武汉市青年科技晨光计划(200950199019-03)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：范丽梅罗锋余腾李正蒋琳更多>>
- 相关机构：江汉大学更多>>
- 发文基金：武汉市青年科技晨光计划武汉市市属高等学校科学研究重点项目湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 串联表达载体中短重复序列(BmKb1)_n模板的PCR效率及其优化条件研究
- 2012年
- 采用Overlap PCR法获取BmKb1基因,构建载体pGEX-6p-1/BmKb1,同尾酶技术用于构建串联表达载体pGEX-6p-1/(BmKb1)n(n=2,4,6,8,10)。以pGEX-6p-1/(BmKb1)n为模板,使用标准PCR程序研究短重复序列PCR效率;以BmKb1八倍体为模板,分别研究PCR循环数、引物终浓度及退火温度对短重复序列PCR效率及特异性的影响。结果表明:串联重复序列数目增加,则非特异性条带增加,特异性条带含量减少;BmKb1基因串联体PCR扩增在18～20循环数、引物终浓度为0.05～0.1μM、60～62℃较高退火温度时,可获得相对高产量高特异性BmKb1基因串联体PCR片段。本研究将为串联表达载体克隆、筛选、测序及基因组STRs序列克隆测序提供技术参考。
- 范丽梅李正余腾刘燕群罗锋
- 关键词：PCR
- 感受态细胞制备和质粒转化冰浴时间对大肠埃希菌转化效率的影响被引量：5
- 2011年
- 通过研究转化实验中加入质粒DNA的量、大肠埃希菌感受态细胞制备和质粒转化过程中冰置时间长短对感受态细胞最终转化效率的影响,分析其最佳转化效率参数,优化感受态制备和转化方法.结果表明,加入质粒(pBR322)DNA量为1～10ng,感受态制备过程中菌液冰浴时间在30～60min,以及感受态细胞加入质粒DNA并混匀后的冰置时间为30min和120 min时,其转化效率达到最高,在此范围之外,感受态的转化效率下降.本研究结果可为有高转化率要求的克隆转化实验提供有用的技术基础.
- 罗锋余腾范丽梅
- 关键词：质粒感受态细胞
- 东亚正钳蝎毒素基因BmKbpp的原核表达及其抗菌功能初步鉴定被引量：2
- 2012年
- 一级结构分析和二级结构预测表明无二硫键蝎毒液多肽(NDBPs)BmKBPP具两亲性α-Helix结构,含有大量带净正电荷的碱性残基(Arg和Lys),符合多价阳离子抗菌肽的典型特征。采用PCR法和质粒载体pGEX-5X-1构建BmKbpp、EGFP及BmKbpp/EGFP与GST的原核融合表达载体,3个表达载体与pGEX-5X-1分别在Rossetta(DE3)菌中进行表达,并测定4个Rossetta(DE3)表达工程菌诱导表达的生长曲线。结果表明,BmKBPP是一个具有很强抑菌功能的抗菌肽,GST、BmKBPP及EGFP3个蛋白一起融合表达可获得少量蛋白的表达,这将为后续的功能研究和应用研究奠定基础。
- 罗锋李正范丽梅梁勇林燕蒋琳
- 关键词：蝎毒素抗菌肽原核表达
