国家现代甘薯产业化技术体系建设项目(CARS-11-B-07)
- 作品数：17 被引量：127H指数：8
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- 相关机构：河南省农业科学院中华人民共和国农业部河南农业大学更多>>
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- 甘薯褪绿矮化病毒西非株系实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：13
- 2014年
- 依据Gen Bank中登录的甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)西非株系(WA)的核苷酸序列,分别设计两对特异性引物和一条Taq Man探针。以SPCSV-WA外壳蛋白(cp)基因的重组质粒为阳性标准质粒绘制标准曲线,通过优化反应体系和反应条件,建立了SPCSV-WA的实时荧光定量PCR检测方法。试验结果表明,该方法只能检测到目的病毒,标准曲线的斜率和相关系数分别为-3.239和1,扩增效率为103.568%。最低可检测到约3.31 copies/μL的阳性质粒,灵敏度比常规PCR高1 000倍。本研究建立的SPCSV实时荧光定量PCR方法可用于田间样品的检测,为SPCSV的早期预警和流行学研究提供了技术手段。
- 王丽王振东乔奇秦艳红张德胜田雨婷王爽张立军张振臣
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 甘薯乔治亚曲叶病毒中国分离物外壳蛋白基因的分子变异及在大肠杆菌中的表达
- 2017年
- 甘薯乔治亚曲叶病毒(Sweet potato leaf curl Georgia virus,SPLCGV)是侵染甘薯的重要病毒.本研究利用PCR方法克隆了11个SPLCGV中国分离物的外壳蛋白(CP)基因并进行了序列测定.序列分析结果表明,SPLCGV中国分离物cp基因全长均为765bp,编码254个氨基酸残基.SPLCGV中国分离物cp基因的核苷酸序列相似性为91.4%~100%,推测的氨基酸序列相似性为95.7%~100%,存在较大的分子变异.将SPLCGV四川分离物(Sichuan7:2012)cp基因的部分片段克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达.SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,产生了预期大小的蛋白条带,说明cp基因在大肠杆菌中得到了高效表达.
- 赵晓立乔奇王永江侯爱芹许君郑文明张振臣
- 关键词：外壳蛋白分子变异
- 甘薯潜隐病毒单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：2
- 2017年
- 以原核表达的甘薯潜隐病毒(SPLV)的外壳蛋白(CP)为抗原免疫小鼠,经过细胞融合和亚克隆,筛选出2株稳定分泌抗SPLV CP的单克隆抗体杂交瘤细胞株(5B11-2和5G8-2),并分别制备了单克隆抗体腹水。间接ELISA结果表明,用SPLV CP包被酶联板,5B11-2和5G8-2单克隆抗体的效价均为1∶512 000;用感染SPLV的甘薯叶片汁液包被酶联板,2株单克隆抗体的效价均为1∶6 400。抗体类型及亚类鉴定结果表明,2株单克隆抗体均为IgG1、κ轻链。Western blot分析表明,2株单抗均能与SPLV CP和感染SPLV的甘薯叶片汁液有特异性反应。利用单克隆抗体建立的间接抗原包被ELISA(ACP-ELISA)检测SPLV方法,病叶1∶3 840倍稀释仍能检测到病毒。血清学和RT-PCR检测结果表明,制备的单克隆抗体可用于田间甘薯样品的检测。
- 乔奇张振臣秦艳红张德胜田雨婷王爽王永江
- 关键词：单克隆抗体RT-PCR
- 苦参碱与3种化学杀菌剂混配对甘薯长喙壳的联合毒力及防效验证被引量：3
- 2017年
- [目的]探索苦参碱在甘薯黑斑病防治中的应用。[方法]利用平皿法测定苦参碱与甲基硫菌灵、百菌清和异菌脲3种化学杀菌剂混配对甘薯长喙壳的联合毒力,通过制剂现混处理茎段的方法对增效配比进行防效验证。[结果]苦参碱可有效抑制甘薯长喙壳菌丝生长,EC50值为3.0790 mg/L。苦参碱与甲基硫菌灵混配质量比1∶2、苦参碱与百菌清混配质量比3∶1或1∶1以及苦参碱与异菌脲混配质量比1∶3时表现为增效作用。防效验证结果:苦参碱400 mg/L的防治效果为42.64%,苦参碱与百菌清制剂现混(1∶1)和(3∶1)400 mg/L的防治效果分别为78.25%、70.92%。[结论]苦参碱与百菌清联合使用对甘薯长喙壳的抑制作用优于苦参碱单独使用。
- 张德胜王永江王爽田雨婷乔奇秦艳红白瑞英张振臣
- 关键词：甘薯长喙壳杀菌剂苦参碱联合毒力
- 中国甘薯病毒种类的初步鉴定
- 甘薯是重要的粮食、饲料以及工业原料和新型能源作物，其用途越来越受到人们的关注。甘薯病毒病广泛存在于世界各甘薯产区，可造成甘薯产量下降、品质变劣，严重威胁甘薯生产。目前对我国甘薯上的病毒种类还缺乏系统的鉴定，甘薯病毒的发生...
