湖南省自然科学基金(10JJ4016)
- 作品数：5 被引量：9H指数：1
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- 人抗肌萎缩蛋白Dp71 shRNA载体构建与检测
- 2014年
- 目的:构建有效针对人Dystrophin Dp71基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并验证其干扰效果。方法:设计合成3对针对人Dystrophin Dp71基因的和1对无同源性的siRNA片段,在两端和中间加上酶切位点和Loop环。将合成的DNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人Dp71基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(gastric epithelial cells,GES-1)和人支气管上皮细胞(human bronchial epithelium,HBE),Western印迹检测Dp71 shRNA真核表达载体的干扰效率。结果:酶切和测序验证均表明各Dp71-shRNA载体构建成功。将空载体及各Dp71 shRNA载体分别转染GES-1和HBEC,和空白细胞对照及shRNA空白载体组相比,3组Dp71-shRNA能够明显抑制Dp71蛋白表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以Dp71 shRNA2对Dp71表达的干扰效率最强。结论:成功构建了3个有效针对人Dystrophin Dp71基因的shRNA干扰载体,3组质粒都能有效地抑制Dp71在GES-1和HBEC中的表达,其中以Dp71-shRNA2的抑制效率最高。
- 谭思创陈志康曹小霞文俏程张蔚林曾庆仁谭斯品
- 关键词：DYSTROPHIN
- 人FoxA1 shRNA载体构建与检测
- 2014年
- 目的构建有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,并验证其干扰效果。方法设计合成3对针对人FoxA1基因的和1对无同源性的shRNA片段,将合成的shRNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人FoxA1基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901),Realtime RT-PCR和Western-blotting检测干扰载体的干扰效率。结果①酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功。将空载体及各干扰载体分别转染人正常胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901)发现,和空白对照组相比,3组干扰载体能够从mRNA和蛋白表达水平明显抑制FoxA1的表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以3号质粒对Foxa1的干扰效率最强。结论成功构建了三个有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,三组质粒都能有效地抑制FoxA1在GES-1细胞和SGC-7901细胞中的表达。
- 文俏程张蔚林陈志康曹小霞陈子华谭思创肖献忠谭斯品
- 热休克因子1对肌营养不良蛋白71的表达调控及其可能机制
- 2013年
- 目的热休克因子1(heat shock factor-1,HSF1)是热休克反应中启动各种热休克蛋白(heat shock pro-tein,HSP)的诱导表达最重要的转录因子。肌营养不良蛋白71(dystrophin-71,Dp71)是肌营养不良蛋白表达最广泛的一个剪切本,在细胞信号传递、细胞生长等方面具有一定功能。HSF1是否可以调控DP71蛋白的表达,尚不清楚。本文对此问题进行了研究。方法生物信息学TESS分析Dp71启动子区;Western blot、RT-PCR等检测HSF1基因敲除小鼠脑、肺、心脏等器官Dp71表达;Hela细胞与A549细胞转染HSF1过表达与表达抑制质粒,然后检测Dp71表达水平。结果 TESS分析显示Dp71的启动子区有一个高评分的HSF1结合位点。HSF1基因敲除小鼠中,脑、肺、心脏等器官Dp71表达下降。转染HSF1过表达与表达抑制质粒后,Hela细胞与A549细胞中的Dp71表达水平出现相应变化。结论 HSF1极有可能是调控Dp71蛋白表达的一个转录因子,其调控机制与生物学意义有待进一步研究。
- 郑和鑫谭斯品
- 关键词：热休克因子1转录调控
- 非小细胞肺癌患者区域淋巴结LUNX基因表达及其临床意义被引量：8
- 2010年
- 目的:探讨人类肺组织特异性X蛋白(lung-specific X protein,LUNX)的基因诊断在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)微转移中的临床意义。方法:随机收集43例临床非小细胞肺癌患者作为实验组,同时随机收集15例良性肺部病变患者作为对照组。通过反转录-聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测人类LUNX的靶基因的mRNA在实验组和对照组患者淋巴结中的表达,并与患者相对应的临床病理资料进行相关性分析。结果:LUNX mRNA在两组患者的肺组织及肿块中均为阳性表达;实验组43例患者的87枚淋巴结中有33枚(37.93%)有LUNX mRNA表达,对照组15例肺部良性病变患者的26枚淋巴结中有2枚(7.69%)表达LUNX mRNA,两组比较差异有统计学意义(P(0.05)。LUNX mRNA淋巴结表达阳性与肺癌患者病理类型、细胞分化程度、临床分期有密切关系(r=0.660,0.500,0.460;P=0.011,0.017,0.021);而与患者性别、年龄、吸烟史,以及血清肺癌4项肿瘤标志物(CEA,CA125,NSE和CYFRA211)无明显关系(r=0.230,0.235,0.180,0.354;P=0.739,0.714,0.773,0.125)。结论:与传统的病理切片检查判断NSCLC淋巴结微转移相比,RT-PCR检测肺癌患者淋巴结LUNX mRNA的表达有较高的敏感性。LUNX mRNA的表达是检测肺癌微转移的一个有价值的指标,可为制定治疗方案和评估预后提供重要参考依据。
- 谭思创程章波马宇超谭斯品殷照初胡文喻风雷
- 关键词：非小细胞肺癌微转移反转录-聚合酶链式反应
- 血管活性肠肽对脓毒性休克大鼠肝损伤的保护作用被引量：1
- 2012年
- 采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)法制备脓毒性休克大鼠模型,探讨血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)对脓毒性休克大鼠肝损伤的保护作用及其可能机制.将48只雄性SD大鼠随机分成4组:假手术组(SO,n=12)、CLP组(n=12)、VIP组(n=12)和生理盐水组(NS,n=12).VIP组大鼠在行CLP术后即刻给予6 nmol VIP,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清谷丙转氨酶ALT和谷草转氨酶AST水平,同时检测血清炎症因子:促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),抑炎因子白介素-10(IL-10)的变化;取大鼠肝脏组织行病理检查.在6 h以后的各时间点,与NS组比较,VIP组TNF-α水平明显降低,IL-10水平持续升高,VIP组AST和ALT水平自12 h始明显降低,肝脏病理损伤明显改善.实验表明,VIP通过抑制促炎因子的生成并促进抗炎因子的产生在大鼠脓毒性休克肝损伤中发挥保护作用.
- 苏岑张兴利黄韵如郑和鑫肖献忠曾庆仁谭斯品
- 关键词：血管活性肠肽脓毒性休克肝损伤
