河北省自然科学基金(C2005000763)
- 作品数：6 被引量：14H指数：3
- 相关作者：李月红严霞王俊灵张祥宏王娟更多>>
- 相关机构：河北医科大学河北医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金科技部基础研究重大项目前期研究专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 维生素C对脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导的单个核细胞凋亡及增殖抑制作用的影响被引量：3
- 2006年
- 目的探讨维生素 C(vitamin C,VC)预处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导的人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,HPBMC)凋亡及其相关基因表达和增殖抑制作用的影响。方法采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)和蛋白印迹(Western blotting)方法研究不同剂量 VC 预处理后,DON 对 HPBMC 凋亡及相关基因 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达影响的变化,同时观察 VC 预处理对 DON 引起的增殖抑制作用的影响。结果FCM 检测结果表明,终浓度为2000μg/L 的 DON 可诱导体外培养的 HPBMC 凋亡,其凋亡率为(28.82±1.67)%,25μmol/L VC 预处理可明显抑制 DON 诱导的体外培养 HPBMC 凋亡(22.39±1.05)%,P<0.05,而100μmol/L VC 预处理则可明显增高 DON 诱导的 HPBMC 凋亡(36.07±2.92)%,P<0.05。Western blotting 分析结果表明,25μmol/L VC 预处理可明显降低 DON 诱导的HPBMC Bax 和 caspase-3蛋白高表达,同时使 DON 抑制的 Bcl-2蛋白表达明显升高。100μmol/L VC预处理可明显促进 DON 诱导的 Bax 和 Caspase-3蛋白的高表达,但对 DON 抑制的 Bcl-2表达无明显影响。不同剂量 VC(25μmol/L 和100μmol/L)预处理均可降低 DON 对 HPBMC 增殖的抑制作用(P<0.05),但不同剂量 VC 之间没有显著差异。结论 25μmol/L VC 预处理可一定程度地抑制DON 诱导的 HPBMC 亡及凋亡相关基因的异常表达,而100μmol/L VC 则促进 DON 诱导的HPBMC 凋亡。不同剂量 VC 预处理可以明显降低 DON 对 HPBMC 的增殖抑制作用。
- 周炳娟李月红张祥宏邢凌霄严霞王俊灵刘静邢欣
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇维生素C单核细胞淋巴细胞脱噬作用
- 维生素C对脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导的单个核细胞HLA-Ⅰ表达抑制作用的影响被引量：2
- 2006年
- 目的探讨不同剂量维生素 C(vitamin C,VC)对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导的体外培养人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,HPBMC)HLA-Ⅰ表达抑制作用的影响。方法采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)、免疫细胞化学和蛋白印迹(Western blotting)方法研究了不同剂量(25μmol/L 和100μmol/L)VC 预处理对 DON 诱导的 HPBMCHLA-Ⅰ表达抑制作用的影响。结果 FCM 定量检测结果表明,DON 处理组 HPBMC HLA-Ⅰ的表达与正常对照组相比明显降低(FI 值0.88±0.02比1.00±0.03,P<0.05)。25μmol/L 和100μmol/LVC 预处理+DON 组 HPBMC HLA-Ⅰ表达的 FI 值分别为1.15±0.06和1.10±0.02,均明显高于DON 处理组(0.88±0.02,P<0.05)。同时,25μmol/L 和100μmol/L VC 单独处理组 HPBMC HLA-Ⅰ的表达量也均明显高于对照组(FI 值1.28±0.03和1.25±0.05比1.00±0.03),表明 VC 可在一定程度上促进体外培养的 HPBMC HLA-Ⅰ表达(P<0.05)。免疫细胞化学结果表明,与 DON 处理组相比,两种不同剂量 VC 预处理+DON 组 HLA-Ⅰ表达阳性的细胞百分率比 DON 处理组明显增高(70.10%±6.90%和64.50%±5.50%比42.20%±4.30%,P<0.05)。蛋白印迹同样证实了以上结果。结论 VC 可一定程度的拮抗 DON 对体外培养的 HPBMC HLA-Ⅰ表达的抑制作用。
- 周炳娟李月红张祥宏邢凌霄严霞王俊灵刘静邢欣
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇维生素C单核细胞HLA抗原
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇抑制人食管上皮细胞HLA-Ⅰ分子蛋白表达被引量：1
- 2011年
- 目的探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对人正常食管上皮细胞(human leukocyteantigen-Ⅰ,HLA-Ⅰ)表达的影响。方法采用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)、免疫细胞化学染色(immunohistochemistry,IHC)以及反转录聚合酶链反应(reversetranscliption-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,从蛋白水平和mRNA水平上分析不同浓度DON处理24h后,体外培养的人正常食管上皮细胞HLA-Ⅰ表达的变化及剂量-效应关系。结果 IHC检测结果,不同浓度(50、100、1 000、2 000μg/L)DON处理24 h后,各处理组HLA-Ⅰ蛋白阳性细胞百分数均低于空白对照组,其中100、1000和2 000μg/L处理组差异有统计学意义(P<0.05);相关分析表明在0～2 000μg/L范围内,DON浓度与HLA-Ⅰ蛋白阳性细胞百分数之间存在明显的剂量-效应关系(r=-0.756,P<0.05)。FCM检测结果表明,DON在0～2 000μg/L范围内,随着浓度增加食管上皮细胞HLA-Ⅰ蛋白表达的荧光指数逐渐降低,两者之间存在明显的剂量-效应关系(r=-0.634,P<0.05)。RT-PCR结果显示,各处理组HLA-a mRNA的表达量与空白对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DON可剂量依赖地抑制体外培养的人正常食管上皮细胞HLA-Ⅰ蛋白的表达,但是对于mRNA表达无明显影响。
