河南省教育厅自然科学基金(511042300)
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
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- 基因载体图谱的阅读
- 2007年
- 载体(vector)是基因工程运载基因的工具,也成为分子生物学研究的常用工具之一。随着基因工程技术的发展,载体的种类也越来越多。介绍了载体的分类、特点,载体的基本要素,并对常见的质粒载体、病毒载体图谱的识别等作了介绍。
- 王天云井长勤
- 关键词：基因工程
- 基因重组Taq DNA聚合酶的制备被引量：7
- 2007年
- 目的制备重组Taq DNA聚合酶,为PCR提供试剂。方法用Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导12 h表达Taq DNA聚合酶,溶菌酶、NP40裂解细菌,硫酸铵沉淀、4℃透析,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和PCR扩增分析其纯度和活性。结果分离纯化制备的Taq酶,纯度、活性都可与同类产品相比,能有效扩增DNA片段。结论该方法制备可用于PCR的Taq酶具有快速简便的优点。
- 王天云秦川杨瑞杨献军
- 关键词：TAQDNA聚合酶基因工程分离纯化
- MAR提高稳定转化的CHO细胞转基因表达被引量：5
- 2008年
- 目的研究MAR在CHO细胞中对转基因的表达调控作用,为建立稳定高效表达的CHO表达系统奠定基础。方法将人β-珠蛋白MAR片段顺式克隆到氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因表达盒两侧,构建MAR介导的哺乳动物细胞表达载体,转染CHO细胞,G418筛选稳定表达细胞株,ELISA分析CAT报告基因的表达水平。结果β-珠蛋白MAR能提高5.5倍转基因CAT的表达水平,并可降低不同细胞转化株之间的转基因表达差异。结论MAR能提高转基因在稳定转染的CHO细胞的表达。
- 王天云韩忠敏杨献军董忠生王清义
- 关键词：核基质结合区转基因基因工程CHO细胞
- 2种制备Taq DNA聚合酶方法的比较被引量：2
- 2008年
- 目的比较2种制备纯化Taq DNA聚合酶的方法,为PCR提供实验用酶。方法Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,IPTG诱导12 h后收集菌体,分别用硫酸铵沉淀法和冻融法进行纯化,SDS-PAGE电泳和PCR扩增分析比较其纯度和活性。结果硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶活性能可有效扩增DNA片段;冻融法制备的Taq DNA聚合酶活性较低。结论硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶优于冻融法,能够达到分子生物学实验中基因扩增的要求。
- 秦川杨献军杨瑞王天云
- 关键词：TAQDNA聚合酶纯化
