山东省自然科学基金(Y2007D78)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- 猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：2
- 2009年
- 根据文献合成1对针对PRRSV毒株ORF6基因高度保守序列的引物，建立用于检测PRRSV的SYBR GreenⅠ荧光定量RT～PCR诊断方法。提取PRRSV—LC病毒RNA，经所建立的荧光定量RT—PCR方法扩增，可获得特异的扩增曲线，而日本乙型脑炎病毒（JEV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）和猪圆环病毒（PCV）进行同条件检测，结果为阴性；方法可检测到1 TCID50 PRRSV，比琼脂糖凝胶电泳敏感度高10～100倍。结果表明，所建立的PRRSV荧光定量RT—PCR诊断方法特异性好、敏感性高，可进一步应用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断和科学研究。
- 王守山李玉保孟喜龙马飞
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- PRRSV对仔猪免疫力的影响被引量：5
- 2009年
- 为了研究PRRSV对仔猪免疫力的影响,试验将13头46日龄的健康仔猪随机分A、B、C 3组,48日龄时A组猪进行滴鼻接种PRRSV LC毒株(TCID50为1×10-5.25/0.1 mL)3 mL头/,B组猪滴鼻接种未接毒正常细胞培养物3 mL头/;50日龄时A组、B组猪免疫猪瘟疫苗4头份,C组猪肌肉注射生理盐水4 mL;免疫后1,7,14,21,28,35天利用ELISA和MTT等方法检测试验组猪猪瘟抗体水平和外周血T淋巴细胞转化率。结果表明,A组猪瘟抗体水平和T淋巴细胞转化率显著低于B组(P<0.05)有极显著的,说明PRRSV对仔猪免疫力有一定的抑制作用。
- 李玉保马飞孟喜龙王守山何永聚罗秀刚
- 关键词：体液免疫细胞免疫
- 嗜水气单胞菌弹性蛋白酶基因的克隆表达
- 2011年
- 为了研究嗜水气单胞菌重组弹性蛋白酶的酶学性质,试验根据GenBank中的嗜水气单胞菌弹性蛋白酶基因ahyB设计1对含酶切位点的特异引物,以嗜水气单胞菌J-1(AhJ-1)株为模板,经PCR扩增得到不含信号肽的成熟弹性蛋白酶基因片段(787 bp),并与pMD18-T载体连接、测序,再用DNAStar软件分析。结果表明:该基因片段与豚鼠气单胞菌胞外蛋白酶同源性高达95%,与嗜水气单胞菌AG2株弹性蛋白酶ahyB基因同源性为92%,与铜绿假单胞菌LasB基因同源性为82%;将PCR产物连入表达载体pET-32a,转化至大肠杆菌BL21菌株中进行诱导表达,出现50 ku的融合表达蛋白,该表达产物纯化复性后表现出酶的活性。
- 孟喜龙曹静李玉保赵志军
- 关键词：克隆表达酶活性
- PRRSV在仔猪体内的分布规律及其对组织的病理性损伤被引量：3
- 2009年
- 为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒在仔猪体内的分布规律及其对组织的病理性损伤，试验将3头60日龄的健康仔猪随机分为2组，A组2头，B组1头。A组滴鼻接种PRRSVLc毒株（TCID50为1×10^-5.25／0．1mL）3mL／头，B组为对照组，观察临床症状。攻毒25d后剖杀，采集淋巴结、脾脏、肺脏和肝脏各2份，其中一份进行中性福尔马林固定，制作石蜡切片，观察组织病理学变化；另一份在-70℃保存。利用RT—PCR检测PRRSV。病理学检查结果表明：肺脏出现明显的间质性肺炎，肺泡渗出物增多，可见局灶性出血；脾脏和淋巴结可见出血、增生；肝脏中央静脉及门管区静脉可见明显的淤血。利用RT—PCR方法在淋巴结、脾脏、肺脏和肝脏中都检测到了PRRSV。
- 李玉保孟喜龙马飞王守山罗济冠孙丽丽
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫器官