- 孙巍李月红严霞王娟王俊灵姚志刚
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇上皮细胞HLA抗原
- 成人食管上皮细胞的原代培养方法被引量：3
- 2009年
- 探讨一种简便实用、成本低、纯度高并且成熟稳定的成人食管上皮原代培养的方法。成人食管上皮细胞来源于食管癌患者手术切除食管的正常黏膜上皮。采用组织块法,分别在DMEM/F12混合培养基和1640培养基中培养成人正常食管上皮细胞。通过直接观察、细胞形态学观察和免疫细胞化学方法观察细胞的生长情况、细胞形态学特征及鉴定所得到的细胞。结果表明,与1640培养基相比,应用DMEM/F12混合培养基具有明显的优越性。正常食管上皮细胞在DMEM/F12混合培养基中生长较好,细胞融合快,成纤维细胞污染少,可以生长成为典型的"铺路石"样,可连续培养21天,组织块最多可以被迁移4次,且细胞生长状态良好。免疫细胞化学染色鉴定证实95%的细胞具有广谱细胞角蛋白,即确定是食管上皮来源的细胞。本研究应用改良的组织块法培养的正常食管上皮细胞纯度高、产量较大,可以满足正常食管上皮细胞恶性转化方面的研究工作,而且方法简便易行、成熟稳定,是一种适合推广应用的正常食管上皮细胞培养方法。
- 孙巍李月红张祥宏严霞曹富民王俊灵王娟姚志刚
- 关键词：食管上皮细胞细胞培养
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人食管上皮细胞TAP-1和LMP-2表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的：探讨不同浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）处理,体外原代培养的人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2表达的变化。方法：采用Western blot和RT-PCR技术从蛋白水平和mRNA水平上分析不同浓度的DON处理24小时,体外培养的人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2分子表达的变化规律及其量-效关系。结果：不同浓度（50、100、1 000、2 000μg/L）DON处理人食管上皮细胞24小时后,DON各处理组食管上皮细胞TAP-1蛋白的Western blot半定量检测结果分别为0.47±0.22、0.28±0.16、0.24±0.18和0.21±0.19,统计分析表明DON 100、1 000、2 000μg/L处理组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。相关分析表明,在0~2000μg/L浓度范围内,随DON处理浓度增高,食管上皮细胞TAP-1蛋白的表达量逐渐降低（r=-0.595,n=4,P〈0.01）。RT-PCR结果发现,经不同浓度DON处理食管上皮细胞TAP-1mRNA的相对表达量虽然呈现先升高后降低的趋势,但与对照组相比无统计学差异。DON各处理组LMP-2蛋白的Western blot半定量检测结果分别为2.25±1.03、3.31±1.35、1.90±1.19和2.12±0.22均高于空白对照组（0.91±0.21）,其中100μg/L处理组相对表达量最高,差异有统计学意义（P〈0.05）。RT-PCR结果,DON 100μg/L处理组的LMP-2 mRNA的相对表达量最高为2.23±0.56,明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。其余处理组差异无统计学意义。结论：DON可剂量依赖地抑制体外培养的人正常食管上皮细胞的TAP-1蛋白的表达,但对TAP-1的mRNA未见显著影响。DON（100μg/L）可以促进食管上皮细胞LMP-2蛋白和mRNA表达,其余各浓度未见明显影响。
- 李月红孙巍严霞王娟王俊灵姚志刚张祥宏
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇
- 人正常食管鳞状上皮不同原代培养方法的比较被引量：4
- 2011年
- 该研究通过比较人正常食管鳞状上皮不同的原代培养方法,以期为不同的实验目的提供不同的培养方法。实验用到的正常食管粘膜上皮来源于食管癌患者手术切除的标本,采用组织块法和酶消化法,分别用DMEM/F12混合培养基和K-SFM无血清培养基进行培养。通过直接观察、细胞形态学观察和免疫细胞化学方法观察细胞的生长情况、细胞形态学特征及鉴定所得到的细胞,比较不同方法与不同培养基组合中原代培养细胞的生长状况。用组织块法,在DMEM/F12混合培养基中人正常食管上皮细胞生长较好,细胞融合较快,成纤维细胞污染较少,15～17天上皮细胞铺满瓶底的70%～80%,获得的细胞数量大,但细胞传代后成纤维细胞污染严重。用酶消化法,在K-SFM无血清培养基中人正常食管上皮细胞生长好,细胞融合快,成纤维细胞污染基本消除,细胞纯度高,10～12天细胞便可以铺满瓶底的70%～80%,这种方法培养的细胞可以冻存、复苏和传代。其余各种培养方法所得细胞无论在生长状态、培养周期、成纤维细胞污染和传代方面均较前两种方法差。以上各种方法培养的细胞经免疫细胞化学染色鉴定证实细胞呈广谱细胞角蛋白阳性,确定是食管上皮来源的细胞。酶消化法加K-SFM无血清培养基是本实验获得的原代培养食管上皮细胞的最佳方法,但是费用相对较高。组织块法加DMEM/F12混合培养基价格低廉,但周期较前者稍长且不能用于传代。两者均是适合广泛应用的正常食管上皮细胞培养方法,可以根据不同需要选择不同方法。
- 何晓琳李月红张祥宏严霞王俊灵
- 关键词：食管上皮细胞原代培养
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对成人食管上皮细胞TAP-1、LMP-2表达的影响
- 目的探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人正常食管上皮细胞TAP-1、LMP-2表达的影响。方法采用Western blot和RT-PCR技术从蛋白水平和mRNA水平上分析不同浓度的DON处理24h,体外培养的人正常食管上...
- 李月红孙巍严霞王娟王俊灵姚志刚张祥宏
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇
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