广州市科技计划项目(2010U1-E00611)
- 作品数：6 被引量：60H指数：4
- 相关作者：张菊梅吴清平郭伟鹏范宏英龙北国更多>>
- 相关机构：南方医科大学广东省微生物研究所中国科学院大学更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 食品污染克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的分离及鉴定被引量：24
- 2013年
- 【目的】对300份奶粉样品和50份非奶粉类食品中克罗诺杆菌的污染情况做定量检测,并对分离得到的克罗诺杆菌进行鉴定。【方法】通过分子方法和9管法对奶粉和其他食品中克罗诺杆菌的污染情况做定量检测;通过吲哚产生、丙二酸盐利用、卫矛醇、肌醇、松三糖和松二糖发酵产酸等六种生化试验对分离株进行鉴定;同时对分离株的16S rRNA基因序列进行同源性分析,通过N-J(Neighbour-Joining)法构建系统发育树。【结果】定量检测结果表明,350份样品中有23份样品分离出克罗诺杆菌,共分离到24株克罗诺杆菌,检出率为6.6%;23份受污染样品中有4个样品的克罗诺杆菌大于100 MPN/100g;24株克罗诺杆菌被鉴定到种或亚种,其中19株为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii);2株为丙二酸盐克罗诺杆菌(C.malonaticus);2株为都柏林克罗诺杆菌奶粉亚种(C.dublinensis subsp.lactaridi);1株为莫金斯克罗诺杆菌(C.muytjensii)。【结论】分子方法和9管法联用适合污染率低而定量检测要求高的克罗诺杆菌的奶粉调查;采用生化和分子生物学方法将24株分离株鉴定到种或亚种,其中阪崎克罗诺杆菌为优势种;奶粉中克罗诺杆菌的污染问题对婴幼儿安全存在隐患,应引起消费者和有关部门的重视。
- 董晓晖李程思吴清平张菊梅莫树平郭伟鹏杨小鹃徐晓可
- 关键词：RRNA基因系统发育树
- 环介导等温扩增法检测大肠埃希菌耐药基因ampC方法的建立及初步应用被引量：1
- 2013年
- 目的:建立环介导等温扩增(LAMP)检测大肠埃希菌耐药基因ampC的方法,并评价其临床应用价值。方法:设计3对特异性LAMP引物,建立25μL的LAMP检测体系并进行优化,确定最佳反应时间;与PCR进行比较检测其特异性和灵敏度;对54株临床分离的大肠埃希菌分别进行LAMP检测和药敏试验,评价检测耐药基因的临床应用价值。结果:成功建立了检测大肠埃希菌耐药基因ampC的LAMP方法,在65℃保温1h可实现对ampC基因的快速检测,其特异性与PCR一致,灵敏度高出PCR约10倍,耐药基因的检测与药敏试验有统计学差异(P=0.000)。结论:LAMP检测技术可望发展为快速、准确检测细菌耐药基因的方法,但目前尚不能替代药敏试验指导临床用药。
- 张志远龙北国彭亮范宏英吴娴波
- 关键词：环介导等温扩增大肠埃希菌AMPC酶耐药基因
- 检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7的环介导等温扩增和PCR法比较被引量：7
- 2012年
- 目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较。方法针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果。结果成功建立了LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限低至10 cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对39株近源菌进行检测,结果显示,LAMP法仅7株EHEC O157:H7得到阳性结果,非EHEC O157:H7菌株均为阴性,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP法特异性比PCR法高。对于32份猪肉样品的检测,LAMP和PCR与常规检测结果一致,3份样品检测阳性。结论 LAMP检测技术的特异性和灵敏度较PCR高,并且操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速准确检测EHEC O157:H7的有效手段。
- 姜容龙北国曾桂芬王丹范宏英吴娴波
- 关键词：肠出血性大肠埃希菌O157:H7环介导等温扩增技术PCR技术
- LAMP和PCR法检测痢疾志贺菌的特异性和灵敏性比较被引量：15
- 2012年
- 目的建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测痢疾志贺菌,并对其特异性、灵敏度与传统PCR进行比较。方法以痢疾志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)为靶序列,设计6条特异性引物(内引物、外引物和环引物各2条),优化LAMP反应体系及反应条件,检测LAMP反应的灵敏度、特异性及模拟样品,同步与PCR进行比较。结果 LAMP法和PCR均能特异性地扩增出志贺菌靶DNA,而其他非志贺菌均未扩增出特有条带。检测细菌纯培养物和模拟食品的灵敏度LAMP法分别为5.3×101cfu/ml、6.8×101cfu/ml,PCR法分别为5.3×102cfu/ml和6.8×102cfu/ml。结论利用LAMP技术,可快速、灵敏、简便地检测痢疾志贺菌,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低、耗时短,有望发展成为快速检测痢疾志贺菌的有效手段。
- 曾桂芬龙北国姜容刘行超廖韫婕范宏英
- 关键词：环介导等温扩增技术痢疾志贺菌IPAH基因
- 沙门氏菌1,4,[5],12:i:-耐药性和遗传特征研究进展被引量：15
- 2014年
- 近10年来,一种与鼠伤寒沙门氏菌具有相似抗原的非典型沙门氏菌血清型1,4,[5],12:i:-在全球多个国家检出率大幅度增加,目前已被列为引起人类沙门氏菌病的主要血清型之一。沙门氏菌1,4,[5],12:i:-菌株具多重耐药特性,存在分别以质粒和染色体介导的两种主要的多重耐药菌株(西班牙株系和欧洲株系)。多个抗生素抗性基因(blaTEM、blaCTX-M-1、aac(3)-IV、aadA2、cmlA1、sul1、sul2、dfrA12、strA-strB、tet(A)和tet(B))在1,4,[5],12:i:-耐药菌株中检出。遗传特征分析显示,沙门氏菌1,4,[5],12:i:-与鼠伤寒沙门氏菌具有很高的遗传相似度,并且推测是由于多个独立的遗传事件的改变,导致鼠伤寒沙门氏菌变异而产生不同的1,4,[5],12:i:-株系。对于沙门氏菌1,4,[5],12:i:-,相关快速、准确检测方法的建立及致病、耐药机制研究将是今后的重要方向。
- 杨小鹃吴清平张菊梅郭伟鹏
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌
- 两种弧菌显色培养基在疑似副溶血性弧菌鉴定中的效果比较被引量：1
- 2012年
- 为了比较环凯和科玛嘉弧菌显色培养基对食品中可疑菌株的初步鉴定作用,本文按国标(GB/T4789.7-2008)程序,以环凯和科玛嘉弧菌显色培养基初步鉴定硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂(TCBS)的副溶血性弧菌可疑菌株,最后用API和MID鉴定证实。在97份食品样品的定性与定量检测中,TCBS疑似菌株有109株,对应样品有31份。环凯和科玛嘉弧菌显色培养基对109株TCBS可疑菌株初步鉴定的结果相同,均检出64株显紫色的可疑菌株,对应样品22份。经API和MID确认,阳性菌株60株,阳性样品为22份,阳性率为22.68%。两种培养基初步鉴定TCBS可疑菌株的敏感性、特异性和符合性均分别为100.00%、91.84%和96.33%。环凯和科玛嘉弧菌显色培养基对TCBS的可疑菌株具有较好的初步鉴定效果。
- 徐晓可吴清平张菊梅吴葵张淑红郭伟鹏
- 关键词：食品副溶血性弧菌
