国家自然科学基金(30870570)
- 作品数：8 被引量：29H指数：3
- 相关作者：吴泽志黄岂平张利光罗美蓉林雨更多>>
- 相关机构：重庆大学佐治亚大学佛罗里达国际大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市科技攻关计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 阵列型微拓扑结构基底的制备及其对神经细胞电生物物理特性的影响被引量：4
- 2011年
- 以紫外光光刻、硅蚀刻及软光刻技术制备了微柱阵列型细胞培养基底。实验发现,在4μm的结构高度下,当微柱特征尺寸大于或等于4μm时,该法能制备结构规整清晰的聚二甲基硅氧烷微柱阵列型基底。特征尺寸为2μm的基底已经接近该法的极限加工能力,所加工的微柱阵列出现倒伏或缺失。采用一种简单的倾斜角法可以制备一种聚苯乙烯微球致密阵列型基底。该基底的微球直径可以小至2μm或亚微米尺度。细胞培养实验发现,拓扑结构基底能促进神经细胞粘附与铺展,影响细胞静息电位水平,增强电压依从式钙通道功能响应。阵列型拓扑结构基底为构建传感器细胞微环境提供了有效的工程化手段。
- 吴泽志朱满根Kisaalita W SWang LZhao Y P林雨黄岂平廖彦剑Li C Z
- 关键词：软光刻
- 人血管内皮生长因子研究进展被引量：19
- 2012年
- 血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）为血管内皮细胞特异性肝素结合生长因子,在体内外均可诱导新生血管形成。人VEGF蛋白于1989年分别由美国两个生物科技公司的科学家成功纯化与鉴定,并且其基因序列被成功克隆及测定。
- 罗美蓉王正伟安志星
- 关键词：血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体肿瘤
- 三维微小凹图式的制备及其与C17．2神经干细胞的复合被引量：1
- 2012年
- 以紫外光光刻及氢氟酸湿法蚀刻加工硅阳模,采用基于聚二甲基硅氧烷(PDMS)的软光刻技术制备9种不同结构尺寸的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)和PMDS三维微小凹图式。PLGA及PDMS三维微小凹图式经等离子氧蚀刻和多聚赖氨酸裱衬处理后进行C17.2神经干细胞培养。随着在图式上培养时细胞的增殖,C17.2神经干细胞逐渐在微小凹中聚集,表现出明显的三维生长行为;通过羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色后进行激光共聚焦显微扫描与三维重构,显示大部分细胞生长于微小凹中离底面30～90μm的区间内;免疫荧光结果显示C17.2神经干细胞在三维微结构中复合培养2d后呈现均一的巢蛋白(Nestin)阳性。结论:本文设计的微小凹图式适用于C17.2神经干细胞的三维培养及后续的分化研究,细胞于微小凹图式培养过程中可以保持均一的干细胞特性。
- 张利光吴泽志宋兆全黄岂平廖彦剑Li Chenzhong
- 关键词：微加工C17.2神经干细胞
- 聚乳酸微柱阵列型拓扑结构基底上SH-SY5Y细胞VEGF和IL-8的分泌及表达被引量：1
- 2013年
- 以紫外光光刻、硅蚀刻及复制模塑技术制备了聚乳酸(PLLA)微柱阵列型拓扑结构基底,考察了SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞在拓扑结构基底上的生长及血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素-8(IL-8)的分泌及表达。细胞的形态及铺展采用扫描电子显微图像进行分析,细胞在拓扑结构基底上生长24 h后的VEGF及IL-8分泌量采用ELISA进行检测,VEGF及IL-8在mRNA水平的表达量以实时定量PCR进行评价。实验中成功制备了微柱名义直径为2μm和4μm、微柱名义间距为2μm和7μm的4种拓扑结构基底。研究发现,SH-SY5Y细胞在2-2μm(微柱名义直径-名义间距)、4-2μm、4-7μm拓扑结构基底上的VEGF和/或IL-8分泌量和表达较之PLLA平面基底上相应值出现上调,而在2-7μm拓扑结构基底上VEGF及IL-8二者均表现出表达和分泌量大幅度和明显的上调。与在PLLA平面基底上相比,SH-SY5Y细胞在拓扑结构基底上表现出细胞形态(铺展面积及圆度)的明显变化,细胞VEGF及IL-8分泌量和表达的上调伴随细胞铺展面积的明显降低。结果表明微柱阵列型拓扑结构是影响SH-SY5Y细胞VEGF、IL-8分泌及表达的重要微环境因素,VEGF和IL-8可能构成SH-SY5Y细胞在拓扑结构基底上生长的重要分泌物标志。
- 范志刚林雨黄岂平罗美蓉田青华钟冬火冯全义吴泽志
- 关键词：实时定量PCR人神经母细胞瘤细胞
- 大鼠海马神经干细胞的扩增及与三维微小凹图式复合的研究被引量：3
- 2010年
