组明显下调,耐受组其表达则明显增加,3组之间有显著的统计学意义(F=58.26,P<0.01)。结论 Rα97-116(V108A)鼻黏膜耐受能明显减轻EAMG大鼠肌无力症状,缓解胸腺细胞凋亡异常。
- 张立新任明山熊小平贾雪梅桂丽黄大可
- 关键词：重症肌无力鼻黏膜耐受细胞凋亡CASPASE-3
- 鼻粘膜耐受对实验性重症肌无力大鼠胸腺Fas、BCL-2表达的影响被引量：5
- 2009年
- 目的探讨实验性重症肌无力大鼠经鼻粘膜耐受处理后胸腺淋巴细胞Fas及BCL-2的表达及其免疫耐受的发生机制。方法将实验大鼠随机分为对照组、EAMG组及耐受组。将EAMG组及耐受组大鼠采用Rα97-116肽段多点皮下注射法制备成EAMG大鼠模型后,再将耐受组大鼠经鼻腔滴注Rα97-116(V108A)行免疫耐受处理,10d后评估疗效,并采用TUNEL法计数对照组、EAMG组及耐受组大鼠胸腺淋巴细胞阳性凋亡细胞数和免疫组化法检测3组大鼠胸腺淋巴细胞FAS及BCL-2的表达。结果Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受处理能明显改善EAMG大鼠的肌无力症状,增加其体重及降低AChR抗体滴度。EAMG组大鼠胸腺凋亡细胞数较对照组显著减少,而耐受组大鼠则较EAMG组明显增加,3组间差异具有显著的统计学意义(F=114.15,P<0.01)。3组大鼠胸腺细胞FAS的表达也具有统计学差异性(2=16.48,P<0.05),EAMG组大鼠胸腺细胞FAS表达较对照组显著下调,而耐受组表达增加。EAMG组胸腺细胞中BCL-2高表达,而耐受组表达量下降,3组之间存在统计学差异(2=15.82,P<0.05)。结论Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受能明显减轻EAMG大鼠肌无力症状,其自身反应性淋巴细胞的凋亡可能与鼻粘膜耐受的作用机制有关。
- 熊小平任明山杨毅许文华王晓秋
- 关键词：重症肌无力鼻粘膜耐受FAS
- Rα97-116(V108A)鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力T-bet及GATA-3的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨Rα97-116(V108A)鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)鼠模型的治疗作用及对转录因子T-box家族成员之一(T-bet)和可与DNA序列[A/T(GATA)A/G]结合的Ⅳ型锌指蛋白之一(GATA-3)的影响机制。方法将成模Lewis大鼠随机分为:EAMG模型组(A组)和鼻黏膜耐受组(B组),并设正常对照组(C组)。B组给予Rα97-116(V108A)30μg共10d,记录A、B两组大鼠临床评分。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测三组动物外周血单个核细胞(PBMCs)中T-bet及GATA-3 mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆中白介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)表达水平及乙酰胆碱受体抗体IgG(AchR-AbIgG)含量。结果B组临床评分及AchR-AbIgG含量较A组显著降低(P<0.05);A组T-bet和GATA-3 mRNA、IL-4、IFN-γ表达水平明显高于C组,与A组相比,B组的表达水平明显降低(P<0.05),B组、C组之间表达水平无统计学差异(P>0.05);EAMG大鼠IL-4水平和IFN-γ水平分别与GATA-3和T-bet mRNA表达呈正相关(r=0.90,P<0.05;r=0.753,P<0.05)。结论Rα97-116(V108A)鼻黏膜耐受减轻EAMG的肌无力症状,其作用机制可能与其下调T-bet和GATA-3的表达,抑制异常Th1和Th2反应从而下调AChR特异性T和B细胞异常的免疫应答反应有关。
- 谢娟罗六一许文华赵江明杨毅任明山
- 关键词：重症肌无力免疫耐受疾病模型
- FoxP3：重症肌无力发病过程中的重要调控因子被引量：1
- 2010年
- CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）是维持机体内稳态的重要细胞，具有免疫无能性和免疫抑制性两大功能特性。FoxP3是其特异性表达的转录因子，FoxP3突变或各种原因引起Treg表达FoxP3减少及／或功能下降均会导致Treg数量减少或功能缺陷，从而导致自身免疫性疾病如重症肌无力（MG）的发生。研究发现，大部分MG患者体内均在FoxP3表达减少或有Treg功能障碍，而这些都与MG的发病密切相关。随着MG发病机制研究的深入，其治疗也将进入一个崭新的时代。
- 饶静任明山
- 关键词：FOXP3CD4^+CD25^+调节性T细胞基因突变重症肌无力
- 共刺激分子CD28:CTLA4/B7在实验性自身免疫性重症肌无力中的作用被引量：4
- 2008年
