公共文化服务平台

p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测被引量：5: 2003年; 目的　获得NF κBp65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因 ,并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法　利用引物二聚体搭桥技术 ,扩增p65亚基DNA结合域基因片段 ,并将其克隆入酵母双杂交载体pG BKT7DNA BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH10 9,在SD Trp选择培养基上培养 ,观察转化株的生长情况。按尿素 SDS法抽提酵母蛋白 ,用SDS PAGE电泳和Western blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株 β 半乳糖苷酶的活性。结果　获得p65DNA结合域基因片段 ,并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达 ,对酵母细胞无毒性作用 ,无自身激活活性。结论　NF κBp65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因 ,用于肽库筛选。; 徐祥梁华平刘昕代佳平刘琛罗艳王正国; 关键词：P65 DNA结合域克隆核因子ΚB 酵母双杂交酵母表达

转录因子圈套策略研究进展被引量：5: 2001年; 转录因子圈套策略 (transcriptionfactor“decoy”strategy)是应用与顺式元件相一致的寡核苷酸双链转染细胞 ,竞争结合转录因子 ,从而抑制内源性基因表达 .; 王付龙徐祥梁华平刘昕; 关键词：圈套策略转录因子基因治疗基因调控

酵母双杂交随机肽库的设计及构建被引量：2: 2004年; 目的　构建一个含 16个氨基酸的酵母双杂交随机肽库。方法　设计合成编码 16肽的随机DNA片段 ,PCR扩增随机DNA片段 ,经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后克隆入酵母表达质粒pGADT7GH ,构建酵母双杂交随机肽库质粒pGADT7GH RP并检验其库容。结果　扩增获得编码 16肽的随机DNA片段 ,并成功将随机DNA片段克隆入酵母表达质粒pGADT7GH ,与GAL4AD形成融合蛋白 ,其库容为 1 2 8× 10 7。; 胡承香徐祥梁华平吕凤林王付龙王正国; 关键词：随机肽库酵母双杂交 GH

核因子κB的跨核膜转运及其调控机制被引量：6: 2002年; 核因子kappaB (NF κB)是一组重要的转录调节因子 ,当细胞处于静息状态时 ,它与抑制蛋白IκB结合以非活性的形式存在于胞浆中 .当细胞受到多种外界信号刺激 ,NF κB、IκB分别在核定位信号 (NLS)的介导下经核孔复合物 (NPC)转运入核 .在核内 ,NF κB与IκB再次结合成复合物 ,在核转出信号 (NES)介导下 ,经CRM 1依赖的途迳出核 .该过程是能量依赖的主动转运过程。; 沈利群徐祥吕凤林梁华平; 关键词：核因子КB

酵母双杂交随机环肽库的构建、鉴定与扩增: 2003年; 目的 :构建含 16个氨基酸的酵母双杂交随机环肽库。方法 :以PCR扩增人工合成的随机DNA模板 ,经BamHI和EcoRI酶切后 ,克隆入酵母表达质粒pGADT7GH ,构建酵母双杂交随机环肽库并检验其库容及随机性 ,扩增、抽提并纯化酵母双杂交环肽库质粒。结果 :构建了酵母双杂交随机环肽库 ,库容为 1.2 8× 10 7,氨基酸分布与理论频数无显著差异 ,并扩增获得大量高纯度的环肽库质粒。结论 :成功地构建酵母双杂交随机环肽库 ,并获得大量高纯度的环肽库质粒。; 徐祥梁华平王付龙罗艳王正国; 关键词：酵母双杂交扩增

