国家自然科学基金(30500245) 作品数:17 被引量:62 H指数:5 相关作者: 张春 朱忠华 姜华军 刘建社 邓安国 更多>> 相关机构: 华中科技大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖北省卫生厅科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
醛固酮通过转化生长因子β1途径调节足细胞基质金属蛋白酶2和9表达 被引量:3 2009年 目的观察醛固酮(ALD)刺激对足细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、MMP-9)活性、Ⅳ型胶原的影响及探讨ALD对足细胞细胞外基质分泌、降解的调节机制。方法分别用不同浓度ALD(10^-11、10^-9、10^-7mol/L)以不同时间(24、48、72h)作用足细胞,并设立空白对照组。用明胶酶谱、Western印迹、ELISA方法检测培养上清液中MMP-2、MMP-9、Ⅳ型胶原仅5链及TGF-β1;流式细胞仪检测足细胞黏附率,同时观察ALD受体拈抗剂螺内酯(SPI)及TGF-β1受体抑制剂对上述效应的阻断作用。结果与对照组相比,ALD以时问及剂量依赖性导致培养上清液中MMP-2、MMP-9活性升高(P〈0.05);Ⅳ型胶原仪5链蛋白表达下降(P〈0.05);TGF-β1蛋白表达升高(P〈0.05)。SPI可完全阻断,而TGF-β1受体抑制剂SB314542可部分阻断ALD刺激足细胞引起的MMP-2、MMP-9活性升高、Ⅳ型胶原α5链蛋白及足细胞黏附率的下降(P〈0.05)。结论ALD通过TGF-β1途径使足细胞MMP-2、MMP-9活性升高,Ⅳ型胶原d5链蛋白表达下降,足细胞黏附率下降,从而使足细胞分泌基底膜成分异常,基底膜合成及降解失衡,导致足细胞损伤。 方展 孙希锋 何方方 朱忠华 张春关键词:足细胞 醛固酮 基质金属蛋白酶类 肾小球基底膜 CD2相关蛋白在肾脏细胞中的分布及其在足细胞中的作用 被引量:4 2008年 目的观察CD2相关蛋白(CD2AP)在肾脏不同细胞系中的表达分布,及其与足细胞裂孔隔膜分子nephrin和细胞骨架蛋白F-actin之间的联系。方法以DMEM培养基培养人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞系(HK-2),RPMI 1640培养基培养条件永生化小鼠足细胞系。以RT-PCR及Western blotting方法检测足细胞内CD2AP和nephrin的表达。间接免疫荧光结合激光共焦方法观察CD2AP在HMC、HK-2、未分化及已分化足细胞中的表达情况,及CD2AP与nephrin在足细胞中的共存。直接免疫荧光结合激光共焦方法观察F-actin在足细胞的表达及其与CD2AP的共存。结果CD2AP均匀分布于HK-2及未分化足细胞的核周及胞浆,而不表达于HMC细胞。在足细胞分化过程中,CD2AP的分布发生了变化,出现向周边聚集的现象。CD2AP与足细胞裂孔隔膜分子nephrin及细胞骨架蛋白F-actin在足细胞中存在共定位关系。结论CD2AP表达于上皮来源的肾脏固有细胞。CD2AP在足细胞中的分布特点,提示CD2AP可能参与足细胞的分化过程,并与裂孔隔膜分子功能及细胞骨架调节有关。 姜华军 张春 朱忠华 刘建社 邓安国关键词:CD2相关蛋白 足细胞 肾小管上皮细胞 系膜细胞 激光共焦显微镜 活性氧介导醛固酮诱导的足细胞凋亡 被引量:2 2010年 目的 观察醛固酮(ALD)及其受体拮抗剂螺内酯(SPI)对足细胞活性氧(ROS)产生及凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法 体外培养条件的永生化小鼠足细胞系,分为空白对照组、ALD组、SPI组、ALD+SPI组;用荧光分光光度计检测足细胞内ROS水平;间接免疫荧光检测nephrin表达;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;RT-PCR、Western印迹法检测bax、bcl-2 mRNA及蛋白表达.同时观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对上述效应的阻断作用.结果 与对照组相比,ALD诱导足细胞ROS产生增多(P<0.05),该作用可被SPI阻断(P<0.05).ALD可诱导足细胞nephrin表达降低及足细胞凋亡(P<0.05),同时伴有bax mRNA、蛋白表达升高及bcl-2 mRNA、蛋白表达降低(P<0.05),SPI及NAC可阻断这一变化(P<0.05).结论 ALD通过ROS途径作用于盐皮质激素受体上调促凋亡因子bax表达,下调抑凋亡因子bcl-2表达,进而诱导足细胞凋亡. 方展 何方方 孙希锋 陈珊 朱忠华 邓安国 刘建社 张春关键词:足细胞 醛固酮 活性氧 细胞凋亡 足细胞损伤机制研究进展 被引量:4 2008年 王惠 何方方 张春关键词:足细胞损伤 肾小球脏层上皮细胞 毛细血管内皮细胞 肾小球基底膜 肾小球滤过膜 蛋白质丢失 CD2相关蛋白在肾脏固有细胞中的表达及分布 被引量:5 2007年 CD2相关蛋白(CD2AP)是与蛋白尿发生密切相关的足细胞分子。近年研究表明,CD2AP不仅是足细胞足突间裂孔隔膜的重要成分,而且还参与细胞骨架的重构,可能参与细胞许多重要的生理功能。本研究通过观察CD2AP在。肾脏固有细胞中的分布及其在足细胞分化中的分布变化,初步探讨其在足细胞中的生理功能。 姜华军 张春 朱忠华 刘建社 邓安国关键词:CD2AP 固有细胞 相关蛋白 足细胞分子 裂孔隔膜 细胞骨架 未分化和分化足细胞生物学性状及相关结构蛋白表达的变化 被引量:4 2008年 体外33℃许可条件下培养由H-2Kb-tsA58转基因小鼠所建立的未分化足细胞系,并在37℃非许可条件下诱导其分化。观察足细胞分化后形态学改变;MTT法测定细胞的生长曲线;红色荧光染料PKH-26标记足细胞,追踪其在子代细胞中的分布,检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期的改变;Western印迹检测足细胞相关蛋白CD2AP、α-actinin和足细胞分化相关蛋白nephrin的表达;免疫荧光结合激光共聚焦方法检测CD2AP、nephrin、α-actinin、F-肌动蛋白和微管蛋白的表达变化。