- 目的研究共刺激分子CD28：CTLA4/B7在实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）发病中的作用。方法将雌性Lewis鼠随机分为EAMG组和对照组;EAMG组采用人工合成的Rα97-116肽段3次法免疫Lewis鼠,对照组同期注入等量的PBS;3次免疫接种后采用流式细胞术检测CD28、B7-2、B7-1、CTLA4在外周血、淋巴细胞、单核细胞中的表达。结果EAMG组大鼠成模率75%;与对照组比较,外周血CD28、B7-2B7-1、CTLA4的表达明显增加（P〈0.05-0.01）;EAMG组大鼠外周血CD28、CTLA4主要在淋巴细胞表达及B7-1、B7-2在淋巴细胞、单核细胞表达显著增加（P〈0.05-0.01）。结论EAMG大鼠存在共刺激分子CD28：CTLA4/B7表达异常,共刺激分子CD28：CTLA4/B7可能参与了EAMG的发生、发展。
- 吴怀国彭晓江李军杨毅许文华任明山
- 关键词：重症肌无力共刺激分子
- 骨髓间充质干细胞对实验性自身免疫性重症肌无力临床及免疫功能影响的研究
- 2009年
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)临床及免疫功能的影响。方法:EAMG大鼠模型20只分为移植组(n=10)和模型对照组(n=10),并设正常对照组(n=10)。收集从Lewis鼠骨髓中分离、培养及鉴定后的MSCs,并调至密度为1×106/100μLPBS。移植组经尾静脉注入MSCs悬液100μL,模型对照组及正常对照组同期给予100μLPBS。定期对移植组和模型对照组行体重测定、Lennon临床评分以及血浆中AChRa97-116-Ab含量测定,并采用RT-PCR和ELISA法分别检测3组大鼠外周血单核细胞(PBMCs)中T-bet、GATA-3以及血浆中IFN-γ和IL-4含量。结果:移植组Lennon临床评分、AChRa97-116-Ab含量以及T-bet、GATA-3、IL-4、IFN-γ水平均较模型对照组显著降低,与正常对照组比差异无统计学意义;模型对照组T-bet与IFN-γ以及GATA-3与IL-4均呈显著正相关。结论:MSCs移植可以有效减轻EAMG症状,其可能作用机制是抑制T-bet和GATA-3表达,从而下调AChR特异性T和B细胞异常的免疫应答。
- 罗六一王嵘峰谢娟许文华任明山
- 关键词：重症肌无力骨髓间充质干细胞转录因子T-BETGATA-3
- 实验性自身免疫性重症肌无力大鼠胸腺caspase 9和caspase 3的表达被引量：3
- 2010年
- 目的探讨凋亡相关基因caspase 9和caspase 3在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠胸腺中的表达及其意义。方法采用TUNEL法检测胸腺凋亡细胞;用免疫组化法检测正常对照组大鼠和EAMG组大鼠胸腺中caspase 9和caspase 3蛋白表达。结果正常对照组和EAMG组大鼠胸腺中细胞凋亡指数(IA)分别为(38.70±8.82)%,(27.73±5.76)%;EAMG组大鼠胸腺中caspase 9和caspase 3的表达明显下降,较正常对照组比较差异有统计学意义,且胸腺中caspase 9和caspase 3的表达与细胞IA在正常对照组和EAMG组分别呈显著正相关。结论胸腺细胞凋亡障碍可能是EAMG的发病机制之一;caspase 9和caspase 3蛋白表达在介导EAMG大鼠胸腺细胞凋亡障碍的过程中可能具有重要作用。
- 张立新任明山熊小平贾雪梅桂丽黄大可
- 关键词：重症肌无力细胞凋亡
- T-bet和GATA-3在实验性自身免疫性重症肌无力中的表达被引量：3
- 2008年
- 目的通过研究表达在T细胞上的T-box家族成员之一(T-bet)和能与[T/A(GATA)A/G]序列结合的锌指结构家族的转录因子之一(GATA-3)这两种转录因子在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)中的表达,探讨其在EAMG发病机制中的作用。方法密度梯度离心法分离EAMG组和对照组大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)后,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测二组大鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMCs中T-bet和GATA-3的表达。结果对照组和EAMG组PBMCs中,T-bet的表达量分别为0.65±0.15和0.86±0.13,两组比较差异具有显著性(P<0.01);GATA-3的表达量分别为0.46±0.12和0.67±0.11,差异也具有显著性(P<0.01);血清中IFN-γ的含量,对照组(108.22±19.01)pg/ml明显低于EAMG组(230.86±41.44)pg/ml(P<0.01);对照组IL-4含量(87.33±3.50)pg/ml明显低于EAMG组(96.21±4.77)pg/ml(P<0.01);T-bet表达与IFN-γ及GATA-3表达与IL-4在对照组和EAMG组分别呈显著正相关(r=0.89,r=0.89,P<0.01;r=0.92,r=0.88,P<0.01)。结论T-bet和GATA-3在EAMG大鼠PBMCs中表达均显著增高,这可能是EAMG大鼠细胞和体液免疫反应增强的重要原因之一。
- 罗六一谢娟许文华任明山
- 关键词：重症肌无力自身免疫疾病细胞因子类
