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蛋白质多肽文库构建中限制性显示技术的接头设计: 2005年; 为了探讨限制性显示(RD)技术在构建蛋白质多肽文库中灵活的接头设计,分别根据原核表达载体pET22b以及酵母表达载体pNMT-TOPO设计了三套接头,三套接头依次增加一个碱基以保证与之连接的片段总有可能表达正确的开放阅读框.然后以HIV-1B亚型代表株U26942全基因质粒DNA为对象,利用RD技术分别建立了相应的蛋白质多肽文库.从每个库中各随机挑选12个克隆进行测序分析并进行蛋白质表达预测.结果从原核表达文库中获得了一个可以表达HIVPol多肽的克隆,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示该克隆在细菌BL21(DE3)中有较高的表达,蛋白质印迹为阳性,与理论预测相符.这些结果提示,RD技术是一种建立基因组随机多肽文库的新方法,该方法灵活的接头设计可以满足不同的表达载体需求.; 马文丽刘佳李凌张宝师永霞郑文岭

慢性髓细胞性白血病患者与健康人骨髓单个核细胞基因表达的差异(英文): 2006年; 背景:慢性髓细胞性白血病是以造血干细胞的恶性克隆性增殖为特征。慢性期的慢性髓细胞性白血病患者如果不予以有效的治疗,必然演进为急变期,其预后往往非常差。因而,从全基因组水平上阐明慢性髓细胞性白血病的发生机制显得尤为重要,目的:应用AppliedBiosystems表达芯片系统对慢性髓细胞性白血病患者骨髓单个核细胞的基因表达谱进行观察。设计:观察对比分析。单位:南方医科大学基因工程研究所。对象:两例骨髓样品(1例慢性髓细胞性白血病患者,1例健康者)来自于广州军区广州总医院血液科。方法:实验于2004-10/2005-09在南方医科大学基因工程研究所完成。分别从一例慢性髓细胞性白血病患者与一例健康人的骨髓样品中分离单个核细胞,提取总RNA,纯化mRNA。通过逆转录体外线性扩增的方法对mRNA样品进行标记,将标记好的cRNA样品与芯片杂交。利用ABI1700化学发光芯片分析仪对骨髓单个核细胞的基因表达谱差异情况进行分析。通过比较同一样品不同芯片间的数据信息,对芯片结果的可重复性进行评估。主要观察指标:①总RNA及标记后的cRNA质量的评定。②芯片可重复性验证。③芯片杂交结果。④半定量反转录-聚合酶链反应结果。结果:①利用统计学数据分析工具,通过比较慢性髓细胞性白血病患者与健康人单个核细胞的基因表达差异,总共发现了6706个差异基因。其中,与慢性髓细胞性白血病密切相关的差异基因为68个,上调的有17个,下调的有51个。②位于C/EBPalpha信号通路和CD40受体信号通路中的大部分差异表达基因,其表达水平降低。③通过对重复实验结果的相关性及检测一致性分析,证实了芯片结果的可重复性较好。而两组重复实验间的相关系数分别是,慢性髓细胞性白血病组为0.991,健康组为0.988。④半定量反转录-聚合酶链反应验证了芯片分析结果�; 周珏宇马文丽丁大鹏石嵘郑文岭; 关键词：基因表达谱遗传学技术

60mer长寡核苷酸微阵列构建的优化被引量：3: 2005年; 目的　优化长寡核苷酸芯片方阵的构建。方法　采用4种不同玻片表面,4种点样液溶解经设计高度特异性探针,制备长寡核苷酸芯片。样品经RD -梯度PCR扩增标记后与芯片杂交,扫描芯片后进行统计学分析。结果　点样液3×SSC与丙烯酰胺聚合物表面(国产玻片)联合使用杂交效果最佳。结论　该研究优化了长寡核苷酸芯片微阵列的构建,为芯片的下游技术发展提供支持。; 温颖马文丽吴清华李凌郑文岭; 关键词：信噪比