结果显示:与未分化足细胞相比,分化足细胞形态发生改变,生长速度减慢,增殖能力下降;细胞周期表现为G0/G1期细胞比例的增多和S期及G2/M期的细胞比例下降;CD2AP、nephrin和α-actinin的表达明显增高;CD2AP、nephrin、α-actinin、F-肌动蛋白和微管蛋白在表达分布上均发生明显的改变。以上结果表明,足细胞分化后生物学性状明显发生改变,细胞骨架重新分布;CD2AP、nephrin、α-actinin、F-肌动蛋白和微管蛋白均在足细胞的分化过程中发挥重要作用。 姜华军 张春 常莹 朱忠华 刘建社 邓安国关键词:足细胞 分化 细胞骨架 CD2相关蛋白 CD2相关蛋白在足细胞分化中的作用 被引量:7 2008年 本文旨在研究肾脏足细胞的分化特点及CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)在足细胞分化过程中的作用。用RPMI1640培养基在33oC许可条件下培养永生化小鼠足细胞系(未分化组),转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)后置于37oC非许可条件下培养(转染组),并将非许可条件下未转染组作为对照组。用MTT法检测足细胞的生长速度;用RT-PCR方法检测CD2AP、WT1、synaptopodin和nephrin mRNA表达;用Westernblot检测CD2AP、WT1和nephrin蛋白表达;用免疫荧光结合激光共聚焦方法检测CD2AP、nephrin、F-actin和tubulin在分化及未分化足细胞中的分布及其共定位情况。结果显示,CD2AP、WT1和nephrin在分化及未分化足细胞中均可稳定表达,而synaptopodin仅表达于已分化足细胞,在未分化足细胞无表达。在足细胞分化过程中,CD2AP和nephrin的表达上调(P<0.05);CD2AP、tubulin和F-actin在细胞内的分布发生改变,CD2AP与nephrin及F-actin在未分化足细胞中存在共定位关系。转染特异性siRNA下调CD2AP表达,细胞生长速度明显减慢,synaptopodin mRNA表达下调(P<0.05),细胞分化迟滞。结果表明,足细胞分化过程中伴随细胞骨架的重新分布和细胞形态的改变;CD2AP可能作为足细胞裂孔隔膜分子与细胞骨架的连接蛋白,在足细胞分化过程中发挥重要作用。 姜华军 常莹 朱忠华 刘建社 邓安国 张春关键词:CD2相关蛋白 足细胞 NEPHRIN SYNAPTOPODIN WT1 TRPC6高表达对小鼠足细胞裂孔隔膜分子和细胞骨架的影响 被引量:4 2009年 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)是新近发现的联系足细胞裂孔隔膜与细胞骨架的重要分子,TRPC6功能异常在遗传性及获得性蛋白尿性肾小球疾病蛋白尿的发生、发展中起重要作用。本研究观察了TRPC6高表达对体外培养的小鼠足细胞nephrin、α-actinin-4、α-tubulin分布及表达的影响,以期进一步揭示TRPC6高表达的致病机制。 孙希锋 张春 方展 朱忠华 杨晓 姜华军 何方方关键词:细胞骨架 裂孔隔膜 足细胞 膜分子 小鼠 Α-TUBULIN CD2AP在足细胞中的生理功能研究 被引量:3 2008年 CD2相关蛋白(CD2 associated protein,CD2AP)是新近发现的足细胞裂孔隔膜(slit diaphragm,SD)分子。近年来的研究发现,CD2AP在足细胞内与多种结构蛋白相互作用,参与了足细胞多种重要的生理过程,并在蛋白尿的发生、发展中发挥着重要作用。文章综述了CD2AP的分子结构及其在肾脏足细胞中的表达分布,深入探讨CD2AP的生理功能及作用机制。 姜华军 张春 朱忠华关键词:CD2AP 足细胞 裂孔隔膜 Albumin Modulates the Production of Matrix Metalloproteinases-2 and -9 in Podocytes 2009年 To investigate the effects of albumin on the production of matrix metalloproteinases-2 (MMP-2) and matrix metalloproteinases-9 (MMP-9)in podocytes. Podocytes were treated with bovine serum albumin (BSA) at the concentration of 0.1, 0.5, 1, 2 g/L, respectively. Conditioned media were harvested 12, 24, 48 and 72 h after the treatment. The expression of MMP-2 and MMP-9 was assayed by gelatin zymography, RT-PCR and Western blotting analysis. Our results showed that in comparison with the control group, BSA increased the expression of MMP-2 and MMP-9 mRNA and protein in a doseand time-dependent manner (P〈0.05). Meanwhile, the enzymatic activities of MMP-2 and MMP-9 in the culture supernatants of podocytes were also increased (P〈0.05). It is concluded that albumin up-regulated the expression of MMP-2 and MMP-9 at gene and protein levels in a time-and dose-dependent manner. 方展 何方方 陈珊 孙希锋 朱忠华 张春关键词:PODOCYTES ALBUMIN