山东省自然科学基金(ZR2010CQ012)
- 作品数：28 被引量：123H指数：7
- 相关作者：沈志强王金良谢金文唐娜魏凤更多>>
- 相关机构：山东省滨州畜牧兽医研究院河北北方学院吉林大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省自主创新成果转化重大专项项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 荧光定量PCR检测方法在猪瘟诊断上的应用研究进展被引量：4
- 2012年
- 实时荧光定量PCR技术是结合PCR技术、光谱技术和计算机技术发展起来的一种新型分子生物学定量检测技术,其融合了PCR技术的高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确定量的特点,不仅实现了对核酸模板的定量,而且具有特异性强、灵敏度高、重复性好、准确性强、自动化程度高、速度快、全封闭反应、无污染等优点,在猪瘟疫苗的定量检测、猪瘟病毒的诊断以及猪瘟强、弱毒鉴别诊断中得到广泛应用,显示出良好的应用前景。本文就荧光定量PCR技术及其在猪瘟诊断上的应用概况作一综述,以期为我国猪瘟的综合防控提供参考。
- 李娇王金良沈志强
- 关键词：猪瘟实时荧光定量PCR
- N-糖基化猪瘟病毒E2蛋白不同接种剂量对BALB/c小鼠的免疫效果分析被引量：2
- 2014年
- E2蛋白(E2 protein,E2-Pro)为猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的主要结构蛋白之一,是CSFV最主要的保护性抗原,因此应用体外糖基化技术获得的N-糖基化E2蛋白(glycosylated E2 protein,Gly-E2-Pro)理论上可进一步增强机体的免疫应答。为了验证这一设想以及获得最佳的免疫效果,本研究分别将Gly-E2-Pro按20,50,100μg/只,接种BALB/c小鼠,同时设E2-Pro与CSFV对照,于不同时间采血制备血清,通过血清中IgG、IL-4及INF-γ水平的测定,评价Gly-E2-Pro的免疫效果及确定最佳免疫剂量。结果显示,免疫Ⅰ组(20μg/只)Gly-E2-Pro虽刺激机体产生了IgG免疫应答,但水平较低,与E2-Pro、CSFV组差异不显著;免疫Ⅲ组(100μg/只)Gly-E2-Pro免疫后,前期出现免疫抑制,至28d抗体水平急剧上升,达到极高值;免疫Ⅱ组(50μg/只)Gly-E2-Pro免疫后,血清IgG水平显著高于E2-Pro与CSFV组,同时显著高于免疫Ⅰ组与Ⅲ组。以上结果说明,Gly-E2-Pro可有效增强机体的体液免疫应答,50μg/只为最佳接种剂量。
- 孙全文王爱华董炳梅杨翠军王金良
- 关键词：BALB/C小鼠N-糖基化猪瘟病毒E2蛋白接种剂量
- 非洲猪瘟病毒VP73结构蛋白表达及鉴定
- 2013年
- 为获得可作为血清学诊断抗原的体外诱导表达ASFV VP73结构蛋白,根据Gen-Bank登录的ASFV基因序列,人工合成VP73主要抗原表位区基因克隆至pUC57载体中,设计1对引物,PCR扩增获得429nt的VP73基因片段;将VP73基因片段使用EcoRI和SalI酶切后亚克隆至表达载体pGEX-KG,经PCR、酶切、测序鉴定挑选阳性克隆,转化进表达菌株BL21(DM3)中进行体外诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达及其活性。结果显示,成功构建表达重组载体pGEX-KG-VP73,且诱导有效表达了41Ku重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白的35%;Western blot分析表达该蛋白具有良好的表达活性。试验为建立无感染性、快速、敏感的血清学诊断方法奠定了一定基础。
- 董林王艳萍张春玲沈志强
- 关键词：非洲猪瘟病毒
- 猪圆环病毒2型胶体金抗体检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 为建立检测猪圆环病毒2型(PCV2)胶体金检测方法,本研究对SPA蛋白进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上制备金标垫,分别以重组PCV2 ORF2蛋白和猪IgG作为检测线和质控线,制作PCV2抗体检测胶体金免疫层析试纸条。检测结果表明,试纸条操作简单,肉眼于10 min内可以判定结果,对PCV2免疫血清具有高度特异性,与猪其它病毒免疫血清无交叉反应,检测灵敏度与ELISA相近。试纸条在室温保存6个月,其特异性及灵敏度无明显变化。对临床采集的324份血清样品进行检测,结果与ELISA试剂盒总符合率为98.77%。表明本研究建立的PCV2抗体免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合于PCV2抗体的现场检测。
- 张文通魏凤王金良肖跃强沈志强
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 猪瘟病毒重组E2蛋白PPA-ELISA检测试剂盒的研制及应用
- 为建立一种快速的猪瘟病毒抗体检测方法,本研究以纯化的猪瘟病毒重组E2蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗,组装了检测猪瘟病毒抗体的PPA-ELISA诊断试剂盒。本E2-PPA-ELISA抗体检测试剂盒...