风疹病毒野生株感染ECV304血管内皮样细胞的细胞病变效应被引量：1: 2006年; 目的通过体外培养和风疹病毒野生株感染ECV304血管内皮样细胞,初步探讨中国大陆流行的风疹病毒野生株的致病变性特征.方法常规方法培养ECV304血管内皮样细胞和病毒接种,RT-PCR和间接免疫荧光法检测风疹病毒包膜糖蛋白E1基因的表达,相差显微镜及电子显微镜下观察细胞受病毒感染后形态变化,脱氧核糖核酸末端转移酶法（TUNEL）检测细胞凋亡.结果感染后2～3 d即可检测到风疹病毒包膜糖蛋白E1基因表达;感染后4 d,相差显微镜观察呈现明显的细胞病变效应,即细胞悬浮脱壁、细胞体变圆缩小、细胞膜皱缩、染色质浓缩等;电镜下观察可见明显病毒颗粒,核染色质浓集、边缘化,线粒体聚集于细胞核周围呈溶酶体化、空泡化和自噬现象.TUNEL法检测细胞凋亡指数（AI）在病毒感染组与对照组间有显著性差异（P＜0.01）.结论风疹病毒野生株在ECV304细胞中有明显的致细胞病变效应,在体外细胞培养下可诱导ECV304血管内皮样细胞凋亡.; 莫小阳马文丽张亚莉赵海全柯昌文郑焕英邹丽容郑文岭; 关键词：风疹病毒聚合酶链反应间接免疫荧光法

HSV-2的生物信息学分析及其Oligo探针设计被引量：2: 2005年; 目的设计单纯疱疹病毒2型(HSV-2)诊断芯片的O ligo探针。方法利用BLA ST软件对HSV-2的DNA序列进行序列比对,得到有意义的特异序列;用生物学软件O ligo6.0设计特异性高、Tm值相近、长度均一的O ligo探针。结果获得13条60-m er O ligo探针。结论利用BLA ST系统和生物学软件O ligo6.0设计HSV-2诊断芯片的探针,可为后期打印成DNA芯片,用于HSV-2的检测打下基础。; 赵海全马文丽莫小阳张亚莉郑文岭; 关键词：单纯疱疹病毒2型生物芯片

人巨细胞病毒诱导ECV304血管内皮样细胞凋亡被引量：2: 2006年; 目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染ECV304血管内皮样细胞的致病机制。方法常规方法传代细胞和接种病毒。以PCR法和间接免疫荧光法检测病毒即刻早期基因(IE gene)及其蛋白表达;相差显微镜及电子显微镜观察病毒感染后细胞和细胞器形态变化;DNA梯度法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果病毒感染后72 h开始出现胞体变圆、缩小、脱壁,胞质内颗粒增多,细胞边缘模糊不清的特征,可明显检测出病毒特异IE gene及其蛋白表达;电镜结果显示病毒感染96 h后,胞质内明显空泡化,细胞膜微绒毛减少,核染色质浓集、边缘化,线粒体出现溶酶体化、空泡化和自噬现象,呈早期凋亡特征;DNA梯度电泳结果显示感染细胞DNA片段化特征的条带;流式细胞仪检测发现感染4 d和6 d时,细胞调亡率分别为4.1%和45.7%。结论巨细胞病毒在体外细胞培养中可诱导ECV304血管内皮样细胞的凋亡。; 张亚莉马文丽莫小阳赵海全柯昌文郑焕英郑文岭; 关键词：人巨细胞病毒 ECV304细胞

HCMV 60-mer寡核苷酸诊断芯片的探针与微阵列设计被引量：1: 2006年; 目的设计用于人巨细胞病毒(HCM V)诊断的60-m er长链寡核苷酸探针及微阵列。方法利用生物学软件A rray D es igner2.0,针对HCM V特异且保守的序列设计60-m er探针,利用BLA ST功能将设计探针在G enB ank数据库进行序列比对分析,筛选得到HCM V特异性O ligo探针,根据各探针的属性特点设计芯片阵列。结果设计得到24条解链温度(Tm值)相近、长度均一的60-m er O ligo探针及其芯片阵列,拟打印成DNA芯片用于HCM V检测。结论利用病原体的生物信息学资料及A rray D es igner2.0生物软件,能有效的进行病毒检测芯片的设计。; 张亚莉马文丽赵海全莫小阳郑文岭; 关键词：人巨细胞病毒寡核苷酸序列分析基因芯片

细小病毒B19诊断芯片探针的制备被引量：2: 2003年; 目的　制备细小病毒B19诊断芯片探针。方法　利用PrimerPremier 5 0软件针对细小病毒B19基因保守区域设计PCR引物 ,纯化扩增产物 ,克隆鉴定。结果　序列分析表明 ,扩增片段均为细小病毒B19特异基因。结论　利用PCR扩增产物可制备细小病毒B19诊断芯片探针。; 吕梁马文丽孙朝晖马晓冬郑文岭; 关键词：细小病毒B19 聚合酶链反应

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广州市重大科技攻关项目(2001-Z-005-01)

文献类型

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机构

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