核因子-κBp50亚基同源结构域的克隆鉴定及自主报告基因活性的检测被引量：1: 2004年; 目的 :获得NF κBp5 0亚基同源结构域 (RHD)cDNA及构建酵母双杂交系统的“饵”载体 ,并检测靶基因的酵母细胞毒性及自主报告基因的活性。方法 :提取人外周血单个核细胞(PBMC)的总RNA ,以RT PCR扩增NF κBp5 0亚基RHD基因片段 ,重组入酵母双杂交载体pGBKT7中。应用乙酸锂法 ,将重组质粒转化酵母细胞AH10 9,在SD/ Trp选择培养基上培养 ,观察转化株的生长情况 ;用滤膜影印法验证靶基因有无自主报告基因的活性。结果 :经酶切及PCR鉴定 ,重组质粒中插入片段的大小与预期的结果相符。测序结果表明 ,其基因序列正确 ,无读码框移位 ,命名为pGBKT7 p5 0。转化酵母细胞后 ,对酵母细胞无毒性也无自主报告基因的活性。结论 :pGBKT7 p5 0可作为酵母双杂交系统中的“饵”载体 ,用于后续的肽库筛选 ,捕捉与靶基因相互作用的多肽。; 沈利群梁华平吕凤林徐祥李生茂胡承香李磊; 关键词：核因子-ΚB P50 酵母双杂交系统

核因子-κB反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统的建立与应用被引量：5: 2003年; 建立核因子 κB (NF κB)反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP)报告系统 ,作为筛选NF κB拮抗药物及研究其相关信号转导途径的工具 .分别以EGFP与d2EGFP为报告基因、neor 为筛选基因 ,构建成 4×κB基序为增强子、SV40为基本启动子的报告基因载体 p4κB EGFP和 p4κB d2EGFP .两载体分别与p6 5载体瞬时共转染HEK2 93细胞 ,通过比较不同时相点EGFP和d2EGFP的调控表达 ,证明 p4κB d2EGFP是较理想的NF κB反应性绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因载体 .将 p4κB d2EGFP稳定转染HEK2 93细胞 ,从而获得NF κB反应性报告细胞株HEK d2EGFP .应用NF κB“圈套”寡核苷酸 (TFD)与 p6 5载体瞬时共转染HEK d2EGFP ,1mg/L NF κB和 2mg/LNF κBTFD组对p6 5蛋白诱导调控表达的d2EGFP具有明显拮抗作用 .结果表明 ,NF κB反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测NF κB的活性变化 .; 王付龙梁华平刘昕徐祥王正国; 关键词：核因子-ΚB 基因表达调控寡核苷酸

针对SIRS的新型抗炎靶点及抗炎策略研究进展——从炎症介质到核因子-κB被引量：47: 2001年; 梁华平王正国朱佩芳; 关键词：多器官功能障碍综合征炎症介质核因子-ΚB

核因子-κB p50亚基同源结构域相互作用多肽的筛选: 2006年; 目的应用酵母双杂交技术筛选获得与NF-kB p50亚基同源结构域(RHD)相互作用的多肽。方法应用酵母双杂交技术,以NF-kB p50 RHD为诱饵,筛选16肽cDNA文库,寻找与其相互作用的多肽,应用β-GAL实验、酵母交配实验及一对一酵母回复性杂交等方法筛除假阳性克隆,确定阳性克隆。结果经酵母双杂交及反复的排查,共获得8个阳性克隆。通过GenBank进行搜寻,未发现与之相匹配的蛋白序列。结论获得8个与NF-kB p50 RHD相互作用的新型多肽cDNA,多肽的功能需进一步验证。; 沈利群梁华平徐祥吕凤林李生茂; 关键词：核因子-ΚB P50 酵母双杂交系统

酵母双杂交随机肽库的设计及构建被引量：6: 2003年; 构建一个含16个氨基酸的酵母双杂交随机肽库,设计合成编码16肽的随机DNA片段,PCR扩增随机DNA片段,经限制性内切酶BamHI和EcoRI酶切后克隆入酵母表达质粒pGADT7GH,构建酵母双杂交随机肽库质粒pGADT7GH-RP并检验其库容。结果表明,扩增获得编码16肽的随机DNA片段,并成功将随机DNA片段克隆入酵母表达质粒pGADT7GH,与GAL4AD形成融合蛋白,其库容为1.28×107。从而成功地构建了酵母双杂交随机肽库。; 胡承香徐祥梁华平王付龙罗艳王正国; 关键词：蛋白质

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

国家自然科学基金(30080009)