国家自然科学基金(30170532)
- 作品数：11 被引量：39H指数：4
- 相关作者：李明黄建生董文其王萍骆利敏更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学南方医科大学解放军第458医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病毒多表位治疗性抗原基因的合成、表达及抗原性研究被引量：10
- 2003年
- 目的研究乙型肝炎病毒多表位治疗性疫苗基因的合成、表达及其产物的抗原性。方法设计、并合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因BPT,克隆入融合表达载体pWR450-1,构建重组质粒PWR/BPT。在大肠杆菌中表达乙型肝炎多表位抗原蛋白并纯化该蛋白,并用Western-blotting方法初步检测该抗原蛋白的抗原性。结果成功构建了融合表达载体PWR/BPT,在大肠杆菌中表达出乙型肝炎多表位抗原蛋白,Western-blotting 检测显示该蛋白具有良好抗原性。结论HBV多表位治疗性抗原基因的设计是成功的,其在大肠杆菌中表达的重组融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物。
- 骆利敏李明夏虎黄建生陈百虹王萍
- 关键词：乙型肝炎多表位治疗性疫苗
- HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞中的转染与表达被引量：1
- 2003年
- 目的观察HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞株nepG2细胞内表达情况。方法将构建的HBc与HBV多表位复合基因真核表达质粒pHBcMep以Lipofectamine介导转染HepG2细胞,通过间接免疫荧光、Western-blot检测表达产物。结果经G418筛选的阳性转染细胞经间接免疫荧光染色后在紫外光激发时发出明显的荧光,而未转染质粒或转染pcDNA3.1的HepG2细胞则无明显荧光。Western-hot结果显示表达产物约为33kDa,并能与抗preS2多抗特异性结合。结论HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞内获得正确表达。
- 田泽维董文其刘朝霞李明黄建生
- 关键词：HBCHBV肝癌转染
- 稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株的筛选与鉴定被引量：2
- 2003年
- 目的建立稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株。方法将以HBV多表位复合基因取代脊区基因的杂合HBc真核表达质粒转染NS-1细胞,经G418及亚克隆筛选高表达阳性细胞株,并以RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测、鉴定重组细胞表达产物。结果筛选所得稳定表达细胞株经RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测均呈阳性反应,而阴性对照及空白对照未出现相应阳性反应。结论筛选获得稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组细胞株,命名为NS/HBc-Mep。为建立HBc-Mep特异的cELISA及CTL活性测定等实验方法提供可靠的靶细胞。
- 田泽维董文其刘朝霞
- 关键词：乙型肝炎病毒核心抗原
- HBV多表位复合基因在NS-1细胞的表达
- 2003年
- 目的 研究HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因在哺乳动物细胞NS - 1内的表达。方法 PCR扩增HBc 1～ 72aa及 93～ 1 83aa编码序列并合成HBV多表位复合基因 ,定向克隆至pcDNA3 .1 (+)。经双酶切及核苷酸序列测定等方法筛选阳性克隆。阳性质粒以Lipofectamine介导转染NS - 1细胞 ,通过ELISA及间接免疫荧光等方法检测细胞表达产物。结果 双酶切及测序结果证实阳性质粒正确克隆了约 890bp的HBc与HBV多表位复合基因的杂合基因。重组子成功转染NS - 1细胞并表达HBc-Mep融合蛋白。 结论 HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因在哺乳动物细胞NS - 1内正确表达目的蛋白。为研究pHBc -Mep作为DNA疫苗的免疫活性奠定基础。
- 田泽维董文其王萍吴英松李林海李明黄建生
- 关键词：HBVHBC细胞转染CELL
- 乙肝多表位抗原基因非融合表达载体的构建和表达
- 2008年
- 目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)多表位基因的在原核载体中的克隆、游离表达及其产物的抗原性。方法:设计、并合成HBV多表位抗原基因BPT,克隆入原核表达载体pBAD/gIIIA,进而转化Top10大肠杆菌,阿拉伯糖诱导表达出HBV多表位抗原蛋白(B-BPT),并用Western blot方法初步检测该抗原蛋白的抗原性。结果:成功构建了原核表达载体pBAD/BPT,在大肠杆菌中表达出HBV多表位抗原蛋白B-BPT,Western blot检测显示该蛋白具有良好抗原性。结论:HBV多表位抗原基因的设计是成功的,其在大肠杆菌中表达的非融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物。
