国家自然科学基金(30500230)
- 作品数：12 被引量：30H指数：3
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- CD14抑制肽的体外生物活性被引量：1
- 2007年
- 目的研究CD14抑制肽(CD14inhibitory peptide,CD14-IP)与CD14的结合活性及对内毒素(LPS)和脂多糖结合蛋白(LBP)诱导的人单核巨噬细胞株U937表达肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法采用酶联免疫吸附(ELISA)法进行CD14-IP与CD14的结合实验。U937细胞用佛波脂(PMA)诱导成熟后分为五组:正常对照组、LPS组(100ng/mLLPS+100ng/mLrhLBP)、高剂量多肽组、中剂量多肽组及低剂量多肽组,后三组分别给予10μg/mL、1.0μg/mL和0.1μg/mL的CD14-IP。用ELISA测定培养细胞上清TNF-α的含量,用RT-PCR测定U937细胞TNF-αmRNA的表达水平。结果CD14-IP有较强的与CD14结合的能力;CD14-IP组TNF-α和TNF-αmRNA水平均较LPS组低,较正常组高。结论CD14-IP能与CD14结合,并能降低培养细胞TNF-α和TNF-αmRNA的表达,具有抑制CD14生物活性的作用。
- 冯起甲徐智吴国明刘红艳徐顺贵钱桂生
- 关键词：CD14多肽脂多糖结合蛋白脂多糖TNF-Α
- 脂多糖结合蛋白的B细胞抗原表位预测及其效应初步分析被引量：6
- 2008年
- 目的预测人脂多糖结合蛋白(LBP)的B细胞抗原表位。方法采用生物信息软件和互联网服务器,预测LBP的二级结构和分析LBP表面特性(亲水性、可塑性、可及性和抗原性),再计算平均抗原指数(AI),预测LBP的B细胞抗原表位。结果LBP存在多个潜在的抗原表位,247～260序列(FKGEIFHRNHRSPV)的AI(0.0407)明显高于其他片段,370～379序列(LPSSSKEPVF)和303～325序列(ITDDMIPPDSNIRLTTKSFRPFV)的AI分别是0.0336和0.0295。247～260序列是LBP潜在的B细胞优势抗原表位。结论应用多参数预测到LBP的B细胞抗原表位。
- 冯起甲徐智吴国明胡川闽徐顺贵陈维中郭芮伶
- 关键词：表位B细胞生物信息学
- 急性呼吸窘迫综合征与多器官功能障碍综合征肺启动机制被引量：2
- 2008年
- 多器官功能障碍综合征（MODS）的肺启动机制是指原发肺损伤诱发或启动其它肺外器官的功能障碍或衰竭，该启动机制尚处于学说或假说阶段，尚未得到完全证实。急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是全身炎症反应在肺部的失控，是以进行性呼吸困难和顽固性低氧血症为临床表现、具有全身炎症反应综合征（SIRS）特征的呼吸系统危重症。该文从缺氧和SIRS这两个角度评价ARDS在MODS肺启动机制中的作用。
- 徐智吴国明钱桂生
- 关键词：急性呼吸窘迫综合征多器官功能障碍综合征全身炎症反应综合征
- CD14抑制肽对内毒素诱导U937细胞表达TNF-α的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察CD14抑制肽(CD14inhibitory peptide,CD14-IP)对内毒素诱导的U937细胞表达TNF-α的影响。方法U937细胞用佛波脂(PMA)诱导成熟后分5组:正常对照组、LPS组、高剂量抑制肽组、中剂量抑制肽组和低剂量抑制肽组。LPS组给予终浓度为100ng/mL的LPS和100ng/mL的LBP,高、中和低剂量抑制肽组除给予LPS和LBP外,分别给予终浓度为10μg/mL、1.0μg/mL和0.1μg/mL的CD14-IP。ELISA测定细胞培养上清TNF-α的浓度。进一步观察不同时间应用CD14-IP(1.0μg/mL)对LPS诱导U937细胞TNF-α和TNF-αmRNA表达的影响。用RT-PCR测定细胞TNF-αmRNA的表达。结果LPS组和抑制肽各组TNF-α浓度较正常组明显增高(P<0.05),高、中剂量抑制肽组TNF-α水平比LPS组明显降低(P<0.05),高、中剂量抑制肽组之间TNF-α浓度无明显差别(P>0.05),低剂量抑制肽组TNF-α浓度与LPS组无统计学差异(P>0.05)。不同时间应用CD14-IP时,CD14-IP早期应用对TNF-α和TNF-αmRNA的表达抑制作用显著。结论CD14-IP能显著减少LPS诱导的U937细胞TNF-α和TNF-αmRNA的表达,早期应用效果较好,可能对LPS所致急性肺损伤有保护作用。