- 目的比较2种培养基下海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的生长特性,进而实现海马NSCs扩增的优化及其与聚乳酸(poly-L-lactide,PLLA)三维微小凹图式的复合。方法分离大鼠胚胎海马细胞并采用Neurobasal为基础的培养基和DMEM/F12为基础的培养基进行扩增。以四甲基氮唑蓝(MTT)比色法及神经球数目统计法评价2种培养基下细胞增殖行为。采用紫外光光刻、硅蚀刻及软光刻技术制备PLLA三维微小凹图式并实现海马NSCs与微小凹图式的复合。结果原代分离的海马细胞呈神经干细胞标志物阳性并能向神经元系和胶质细胞系分化。在30d的扩增时间内,海马NSCs在以Neurobasal为基础的培养基中缓慢扩增聚集成神经球,少见细胞贴壁及分化;在以DMEM/F12为基础的培养基中海马NSCs扩增迅速,但易贴壁和分化。培养第25天时后者神经球数量为前者的4.7倍。微加工制备的微小凹图式结构清晰、稳定,具有高纵横结构比(≥1)。扩增的海马NSCs能在三维微小凹图式上成功复合生长。结论以DMEM/F12为基础的培养基有利于大鼠海马NSCs的扩增,以Neurobasal为基础的培养基利于海马NSCs的纯化。序贯应用2种培养基可有效扩增海马NSCs并实现其与三维微小凹图式的复合。
- 吕艳玲吴泽志张利光宋兆全于婷文灿阴金波陈景龙
- 关键词：海马神经干细胞神经球原代培养扩增微加工
- 聚乳酸三维微结构条件下人神经母细胞瘤细胞电压依从式钙通道的功能响应性被引量：1
- 2012年
- 以紫外光光刻、硅蚀刻及软光刻技术制备了聚乳酸(poly-L-lactide,PLLA)三维微小凹图式,考察人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)在微小凹结构上的生长与分布行为。以共聚焦显微技术结合钙离子荧光染料Calcium Green-1,AM评价SH-SY5Y细胞在PLLA三维微小凹图式和平面基底上电压依从式钙离子通道(VGCCs)的功能响应性。实验发现,分布在微小凹顶部的细胞为二维生长方式,凹内侧壁的为三维生长方式,凹内底部的为边界二维生长方式;以50 mmol/L高钾溶液去极化刺激发现,三维及边界二维细胞VGCCs阳性响应比率为75%和81%,较平面培养的91.2%明显降低。上述结果表明,PLLA三维微结构及细胞生长行为是影响SH-SY5Y细胞VGCCs功能响应性的重要因素,微小凹图式是模拟神经细胞三维生长环境进而构建三维细胞生物传感器的有效途径。
- 安治星黄岂平王正伟张利光罗美蓉廖彦剑金良KISAALITA W S吴泽志
- 关键词：人神经母细胞瘤细胞聚乳酸
- 三维微小凹图式的加工及其与人神经母细胞瘤细胞的复合被引量：4
- 2009年
- 采用紫外光光刻、硅蚀刻及软光刻技术分别制备了阴性光刻胶SU-8和聚乳酸及聚羟基乙酸共聚物(PLGA)微小凹图式。以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y与三维微结构进行复合,采用扫描电子显微镜、光学显微镜及caicein荧光染色评价所加工图式的结构形态及细胞的生长行为。实验制备出名义直径约100μm、高纵横比(接近或大于1)并可叠加微通道连接的SU-8及PLGA三维微小凹图式。所加工的图式透明,符合三维细胞生物传感器的光学检测的需要。细胞培养结果表明,该结构尺寸的图式能引导在三维环境神经细胞的排布、神经突起延伸及形态分化。
- 吴泽志KISAALITA W.S.ZHAO Y.-P.WANG L.张利光
- 关键词：微加工SU-8神经母细胞瘤细胞
- Substrate topographical engineering for neuronal cell-based biosensing
- ＜正＞There is mounting evidence that three-dimensional（3D） cultures may be superior to two-dimensional （2D） cult...
- William S.Kisaalita
- 文献传递
- PDMS微柱阵列型拓扑结构基底对肝癌细胞HepG2形态及功能基因表达的影响被引量：2
- 2013年
- 基于硅蚀刻及软光刻复制模塑技术,制备了4种聚二甲基硅氧烷（PDMS）微柱阵列型拓扑结构基底,其微柱名义直径为4μm或10μm,名义间距为4μm或7μm,名义高度为4μm。考察了人肝癌细胞株HepG2在拓扑结构基底与PDMS平面基底上的形态、生物合成和解毒相关分子标志物的分泌/表达。采用扫描电镜和相差显微图像分析发现,HepG2细胞接种于拓扑结构基底较之于平面基底上出现明显的形态铺展和极化程度变化。以ELISA检测显示,HepG2细胞在拓扑结构基底上的白蛋白分泌水平高于平面基底上的相应分泌量。用实时荧光定量PCR评价相关基因表达,发现HepG2细胞于拓扑结构基底上培养1-3天后,白蛋白、细胞色素P450第一家族A亚族蛋白多肽1和2（CYP1A1和CYP1A2）的mRNA表达量,高于平面基底上的相应表达值。在所研究结构尺寸范围的拓扑结构基底上,HepG2细胞较大的铺展面积和细胞圆度值以及较小的细胞长/短径比值伴随着较高的白蛋白分泌/表达量;较小的铺展面积和细胞圆度值以及较大的细胞长/短径比值却伴随着较高的CYP1A1和CYP1A2表达量。这些结果表明,基底拓扑结构是影响HepG2细胞形态及功能的重要微环境因素,并可成为基于肝细胞的反应器与微系统培养环境设计和细胞功能表型优化的有效工程化手段。
- 田青华林雨黄岂平冯全义张晃猷张义国吴泽志
- 关键词：ELISA实时荧光定量PCR