- 乔奇张德胜秦艳红田雨婷王永江张振臣
- 甘薯病毒病害SPVD抗性鉴定方法及产量损失估计被引量：10
- 2014年
- 为了建立规范、有效的甘薯病毒病害(sweet potato virus disease,SPVD)抗性鉴定方法,于2011—2012连续两年,利用田间人工嫁接病毒接穗的方法对12个甘薯品种进行抗性鉴定和产量损失测定。结果显示,嫁接接种后,接穗成活率接近100%,12个品种都有不同程度发病,病情指数在51.0~95.2之间;感染SPVD的甘薯植株叶绿素含量降低、蔓长缩短;单株薯块产量损失范围在55.1%~97.8%之间。研究表明,供试的12个甘薯主栽品种感染SPVD后均可引起严重的产量损失,且田间人工嫁接病毒接穗是一个有效的SPVD抗性鉴定方法。
- 王爽刘顺通乔奇张德胜秦艳红张振臣
- 关键词：抗性鉴定方法产量损失估计
- 10种杀菌剂对甘薯黑斑病的毒力及联合毒力被引量：14
- 2012年
- 【方法】通过菌丝生长速率法测定了10种杀菌剂对引起甘薯黑斑病的甘薯长喙壳菌（CeratocystistimbriataEllisandHalsted）的毒力及部分药剂混配的联合毒力。【结果】粉唑醇毒力较高，其EC50值为0．0654mg／L；其次为氟硅唑，EC50值为0．1508mg／L；异菌脲、三唑酮、嗯霉灵的EC50值在1-10mg／L之间，抑菌活性高于甲基硫菌灵。联合毒力的测定结果表明：甲基硫菌灵与百菌清质量比2：1的配比、甲基硫菌灵与粉唑醇质量比2：1的配比、百菌清与粉唑醇质量比5：1的配比增效作用最强。[结论]为筛选防治甘薯黑斑病的杀菌剂提供了毒力测定依据。
- 张德胜张永超乔奇秦艳红田雨婷王爽张振臣
- 关键词：杀菌剂毒力联合毒力
- 甘薯上3种potyviruses病毒RNA干涉载体的构建及对甘薯的遗传转化
- 甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)、甘薯潜隐病毒(Sweet potato latent virus,SPLV)和甘薯G病毒(Sweet potato v...
- 秦艳红田雨婷张磊乔奇张德胜郑文明张振臣
- 甘薯卷叶病毒江苏分离物基因组全长序列测定及其外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达被引量：8
- 2012年
- 为了制备甘薯卷叶病毒(SPLCV)的特异性抗体,克隆了甘薯卷叶病毒江苏分离物SPLCV(JS∶XZ∶3-2)的全长基因,并对其基因结构及分子变异情况进行分析,同时对外壳蛋白(CP)基因进行了克隆和表达。利用PCR方法扩增并克隆了SPLCV(JS∶XZ∶3-2)的全基因组,测序分析表明,SPLCV(JS∶XZ∶3-2)基因组全长为2 834bp,含有6个开放阅读框架,与已发表的SPLCV其他分离物相比,全基因组核苷酸序列相似性为82.7%～94.4%。其中,CP基因由765个核苷酸组成,共编码254个氨基酸残基。SPLCV CP基因核苷酸序列与其他分离物的相似性在89.2%～90.6%,其中与SPLCV美国分离物(HQ333135)的相似性最高,为90.6%;与日本分离物(AB433788)的相似性最低,为89.2%;与中国大陆分离物(FJ515896)CP基因的核苷酸序列相似性为90.2%。将SPLCV CP基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-3上,获得重组质粒,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE分析得到了大小约为54.3kD的融合蛋白条带,说明CP基因在大肠杆菌中得到了高效表达。
- 乔贞贞秦艳红乔奇张德胜田雨婷高洁张振臣
- 关键词：基因组序列外壳蛋白基因原核表达
- 烟粉虱中甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)的快速检测技术被引量：2
- 2012年
- 建立了利用NCM-ELISA、RT-PCR和半巢式RT-PCR检测烟粉虱中SPCSV的方法,比较了3种检测方法的灵敏性。结果表明,NCM-ELISA最低能从16头带毒烟粉虱中检测出SPCSV;RT-PCR能稳定地从3头以上带毒烟粉虱中检测出SPCSV;半巢式RT-PCR能稳定地从单头烟粉虱中检测出SPCSV。检测灵敏性研究表明,用体外转录的RNA作为核酸模板,RT-PCR可检测的最低浓度为5.69×104拷贝/μL,半巢式RT-PCR为5.69×101拷贝/μL,说明半巢式RT-PCR检测方法的灵敏性比RT-PCR高1 000倍。
- 张盼宋国华乔奇秦艳红张德胜田雨婷郑文明张振臣
- 关键词：烟粉虱