- 骆利敏夏虎李灼亮余宙耀刘树人李明
- 关键词：乙型肝炎病毒多表位治疗性疫苗
- 乙型肝炎病毒治疗性多表位基因疫苗在小鼠中的免疫应答研究
- 2011年
- 目的:分析乙型肝炎病毒(HBV)重组多表位抗原基因在大肠杆菌中非融合表达的蛋白B-BPT的免疫原性,以期为HBV预防/治疗性疫苗的研制奠定实验基础。方法:构建重组质粒pBAD/BPT,并在大肠杆菌中诱导表达。以纯化的蛋白B-BPT免疫BALB/c小鼠,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测该融合蛋白诱导的小鼠细胞毒T淋巴细胞(CTL)应答。用流式细胞术(FCM)检测小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的比例,用MTT比色法检测淋巴细胞的增殖效应。结果:B-BPT蛋白免疫BALB/c小鼠后,可诱导特异性CTL应答(P<0.05,与空白对照组比较);B-BPT蛋白免疫后,可显著刺激小鼠脾淋巴细胞增值(P<0.05,与空白对照组比较)。结论:该非融合表达的蛋白B-BPT可有效地诱导小鼠特异性CTL免疫应答,为进一步研制乙肝预防治疗性疫苗奠定了基础。
- 骆利敏夏虎刘树人李明
- 关键词：乙型肝炎病毒治疗性疫苗多表位抗原
- 乙型肝炎病毒多表位抗原基因的设计、合成及表达被引量：15
- 2004年
- 目的 设计合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因并在大肠杆菌中表达 ,以期获得兼具预防和治疗作用的新型乙肝疫苗。方法 设计并合成一条乙型肝炎病毒 (HBV)多表位抗原基因 (P T) ,该基因包括HBV前S2区的核苷酸序列 ,和分别来自乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、乙型肝炎DNA聚合酶的其它 4个连续的HLA限制性抗原表位的核苷酸序列。基因合成后克隆入载体质粒pWR4 5 0 1,转化大肠杆菌BL2 1,IPTG诱导P T基因与载体质粒的 β 半乳糖酐酶基因融合表达。结果 成功合成并拼接出乙型肝炎多表位抗原基因P T ,阳性重组子PWR HBV P T构建成功 ,并在大肠杆菌中融合表达出相对分子质量 (Mr)约 75× 10 3的碱性蛋白质。结论 初步设计成功HBV多表位抗原基因 ,在大肠杆菌中可表达出具有良好抗原性的重组融合蛋白 ,可能是较理想的HBV预防、治疗性疫苗候选物。
- 骆利敏李明夏虎黄建生王萍董文其
- 关键词：乙型肝炎病毒基因表达HBV疫苗
- 乙型肝炎病毒多表位抗原基因真核表达载体的构建及其在哺乳动物细胞中的表达被引量：2
- 2004年
- 将自行设计、合成的乙型肝炎病毒多表位抗原基因BPT ,克隆入真核表达载体pCDNA3 1,构建重组质粒pCDNA3 1/BPT。后者经脂质体法转染小鼠BALB/c 3T3细胞 ,G4 18加压筛选出阳性转染细胞 ,并用间接免疫荧光法鉴定其在小鼠BALB/c 3T3细胞的表达。该重组质粒经胫骨前肌注射小鼠 ,10 0 μg/次每只小鼠 ,间隔 2周加强一次 ,共 3次。免疫诱发了特异性抗体和淋巴细胞增殖反应 ,并用PCR法在小鼠的心脏、肝脏及肺组织中检测到pCDNA3 1/BPT 。
- 骆利敏李明夏虎黄建生吴英松
- 关键词：乙型肝炎DNA疫苗转染免疫应答
- 以HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达载体的构建被引量：6
- 2002年
- 目的 构建以HBVHBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达质粒 ,以探讨HBV基因免疫的新途径。方法 PCR扩增HBc第 1～ 72aa及 93～ 183aa编码序列并定向克隆至pcDNA3.1的NheⅠ /XhoⅠ位点 ,构建真核表达载体pHBcdM。合成HBV多表位基因并插入HBc原脊区基因位点 ,构建HBc Mep融合基因真核表达质粒。经PCR、酶切及序列测定等方法筛选阳性质粒。结果 双酶切及测序结果证实阳性质粒正确克隆了约 885bp、编码HBc与HBV多表位的复合基因。结论 成功构建了以HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达载体pHBc Mep ,为研究pHBc Mep作为DNA疫苗的免疫活性奠定基础。
- 田泽维董文其李明王萍黄建生
- 关键词：HBVDNA疫苗
- 乙型肝炎病毒颗粒性抗原转基因番茄植株的构建及鉴定被引量：3
- 2004年
- 目的构建乙型肝炎病毒(HBV)颗粒性抗原转基因番茄植株。方法将乙型肝炎病毒preS/S基因插入到HBc的第73～94aa处(棘突尖部),再把整个复合基因克隆到植物表达载体pBIN438(含35s起动子)中,通过液氮冻融法转化根瘤农杆菌eha105,采用叶盘法转化番茄。结果得到一批转基因番茄植株,经PCR、PCR-Southernblot和Souhternblot证实HBc-HBs基因已整合到番茄基因组中;经Westernblot证实HBc-HBs能在番茄中有效表达。结论成功构建了乙肝颗粒性抗原基因的转基因番茄植株,为下一步进行该番茄疫苗株的效果评价奠定了基础。
- 刘高峰董文其陈丽珊李凤梅任大明李明黄建生
- 关键词：转基因番茄乙型肝炎病毒
