国家质检总局科技计划项目(2006IK015)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：厦门出入境检验检疫局云南出入境检验检疫局厦门大学更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的表达
- 2012年
- 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒是"须向OIE申报的甲壳动物重要疾病"之一。将该病毒主要结构蛋白基因克隆至毕赤酵母穿梭表达质粒pPIC9K,构建重组表达载体(命名为pPIC9K-IV),限制性内切酶BglⅡ对其进行酶切线性化,采用电穿孔法转化到毕赤酵母GS115宿主菌。采用PCR方法分析和G418筛选来鉴定重组的毕赤酵母,诱导表达的产物分别进行ELISA分析或Western blot免疫印迹鉴定,分泌表达产物分子量大小为40ku左右,原核表达时制备的兔抗对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白的血清可与真核表达的目的蛋白发生特异性反应。
- 彭小莉谢明星刘棠陈双雅王群力陈伟玲王景明张其清
- 关键词：衣壳蛋白毕赤酵母真核表达
- 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白基因的克隆表达及抗体制备被引量：2
- 2008年
- 本文根据GenBank登录的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的全基因组序列(NC-002190),设计出主要结构蛋白基因的相应引物,从厦门发病的对虾中,提取DNA,以此为模板,利用PCR扩增目的基因.再将目的基因分别与pGEX-6p1载体和pET-28a载体连接,构建重组表达载体pGEX-IV、pET-IV,重组子经酶切和测序鉴定后导入表达型大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,大小约为62KDa和41KDa,与预测大小一致.将pET-IV表达重组蛋白经纯化,免疫小鼠,W estern免疫印迹反应结果表明其抗体均可与pGEX-IV和pET-IV表达的蛋白发生特异性反应.本研究的结果为对虾IHHNV的快速检测及其免疫提供了研究基础.
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- 关键词：衣壳蛋白基因克隆及表达蛋白质纯化对虾