- 李娇王金良祖立闯谢金文沈志强
- 关键词：猪瘟病毒PPA-ELISA
- 杂交猪IFN-γ和IL-18双基因在Rosetta TM大肠杆菌的表达被引量：1
- 2013年
- 依据已测的杂交猪IFN-γ、IL-18基因的核苷酸序列,设计4条引物,通过重叠PCR的方法将2个基因进行连接,并在两个基因连接处引入45bp的连接肽的核苷酸序列;融合基因通过pEGX-4T-1载体及RosettaTM表达菌实现了原核表达,蛋白可被GST标签多抗识别。本研究的进行,为IFN-γ/IL-18融合蛋白的功能研究奠定了基础。
- 王金良孙翠平谢金文祖立闯魏凤董炳梅沈志强
- 关键词：IFN-Γ基因IL-18基因杂交猪
- 猪瘟病毒E2基因原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立被引量：9
- 2011年
- 猪瘟（CSF）是猪的一种高度接触性的致死传染病。其病原体猪瘟病毒（CSFV）是黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）中的成员,为有囊膜的单股正链RNA病毒。E2蛋白是猪瘟病毒的跨膜结构蛋白,是诱导被感染动物机体产生免疫保护与CSFV中和抗体的主要病毒结构蛋白，
- 谢金文李娇董林祖立闯王金良高三阳沈志强
- 关键词：猪瘟病毒原核表达E2基因病毒结构蛋白正链RNA病毒黄病毒科
- 猪瘟强毒与疫苗毒鉴别检测方法的研究进展被引量：3
- 2012年
- 猪瘟弱毒疫苗在我国的大规模免疫应用,对预防和控制猪瘟起到了重要作用,但同时使CSFV野毒感染猪和疫苗接种猪的鉴别诊断变得非常困难和必要。本文就猪瘟强毒与疫苗毒的鉴别诊断方法作一综述,以期为猪瘟的诊断与防控提供合理的科学依据。
- 祖立闯谢金文唐娜苗立中李峰王金良沈志强
- 关键词：猪瘟强毒
- 猪瘟病毒E2基因主要抗原区的克隆及其原核表达被引量：1
- 2012年
- 为研究猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位在机体免疫应答中的作用和特点,试验参照猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的基因组序列,设计、合成了1对引物,应用RT-PCR方法扩增出长为786 bp的基因片段,命名为zE2,将zE2基因克隆到原核表达质粒pET 32a中,经酶切鉴定后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),于37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导表达,大肠杆菌菌体裂解产物再经SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明:该基因片段得到较高表达,融合蛋白的分子质量约为48 ku,主要以包涵体形式存在,且具有一定的免疫学活性。
- 谢金文王金良董林苗立中管宇高三阳沈志强
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白克隆原核表达
- 猪瘟病毒常用实验室诊断方法概述被引量：3
- 2013年
- 近年来,我国猪瘟的流行和发病特点发生了新的变化,转变为隐性感染和亚临床感染,出现了所谓"非典型猪瘟"、"温和型猪瘟"和"带毒母猪综合征",给兽医临床诊断增加了难度。随着分子生物学与现代免疫学技术的发展进步,猪瘟的分子生物学和血清学诊断方法不断完善。本文就近年来猪瘟的病毒分离鉴定、RT-PCR、环介导等温扩增、实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验、胶体金免疫技术等实验室诊断方法的最新研究进展以及各种检测方法的优缺点进行全面论述,旨在为实验室及养殖户寻找和建立适合自己的快速、准确的检测方法提供参考。
- 李娇谢金文唐娜王金良苗立中沈志强
- 关键词：猪瘟病毒