- 冯起甲徐智吴国明刘红艳胡川闽徐顺贵钱桂生
- 关键词：CD14脂多糖结合蛋白TNF-Α
- 低氧诱导大鼠外周血单核细胞表达TNF-α与PKC膜易位及活性变化关系的研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究低氧诱导大鼠外周血单核细胞（peripheral blood monouclear cells，PBMCs）膜内PKC膜易位及活性变化对肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的作用，探讨缺氧与全身炎症反应综合征（system inflammation response syndrome，SIRS）的关系。方法采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞，于低氧条件下（3％O2，5％CO2，92％N2）培养0、1、3、6、9、12、24h后，收集细胞，分别采用免疫沉淀法、SDS-PAGE、PKC活性检测试剂盒及逆转录PCR（RTPCR）检测PKC膜易位、PKC活性及TNF-α表达量，采用SPSS10．0分析以上指标变化的相关性。结果低氧1～9h，大鼠外周血单核细胞膜PKCα含量及活性明显增高（P〈0．01）。低氧1～24h，大鼠外周血单核细胞膜PKCε含量及活性无明显变化。缺氧1～9h，大鼠外周血单核细胞TNF-α mRNA表达明显增高（P〈0．01）。低氧1～24h，PKCα膜蛋白含量及活性变化与TNF-α mRNA表达水平间呈显著正相关（P〈0．01～0．05）。结论低氧可诱导PKCα向膜易位并被激活，活化的PKCα可增强促炎症因子TNF-α的表达。这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory dysfunction，ARDS）时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关。
- 徐智吴国明钱桂生王兴胜陈维中薛桥王士雯
- 关键词：低氧PKC肿瘤坏死因子Α
- CD14的B细胞抗原表位预测
- 2007年
- 目的预测人CD14抗原的B细胞表位。方法采用生物信息软件和互联网服务器，预测CD14的二级结构，分析CD14表面特性（亲水性、可塑性、可及性和抗原性），再计算平均抗原指数（AI）预测CD14的B细胞抗原表位。结果CD14存在多个潜在的抗原表位，257-271序列（shnslratvnpsapr）的AI（0.04413）明显高于其它序列，305-321序列（sc-nrlnrapqpdelpev）、19-34序列（ttpepcelddedfrc）和115-134序列（ysrlkeltledlkitgtmpp）的AI分别是0.03682、0.03256和0.03025。结论257-271序列（shnslratvnpsapr）是CD14的B细胞优势抗原表位，可用于制备CD14的特异性抗体。
- 冯起甲徐智吴国明胡川闽徐顺贵李树钧钱桂生
- 关键词：CD14抗原表位B细胞生物信息学
- 体外与非体外循环手术T淋巴细胞白细胞介素-4 γ-干扰素mRNA表达的比较研究被引量：1
- 2006年
- 目的比较体外与非体外循环手术中T淋巴细胞IL-4、IFN-γmRNA的表达及意义。方法随机抽取年龄3～12岁先心病、先天性动脉导管未闭患儿各20例，分为体外与非体外循环手术组，体外循环（CPB）手术组于术前24h、CPB结束前、术后4h、术后24h抽取静脉血，非CPB手术组于术前24h、手术结束前、术后4h、术后24h抽取静脉血。分离T淋巴细胞，提取RNA，RT—PER测定IL-4、IFN-γmRNA表达。结果CPB手术组：T淋巴细胞m-4mRNA表达在CPB结束前明显升高，术后24h逐渐恢复至术前水平；IFN-γmRNA表达在CPB结束前明显下调，术后24h逐渐恢复至术前水平。非CPB手术组：IFN-γ、IL-4mRNA表达变化无统计学意义。结论与非CPB手术比较，CPB引起T淋巴细胞IL-4mRNA表达上调、IFN—YmRNA表达下调，说明CPB可导致Th1／Th2平衡变化，在CPB创伤、炎性反应中可能起重要作用。
- 倪海峰肖颖彬徐智
- 关键词：体外循环T淋巴细胞白细胞介素-4MRNA
