四川省应用基础研究计划项目(03JY029-103-2)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：张文彬黄建鸣陈廷清查晓张海红更多>>
- 相关机构：四川省肿瘤医院吉林大学更多>>
- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- GM-CSF-Survivin融合基因的构建及其在树突状细胞的表达
- 2009年
- 目的：构建以Survivin为肿瘤抗原,GM-CSF为基因佐剂的融合基因,并将该融合基因转入DC,研究DC疫苗抗肿瘤治疗的新方法。方法：参照GenBank收载的Survivin基因序列设计引物,提取HT-29肿瘤细胞中的mRNA,经RT-PCR反应获得野生型Survivin cDNA基因片段。人工合成GM-CSF、Survivin两端和中间连接接头引物。PCR反应获得GM-CSF、Survivin DNA片段。经BamHⅠ酶切,T4DNA连接酶连接获得GM-CSF-Survivin融合DNA。以此DNA为模板,用两端引物作PCR扩增以获得较纯的融合DNA片段。经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后与相同双酶切的pcDNA3.1（-）载体质粒混合,加入T4DNA连接酶,16℃连接20h。用连接物转化大肠杆菌DH5α,挑选克隆提取质粒。结果：经PCR和限制性内切酶酶切初步鉴定后,选取一株送样作DNA序列测定,结果与设计序列完全一致。质粒定名为pcGM-Sur,用jetPEITM-Macrophage转染体系,将构建的pcGM-Sur质粒转染DC。采用RT-PCR和Western blot检测到DC中的融合基因mRNA和表达的Survivin抗原。结论：质粒pcGM-Sur DNA序列与设计完全一致,转染DC后能转录出完整的融合基因mRNA并表达出具有Survivin抗原性的融合蛋白。
- 张文彬陈廷清黄建鸣查晓
- 关键词：GM-CSFSURVIVIN融合基因树突状细胞
- 转染融合基因的DC抗肿瘤免疫效应
- 2007年
- 目的研究转染融合基因(GM-CSF-survivin GM-ΔSur)的树突状细胞(DC)在体外诱导高效而特异的抗肿瘤免疫效应。方法用jetPEITM-Macrophage转染体系,将构建的GM-ΔSur融合基因转染入DC,用流式细胞仪检测DC的表面分子HLA-DR、CD83、CD80、CD86表达的高低;用LDH法测定转染融合基因的DC诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)杀伤肿瘤细胞(HT-29和OVCAR-3)的能力。结果转染融合基因的DC细胞中可检测到GM-ΔSur融合蛋白的表达;DC表面高表达HLA-DR、CD83、CD80、CD86;PHA/rhIL-2长期培养(21d)的T细胞CD8+比例明显增加;转染融合基因的DC对HT-29肿瘤细胞的杀伤率显著高于未修饰的DC的杀伤率。结论GM-ΔSur基因转染修饰的DC能选择性诱导MHC-I类分子限制的CTL的特异性,显著提高DC的抗原提呈功能和诱导高效而特异的抗肿瘤免疫效应。
- 张文彬张海红孔维查晓陈廷清邓碧芳任原黄建鸣
- 关键词：肿瘤树突状细胞融合基因CTLSURVIVIN
