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海南省教育厅高等学校科学研究项目(Hjkj200719)
海南省教育厅高等学校科学研究项目(Hjkj200719)
- 作品数:4 被引量:43H指数:3
- 相关作者:罗素兰长孙东亭高炳淼朱利军吴勇更多>>
- 相关机构:海南大学更多>>
- 发文基金:海南省教育厅高等学校科学研究项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生更多>>
- 毕赤酵母重组子PCR模板制备方法的比较被引量:11
- 2009年
- 目的比较5种用于PCR实验的毕赤酵母(Pichia pastoris)重组子基因组DNA的制备方法,以寻求一种稳定、可靠、简便的DNA模板制备方法,用于毕赤酵母重组子的分析。方法分别用酵母基因组提取试剂盒法、蜗牛酶法、煮沸法、煮-冻-煮法、微波法制备重组毕赤酵母基因组DNA模板,在相同条件下进行PCR扩增并比较其差异。结果以5种方法制备的重组酵母DNA作为模板进行PCR,其结果均可达到鉴定酵母重组子的效果,其中酵母基因组提取试剂盒法和微波法可以鉴定酵母重组子的基因表型。结论微波法所需时间短、费用低、操作简便而且结果稳定,并能够鉴定酵母重组子的基因表型,是采用毕赤酵母表达系统进行PCR鉴定时制备模板DNA的首选方法。
- 高炳淼长孙东亭朱晓鹏吴勇罗素兰
- 关键词:毕赤酵母重组子聚合酶链式反应
- 海南产桶形芋螺毒管cDNA文库构建被引量:2
- 2009年
- 目的构建海南产桶形芋螺毒管cDNA文库,为桶形芋螺毒素基因资源的永续保存和新型药物的研发提供依据。方法以总RNA抽提试剂盒,从桶形芋螺毒管中提取总RNA,采用SMART技术,LD-PCR扩增获得双链cDNA,经SfiⅠ酶切和CHROMA SPIN-400柱分级分离后,将500bp以上的片段与载体pDNR-LIB连接,通过电穿孔转入E.coli JM109,获得原始文库;随机挑取单菌落,经菌液PCR鉴定重组率及插入片段大小,最后扩增文库。结果经鉴定,所得文库的容量约为5.0×106个克隆,原始文库的平均滴度为5.01×108,插入片段平均长度为1.0kb,文库的重组率达到92%。结论所构建的文库是合格的,为新型芋螺毒素的发现和研究利用提供了依据。
- 冯建成长孙东亭陈琴罗素兰胡远艳
- 关键词:CDNA文库
- 毕赤酵母表达体系中重组蛋白的分离纯化被引量:7
- 2009年
- 随着基因重组技术的快速发展,基因工程产品的利用越来越广泛,但其分离纯化的成本约占总成本的60%-70%。因此,探索一些简单有效的分离纯化方法尤为必要。简单介绍了目前较为流行的毕赤酵母表达体系,着重概述了重组蛋白分离纯化技术方法的应用情况。
- 高炳淼长孙东亭罗素兰安婷婷
- 关键词:毕赤酵母重组蛋白质纯化
- 全长cDNA文库构建方法及应用研究被引量:23
- 2009年
- 构建全长cDNA文库是获得大量基因全序列信息的有效途径,也是进行功能基因组研究的一条经济、快速的途径,它克服了常规cDNA文库的缺点,极大地推进了功能基因组的研究,尤其是对于那些因基因组庞大而未能进行全基因组序列测定的生物来说更为重要.全长cDNA文库的研究在不断发展,几种文库构建方法已经建立,并得到了较为广泛的应用.本文重点阐述了全长cDNA文库的构建方法,对各种方法进行了分析和比较;同时对全长cDNA文库的应用也作了介绍.
- 朱利军长孙东亭罗素兰
- 关键词:全长CDNA文库功能基因组