内蒙古自治区自然科学基金(2009ZD05)
- 作品数：9 被引量：24H指数：3
- 相关作者：吴应积于泊洋罗奋华刘林洪张岩更多>>
- 相关机构：内蒙古大学内蒙古工业大学中国兵器工业集团第五二研究所更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金教育部“春晖计划”长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：生物学一般工业技术金属学及工艺更多>>
- 大鼠精原干细胞的高效分离和纯化方法被引量：6
- 2011年
- 精原干细胞是精子发生的基础，是永久分化成精子的克隆源，它既可以自我更新维持体内干细胞的数量，又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟精子。本文以22～25日龄Wistar．Iamichi大鼠为研究对象，利用两步酶消化法分离得到睾丸曲细精管细胞悬液，根据精原干细胞与曲细精管细胞悬液中体细胞（支持细胞及少量的管周细胞）及各级分化的生精细胞贴壁能力及对细胞外基质粘附力的不同，将大鼠精原干细胞进行纯化。经纯化后，5只大鼠的睾丸可以得到约3×10’个精原干细胞，该精原干细胞在体外培养可形成克隆，并且该克隆可表达精原干细胞特异的标记基因GFRal和CDHl。本文所介绍的高效分离和纯化大鼠精原干细胞的方法，操作简便，且得到的精原干细胞具有很高的活力和增殖能力，该方法为今后大鼠精原干细胞的长期培养及操作研究奠定了基础。
- 张岩罗奋华刘林洪萨初拉于泊洋吴应积
- 关键词：精原干细胞
- 海藻酸微囊替代DMSO和FBS的STO细胞冷冻保存研究被引量：3
- 2012年
- 目的:改进现有的细胞冷冻保存方法,建立一个不含二甲基亚砜(DMSO)和血清(FBS)的高效冷冻保存方法,为细胞治疗等临床实践提供优质细胞。方法:海藻酸微囊包埋鼠胚成纤维细胞(STO细胞)后用不含DMSO和FBS的冷冻保存液进行冷冻保存。设四个对照组:添加10%DMSO和20%FBS的组、仅添加10%DMSO的组、仅添加20%FBS、DMSO和FBS均不添加组。在冷冻前后对各实验组细胞用台盼兰染色,进行细胞计数,计算细胞存活率,同时利用溴乙锭的二聚物(EthD)、钙黄绿素-AM(Calcein-AM)进行染色观察细胞的形态,且进一步验证细胞存活率;解冻复苏后用MTT法评估细胞的增殖速度和生长活力。结果:冷冻保存30天后对各组的细胞数量、细胞存活率、细胞形态和解冻复苏后细胞的生长活力进行比较发现,海藻酸微囊包埋冷冻组的细胞数、细胞存活率、细胞形态和生长活力均与添加DMSO和FBS的组之间无显著性差异,而与其它三个对照组呈显著性差异。结论:使用海藻酸微囊替代DMSO和FBS保存STO细胞,能有效的维持细胞形态、数量、存活率,同时不影响细胞的生长活力,从而建立了一个不含DMSO和FBS的高效冷冻保存方法。
- 刘代艳于泊洋孔群芳包佳婧刘林洪萨初拉吴应积
- 关键词：胎牛血清冷冻保存
- 6天龄与10天龄大鼠的睾丸组织的基因差异表达被引量：1
- 2012年
- 通过基因芯片技术,利用Roche-NimbleGen公司制作的大鼠12×135K全基因组表达谱芯片,对日龄为6d和10d的大鼠睾丸组织进行全基因组表达差异分析。结果显示:具有2倍以上的差异表达基因有4298个,其中表达上调的基因共1878个,表达下调的基因共2420个。这些差异表达的基因中有3154个基因具有基因本体注释,参与了154个生物学通路。进一步分析表明具有8倍以上差异表达的基因有13个,这些基因参与了生物学过程、细胞组分和分子功能等基因本体分类,进一步选择3个差异表达的基因,LOC686076、Cxcl6和Trib3,做了实时定量RT-PCR检测。其结果趋势与芯片数据一致。因此,我们初步认为精原干细胞的发生与增殖在大鼠早期的发育过程中已经有大量的基因参与,是一个多基因协调表达的过程。
- 刘陶迪罗奋华于泊洋吴应积
- 关键词：睾丸组织精原干细胞基因芯片
- 绵羊cdh1基因cDNA全编码区的克隆及序列分析被引量：1
- 2011年
