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人脐带间充质干细胞与食管癌细胞融合后的转录组比较被引量：3: 2014年; 目的探讨人脐带间充质干细胞（hMSCs）和食管癌细胞融合前后基因表达的差异和信号通路的改变.方法分选和鉴定融合细胞（EMFs）后,通过基因芯片比较食管癌细胞、hMSCs和EMFs的表达谱.PCA聚类分析转录组的整体关系,LIMMA分析获得差异表达基因,PCC确定差异表达基因的表达模式,再通过DAVID、ToppGene和MSigDB数据库分析各个模式的基因功能、信号通路富集、染色体定位和富集,以KEGGanim和Idiographica分别绘制核心差异表达基因的信号通路关联图和染色体分布图.结果 EMFs细胞中DNA损伤修复、细胞周期阻滞和凋亡通路的核心基因高表达,为EC9706或hMSCs细胞的4倍（Pi ＜0.05）,而抑制因子DUSP6的高表达可能负反馈地抑制促分裂素原活化蛋白激酶通路.hMSCs细胞中细胞因子和趋化因子高表达,为EC9706或EMFs细胞的2倍（Pi＜ 0.05）,而EMFs细胞中33个免疫功能相关基因高表达,为EC9706细胞的2倍（Pi＜0.05）.M期阻滞和氨基酸代谢相关的位于食管癌染色体扩增区的39个差异表达基因中,其中30个表达下降,为EC9706细胞的0.5倍（Pi＜0.05）.结论 hMSCs和EC9706细胞融合后可能通过诱导促凋亡信号和DUSP6负反馈抑制机制来发挥抑制食管癌细胞的作用,免疫调节和分化相关基因的改变提示融合细胞继承了干细胞的部分免疫功能.; 王勇周兵樊宏斌遇珑郭黎平陆士新; 关键词：间质干细胞脐带食管肿瘤细胞融合转录因子

新一代测序技术对白血病基因组研究的推动及面临的挑战: 2012年; 自人类第1例白血病患者白血病细胞全基因组测序完成两年以来，研究者相继发现了大量与白血病及肿瘤相关的变异基因。这不但可促进白血病及其他各类恶性肿瘤发病机制的研究，也将极大推动白血病及其他恶性肿瘤诊断及个性化治疗的发展。我们就新一代测序技术对白血病发病机制研究的推动及其面临的挑战作一综述。; 周全全程涛; 关键词：白血病细胞全基因组测序测序技术个性化治疗变异基因

V-ATPases的功能及其抑制剂研究进展被引量：6: 2009年; V-ATPases作为一类酶,在真核细胞中广泛存在。V-ATPases是一个由多个亚基组成的复合物,主要有两个结构域,分别是位于外周的V1结构域和跨膜的V0结构域。V1结构域可以通过水解ATP供能;而V0结构域是质子的通道。它们发挥作用主要是通过水解ATP供能,泵运H+进入囊泡腔中或泵H+出细胞外。V-ATPases定位于细胞器膜及某些特殊细胞的细胞质膜,参与骨吸收、肿瘤的侵袭及耐药等生理及病理过程,因而V-ATPases是治疗骨质疏松、糖尿病及肿瘤等人类疾病的候选分子靶标。目前有许多研究致力于发现新的潜在的特异的V-ATPase抑制剂。; 游海燕邓云覃文新; 关键词：耐药肿瘤骨质疏松抑制剂

肿瘤酸性微环境活化肝星状细胞促进肝癌转移的分子机制: 实体瘤通常具有酸化的特征，浸润于肿瘤组织中的肿瘤相关间质细胞，同肿瘤细胞一样暴露于肿瘤酸性微环境中，但该酸性生存条件对肿瘤相关间质细胞有何影响未见报道。本课题对普遍存在于肝细胞癌（Hepatocellular carci...; 宋瑾; 关键词：肝癌肝星状细胞活化质子泵抑制剂骨桥蛋白肿瘤转移; 文献传递

DKK-1、DKK-2和GPC3蛋白在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义被引量：7: 2010年; 目的:探讨DKK-1、DKK-2和人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican3,GPC3)蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。方法:采用组织芯片联合免疫组织化学法检测DKK-1、DKK-2和GPC3蛋白在10例正常肝、12例肝硬化、57例肝细胞癌及癌旁肝组织中的表达差异,并分析其临床意义。结果:免疫组织化学检测结果发现,DKK-1和DKK-2在肝细胞癌组织中阳性染色率分别为59.65%(34/57)和57.89%(33/57);GPC3只在肝细胞癌组织中表达,其阳性染色率为47.37%(27/57),而在正常肝、肝硬化及癌旁肝组织中均呈阴性表达。DKK-1与DKK-2阳性表达之间存在密切相关性(χ2=0.570,P=0.000),DKK-2与GPC3阳性染色之间也存在相关性(χ2=0.272,P=0.041)。统计分析DKK-1、DKK-2及GPC3在肝细胞癌组织中阳性染色与肝癌患者性别、年龄、血清甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)水平、乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、肿瘤大小、病理学分级、静脉浸润以及是否伴随肝硬化等的相关性,结果表明血清AFP水平与GPC3表达呈正相关(P=0.007),HBsAg与DKK-1表达呈正相关(P=0.037),DKK-1阳性染色与肝细胞癌组织分级存在相关性(P=0.014),与其他参数则无相关性。结论:GPC3在肝细胞癌组织的阳性染色率为47.37%,GPC3染色阴性的肝细胞癌组织中DKK-1和DKK-2双阳性染色率为40.00%,而GPC3(+)联合DKK-1(+)/DKK-2(+)/GPC3(-)可将肝细胞癌的免疫组织化学检出率提高至68.42%(39/57),降低肝癌免疫组织化学检测中的假阴性率。; 赵衡葛超李红李锦军; 关键词：免疫组织化学硫酸乙酰肝素蛋白聚糖蛋白质阵列分析

