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江苏省卫生厅资助项目(H200907)
作品数:
1
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重组人骨桥蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞向间质细胞转化的研究
被引量:2
2012年
目的观察骨桥蛋白(oPN)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)向间质细胞转化(EMT)的影响。方法依据加入的重组人骨桥蛋白(rhOPN)的浓度,将HK-2细胞分成6组,rh0PN的浓度依次为:0.00、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20mg/L,刺激时间为48h。采用共聚焦显微镜观察细胞形态学变化;实时定量聚合酶链反应(PCR)、Westernblot检测E-钙黏素(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)的表达;应用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡。结果在形态学上,rhOPN能够刺激HK-2细胞向间质细胞转变,通过实时定量PCR、Westernblot分析发现上皮细胞的表面标记E—cad随着刺激浓度的增加而逐渐降低,间质细胞的标记物α-SMA、FN的表达逐渐升高,实时定量PCR检测E.cad依次为:1947.0±301.0、1114.0±187.4、668.7±180.4、436.7±121.8、242.7±105.2、223.5±73.4;d.SNA依次为:0.01465±0.00338、0.03428±0.01200、0.06034±0.00565、0.09205±0.01068、0.11360±0.01892、0.18630±0.02175;FN依次为:0.000818±0.000103、0.001341±0.000203、0.001708±0.000128、0.002170±0.000161、0.003369±0.000314、0.004961±0.000364。Westernblot检测E.cad依次为:1.719±0.159、1.370±0.016、1.238±0.031、0.916±0.056、0.520±0.065、0.456±0.073;d-SMA依次为:0.623±0.127、0.640±0.031、0.865±0.045、1.015±0.107、1.290±0.103、1.381±0.040;FN依次为:0.475±0.044、0.499±0.062、0.904±0.066、0.981±0.052、1.272±0.093、1.614±0.056,各组之间差异有统计学意义(均P〈0.05),且随着OPN刺激浓度的增加,细胞的抗凋亡能力也逐渐增强。结论OPN能够刺激HK-2细胞向间质细胞转化,且呈现出明显的剂量依赖性。
邓仲磊
徐东亮
谭若芸
鲁佩
张炜
顾民
关键词:
骨桥蛋白
肾小管
上皮细胞
间质细胞
脱噬作用
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