- 在哺乳动物成体睾丸中,精子发生的过程开始于未分化的A型精原细胞的干细胞群。目前已有报道在小鼠未分化的A型精原细胞中特异性表达钙依赖性跨膜黏着蛋白基因(cdh1),但绵羊的cdh1基因全序列未见报道。为了更好地研究绵羊精原干细胞的特性,根据已报道的其他物种的cdh1基因的cDNA保守区设计引物,从成年蒙古绵羊睾丸中提取总RNA,采用RT-PCR和分子克隆方法克隆了蒙古绵羊cdh1基因cDNA全编码区。DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为96.5%,说明该基因在进化上是高度保守的。这为制备绵羊CDH1的抗体奠定了基础,并且为绵羊精原干细胞的分子水平鉴定提供了研究条件。
- 胡甜园白音巴图罗奋华吴应积
- 关键词：绵羊CDH1基因
- 检测生精过程中减数分裂完成的质粒载体的构建被引量：1
- 2012年
- 旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRed载体。重组载体是以本实验室保存CMV-EGFP-pDsRed质粒载体为基础载体,在其多克隆位点插入Gsg2启动子,期待可以启动红色荧光蛋白基因的表达。经大鼠睾丸共培养细胞转染试验证实,成功构建了含有Gsg2启动子的表达双荧光蛋白质粒载体。
- 于泊洋罗奋华张岩吴应积
- 关键词：小鼠精子发生
- SiO_2原位制备Al_2O_(3P)/Al-Si复合材料被引量：5
- 2010年
- 采用液相接触法,以SiO2为原材料制备了Al2O3P/Al-Si复合材料,利用OM,SEM,XRD等分析了复合材料的组织、生成的相以及相的大小、形状与分布。结果表明,Al2O3颗粒主要分布在晶界处Al-Si共晶组织中,颗粒大小约为1μm。原位生成的Si与Al形成的共晶组织不再以针片状形式存在,而是呈粒状,尺寸为0.3～1.5μm。
- 张瑞英史志铭李红霞
- 关键词：AL基复合材料AL2O3颗粒
- 海藻酸微囊在细胞冷冻保存中的研究现状及应用
- 2012年
- 细胞的冷冻保存是细胞生物学实验中重要的实验技术。长期以来,人们使用冷冻保存液重悬细胞后进行冷冻储存,但是近年来,众多研究者发现传统冷冻方案往往会导致细胞活率大幅下降和细胞功能方面受损,从而很难满足生物医学、组织再生工程、细胞移植技术等高新技术的要求。所以研究者提出利用三维海藻酸微囊包埋细胞后再进行冷冻保存,从而在保证较高细胞活率的同时维持细胞的原有功能,有效的提高细胞的冷冻保存效率。本文概述了海藻酸微囊在细胞冷冻保存过程中的研究现状,同时对其应用进行了展望,以期为后续研究工作提供参考。
- 刘代艳萨初拉吴应积
- 关键词：冷冻保存生物医学
- 绒山羊Sertoli细胞的长期培养及分析
- Sertoli细胞从生精上皮基底膜延伸至管腔,是曲细精管中发现的极其重要的体细胞.近年来体内和体外研究显示,Sertoli细胞充当抚育细胞,在精子发生阶段为发育中的生精细胞提供营养.Sertoli细胞为精原干细胞(spe...
- 苏慧敏罗奋华包佳婧萨初拉张学明张岩多曙光吴应积
- 关键词：绒山羊睾丸SERTOLI细胞
- 碳对接触反应法制备TiC-Al_2O_(3P)/Al复合材料组织的影响被引量：5
- 2009年
- 以Al、TiO2、C为原材料,用接触反应法制备了TiC-Al2O3P/Al复合材料,采用XRD和SEM手段测定了材料的相组成、组织形貌及相分布,分析了碳含量对组织的影响。试验结果表明,该复合材料主要由分布于Al基体中的球状或近球状的TiC颗粒、不规则的Al2O3颗粒和少量的TiAl3组成,且随含碳量的增加,TiAl3减少;当C和TiO2比超过1.5后,TiAl3基本消失,但出现TiC2相。
- 张瑞英史志铭李红霞
- 关键词：铝基复合材料显微组织碳
- 大鼠睾丸曲细精管组织支持细胞/生殖细胞长期共培养与精子发生分析被引量：3
- 2012年
- 睾丸体外生殖模型的发展为体外研究睾丸的精子发生分子机制和睾丸毒理学提供了实验工具。很多报道的模型都无法真正地模拟体内复杂的生化分子及功能性相互作用从而导致研究价值有限。该实验拟建立一个体外长期维持睾丸生殖细胞存在,并能持续产生精子细胞的支持细胞/生殖细胞共培养体系。体系中的支持细胞和生殖细胞均由曲细精管组织块迁移到培养皿上,在不添加任何生长因子的情况下维持体外精子发生至圆形精子细胞超过2个月。RT-PCR分析显示,共培养细胞稳定表达cdh1、scp3、tnp2;免疫荧光染色结果显示,CDH1、PLZF、SCP3以及SOX9阳性细胞存在。这些结果例证了体系中同时存在精原干细胞、精母细胞、精子细胞和支持细胞。简单高效的支持细胞/生殖细胞体外共培养体系可用于雄性生殖的分子机制和毒理学研究。
- 刘林洪史小芳罗奋华于泊洋张岩刘燕吴应积
- 关键词：睾丸生殖细胞