- 三条脂多糖结合蛋白／CD14结合位点模拟肽体外抗内毒素活性的比较研究被引量：1
- 2008年
- 目的比较三条LBP/CD14结合位点模拟肽体外抑制内毒素性炎症反应的生物学活性。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测模拟肽与CD14的亲和力及与脂多糖结合蛋白(LBP)的竞争性抑制活性。将佛波脂(PMA)诱导成熟的U937细胞与内毒素共培养,并予以模拟肽干预,采用RT-PCR检测模拟肽对U937细胞TNF-α基因表达的影响。将大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)与荧光标记内毒素(FITC-LPS)共培养,并予以模拟肽干预,采用荧光显微镜观测模拟肽对内毒素(LPS)与AMs结合的影响。结果1号模拟肽(FHRWPTWPLPSP,10μg/mL)与CD14的亲和力显著高于2号和3号模拟肽(20.3±4.1比11.8±2.4和13.7±3.3,P<0.01或P<0.05),1号模拟肽(10μg/mL)对LBP的竞争性抑制活性也显著高于2号和3号模拟肽[(57.2±11.2)%比(39.4±9.7)%和(37.9±8.3)%,P均<0.01]。三条模拟肽(10μg/mL)均可从基因水平显著抑制LPS诱导U937细胞产生TNF-α(P<0.01或P<0.05),1号模拟肽的抑制作用显著强于2号和3号模拟肽(0.239±0.053比0.406±0.112和0.493±0.121,P<0.01)。1号模拟肽能显著抑制LPS与AMs结合(2 157±514比2 763±453,P<0.01)。结论1号模拟肽(FHRWPTWPLPSP)有较高的CD14亲和力及LBP竞争性抑制活性,具有潜在的抗内毒素性炎症反应的作用。
- 徐智李琦冯起甲钱桂生徐顺贵李昆霖王兴胜吴国明
- 关键词：脂多糖结合蛋白CD14模拟肽内毒素
- 脂多糖结合蛋白与CD14结合位点模拟肽的初步筛选被引量：8
- 2007年
- 目的应用噬菌体随机12肽库筛选脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)与CD14结合位点的多肽序列。方法以CD14为固相筛选分子,对噬菌体12肽库进行4轮亲合筛选,采用酶联免疫吸附(ELISA)法鉴定筛选后的噬菌体克隆与CD14的结合活性,取结合活性较高的克隆进行DNA测序,推导其多肽序列并与LBP序列比对,再进行竞争抑制实验检测筛选噬菌体与LBP竞争结合CD14的效力。结果挑取的20个噬菌体克隆中,16个结合实验鉴定阳性,取6个亲和力最高的克隆测序,得到3条不同编码的12肽序列(FHRWPTWPLPSP、MHRHPPPITLPL和AAF-HRAHHLTSP),3条多肽与LBP一级结构同源性低,为模拟肽。6个噬菌体克隆有较高的竞争抑制率。结论用噬菌体12肽库成功筛选出LBP与CD14结合位点的模拟肽。
- 冯起甲徐智吴国明徐顺贵李树钧陈维中郭芮伶
- 关键词：LBPCD14噬菌体肽库模拟肽
- 脂多糖结合蛋白／CD14结合位点的初步定位被引量：3
- 2009年
- 目的应用噬菌体随机12肽库、DNAStar分析软件、亲和实验及竞争抑制实验初步定位脂多糖结合蛋刍（lipopolysaccharide binding protein，LBP）与CD14的结合位点。方法以CD14为筛选分子，联合应用噬菌体肽库展示技术、噬菌体ELISA鉴定、LBP竞争抑制实验及DNA测序推导LBP／CD14结合位点的展示肽序列，采用DNAStar分析软件：E对所获展示肽序列与LBP一级结构，初步定位LBP／CD14结合位点并人工合成其模拟肽。采用ELISA检测该模拟肽与CD14的亲和力及与LBP的竞争抑制活性。结果DNAStar比对结果表明，经噬菌体肽库筛选获得的8条展示肽氨基酸序列与LBP第252～263位氨基酸有一定相似性。LBP第252～263位氨基酸具有结合位点的特性，即有良好的亲水性、可及性、可塑性及抗原性，该部位可能是LBP／CD14的结合位点。体外活性实验表明，模拟肽FHRNHRsPVTLL可与CD14有臭好的亲和力，有较强的与LBP竞争结合CD14的活性。结论LBP第252—263位氨基酸的模拟肽FHRNHRSPVTLL与CD14有良好的亲和力及有较强的与LBP竞争结合CD14的活性，具有LBP／CD14结合位点的生物学特性，LBP／CD14结合位点初步定位在该区域。
- 徐智李琦冯起甲钱桂生徐顺贵李昆霖王兴胜吴国明
- 关键词：脂多糖结合蛋白CD14噬菌体肽库模拟肽内毒素