Dickkopf1在肝癌组织中的表达被引量：2: 2009年; 目的检测Dickkopf1(DKK1)在肝癌组织中的表达。方法采用四种不同方法检测DKK1在肝癌组织和癌旁肝组织的表达。结果半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测显示,DKK1在4/5肝癌中高表达;适时-PCR(Real-time PCR)方法检测显示,DKK1在8/14肝癌中高表达;Western blot方法检测显示,DKK1在2/4肝癌中高表达;免疫组化方法检测显示,DKK1在46/79肝癌中高表达,但与AFP表达水平、分化程度、TNM分期等临床病理特征无关。四种方法检测结果均显示DKK1在肝癌组织的表达显著高于癌旁肝组织。结论DKK1在肝癌组织表达高于癌旁肝组织,可能与肝癌发生、发展相关。; 黄于彬覃文新; 关键词：肝细胞癌基因表达

人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定被引量：1: 2011年; 目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体。方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKK1蛋白表达量。利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性。以纯化的DKK1蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性。结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达最高(20mg/L)。所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达。抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKK1蛋白。结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础。; 沈秋瑾孔娟邓云蒋华胡素文孔洁倪涛游海燕李宗海屠红张志刚覃文新; 关键词：细胞培养技术哺乳动物细胞

靶向ATP6L的RNA干扰抑制乳腺癌细胞的体外侵袭能力: 2010年; 目的:通过靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能,检测MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭情况。方法:采用有效ATP6L干扰片段及干扰对照分别转染MCF-7/ADR细胞,通过荧光分光光度计检测BCECF与细胞分泌上清孵育后在不同激发光激发后发射的荧光量;用实时荧光定量PCR检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达情况;用明胶酶谱方法检测细胞分泌上清中的MMP-2活性;用细胞侵袭实验(Transwell)检测细胞体外侵袭能力。结果:在MCF-7/ADR细胞中,下调ATP6L基因的表达可以使细胞的泌H+能力减弱;细胞中MMP-2表达水平无变化;细胞分泌上清中的MMP-2活性减弱;细胞的体外侵袭能力下降。结论:靶向ATP6L的RNA干扰可抑制质子泵的功能,从而抑制MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭能力。; 游海燕金洁唐宁邓云舒惠群沈秋瑾覃文新; 关键词：RNA干扰肿瘤

靶向LASS2基因的小干扰RNA对人肝癌细胞侵袭能力的影响被引量：18: 2009年; 目的:研究靶向人源性长寿保障基因2(homosapiens longevity assurance homologue2,LASS2)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌细胞MHCC97-L体外侵袭能力的影响。方法:通过脂质体转染将靶向LASS2的siRNA转染MHCC97-L细胞,运用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)检测转染后LASS2mRNA的表达,筛选有效的siRNA片段;运用BCECF氢离子敏感荧光探针检测MHCC97-L细胞跨膜运输氢离子的功能;采用Western印迹法分析MHCC97-L细胞及上清液中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)的表达情况;应用明胶酶谱法检测MHCC97-L细胞上清液中MMP-2的活性;Transwell法检测细胞体外侵袭能力。结果:筛选得到靶向LASS2的有效siRNA-1片段。MHCC97-L细胞转染LASS2siRNA-1后,其跨膜运输氢离子的能力增强,与空白对照组比差异有统计学意义(P<0.05);MMP-2蛋白的表达及分泌无明显变化,但分泌的MMP-2活性形式增加,与空白对照组和无关序列组比明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);且细胞的体外侵袭能力明显高于无关序列组和空白对照组(P<0.05)。结论:靶向LASS2的siRNA能有效下调其表达,并能提高MHCC97-L细胞在转染LASS2siRNA后的体外侵袭能力。; 唐宁游海燕金洁于彬覃文新; 关键词：肝肿瘤肿瘤浸润

诱导性多潜能干细胞的研究进展与应用被引量：3: 2011年; 分化成熟的体细胞可在体外被重编程为诱导性多潜能干细胞,后者具有与胚胎干细胞相似的自我更新能力和发育多潜能性,同时避免了免疫排斥和伦理问题。患者特异性的诱导性多潜能干细胞将成为再生医学、药物筛选和毒理测试的理想工具。; 蒋兴然陆士新; 关键词：诱导性多潜能干细胞体细胞重编程分化

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国家重点基础研究发展计划(2009CB521803)

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