山西省科技攻关计划项目(20090311061-1)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：山西省人民医院北京市顺义区空港医院山西煤炭中心医院更多>>
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- 白藜芦醇预先干预对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠足细胞内质网应激性凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 研究内质网应激及c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）所致肾小球足细胞损伤中的作用及白藜芦醇对其的保护机制.方法 小鼠足细胞诱导分化,随机分为对照组（C组）、高AngⅡ组、白藜芦醇干预（AngⅡ＋Res）组、JNK通路特异抑制剂SP600125干预组,对照组采用RPMI 1640培养,AngⅡ浓度为10-8mol/L,白藜芦醇浓度为20μmol/L,SP600125浓度为20 μmol/L.作用48 h后,倒置显微镜下观察各组足细胞形态,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量聚合酶链反应（PCR）和Western blotting法分别测定葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和磷酸化JNK（p-JNK）mRNA及蛋白的表达.各组间数据比较采用t检验.结果 与对照组相比,AngⅡ组细胞凋亡率升高,GRP78 mRNA、p-JNK mRNA的表达增多（t=9.318、6.063、7.160,均P＜0.05）,且GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达也上调（GRP78蛋白和p-JNK蛋白Ⅰ、Ⅱ条带t=4.116、5.085、5.117,均P＜0.05）.与AngⅡ组相比,AngⅡ＋Res干预组足细胞凋亡率降低,GRP78mRNA、蛋白表达减少（t=14.328、4.530、3.977,均P＜0.05）,p-JNK mRNA、p-JNK蛋白的表达亦减少（mRNA和蛋白Ⅰ、Ⅱ条带t=4.590、4.990、4.991,均P＜0.05）.与AngⅡ组相比,SP600125干预组足细胞凋亡率降低（t=10.756,P＜0.05）,p-JNK mRNA、蛋白的表达亦减少（mRNA和蛋白Ⅰ、Ⅱ条带t=5.408、4.901、4.886,均P＜0.05）.结论 高AngⅡ可在体外诱导足细胞发生凋亡,通过了内质网应激途径,并由JNK通路引起细胞凋亡.白藜芦醇通过抑制内质网应激通路及JNK通路的激活抑制了足细胞的凋亡.
- 秦洁张姬欣马春明聂琳张红霞马禅娟柳洁
- 关键词：足细胞内质网应激白藜芦醇SP600125
- 硫辛酸对高糖所致小鼠足细胞内质网应激性凋亡的影响被引量：4
- 2014年
- 目的：观察条件永生化的小鼠足细胞在高糖及硫辛酸干预环境下，足细胞凋亡率及内质网应激反应（ ERS ）标志分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（ Caspase-12）和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达量，探究足细胞凋亡的发生与内质网应激反应的关系。方法将分化良好的足细胞随机分为：正常葡萄糖浓度对照组（5.6 mmol/L）、甘露醇高渗对照组（25 mmol/L）、高糖组（25 mmol/L）、高糖＋硫辛酸组（25 mmol/L高糖＋500μmol/L硫辛酸）。作用48 h后，流式细胞仪测定各组足细胞凋亡率；实时定量聚合酶链反应（ RT-PCR）技术检测GRP78及Caspase-12 mRNA的表达水平，Western blotting技术检测GRP78及Caspase-12蛋白质表达水平，各组之间凋亡率及GRP78与Caspase-12的mRNA与蛋白的表达量比较采用LSD-t检验。结果（1）流式细胞仪检测各组足细胞凋亡率发现：正常葡萄糖浓度对照组足细胞凋亡率与高渗对照组足细胞凋亡率相似（ P＞0.05）；高糖组足细胞凋亡率较正常葡萄糖浓度对照组明显升高[（14.0±1.1）％比（3.4±0.6）％，t＝9.12，P＜0.05]；高糖＋硫辛酸组足细胞的凋亡率与高糖组相比明显降低[（14.0±1.1）％比（7.8±0.6）％，t＝7.73，P＜0.05]。（2）高糖组GRP78与Caspase-12 mRNA的表达量与正常葡萄糖浓度对照组相比，表达量均明显增加（分别为2.62±0.57比0.85±0.24，10.04±2.28比1.28±0.97， t ＝6.75、25.84，均 P ＜0.05），高糖＋硫辛酸组GRP78与Caspase-12 mRNA的表达量与高糖组相比表达量均明显下降（分别为0.82±0.22比2.62±0.57，4.98±0.55比10.04±2.28，t＝3.83、11.83，均P＜0.05）。（3）高糖组GRP78与Caspase-12蛋白表达量与正常葡萄糖浓度对照组相比明显增加（分别为：2.48±0.19比0.37±0.04，2.07±0.18比0.47±0.08，t＝17.55、12.34，均P＜0.05），高糖＋硫辛酸组GRP78与Caspase-12蛋白质表达量与高糖组相比表达量均明显
- 秦洁马春明张姬欣聂琳张红霞马禅娟柳洁
- 关键词：硫辛酸高糖足细胞内质网应激反应
- 高糖环境下Ang-Ⅱ对小鼠足细胞损伤机制研究被引量：2
- 2014年
- 目的 高糖、血管紧张素Ⅱ（Ang-Ⅱ）培养小鼠肾小球足细胞,观察足细胞形态学改变;观察损伤环境下足细胞蛋白激酶C（PKC）活性、nephrin、CD2AP mRNA表达、细胞凋亡情况.方法 培养条件永生化小鼠足细胞株,经传代、诱导分化后分为6组：对照组、高葡萄糖组、高Ang-Ⅱ组、混合组、PKC抑制剂干预组及甘露醇高渗对照组.各组培养72 h,流式细胞仪检测细胞凋亡率;并分别于培养的24、48 h进行各组PKC活性测定（ELISA法）、RT-PCR检测nephrin、CD2AP mRNA的表达.结果 （1）高糖、高Ang-Ⅱ作用24 h后,足细胞PKC活性较对照组明显升高[（47.09±1.19） pmol/L vs （42.93±0.71） pmol/L,P ＜0.05],混合组升高更显著[（58.75 ±0.71）pmol/L,P＜0.01],48 h各组PKC活性较同组24 h升高（P＜0.05）;（2）高糖组、高Ang-Ⅱ组足细胞nephrin mRNA表达较对照组减少（56.87±0.74,48.54±0.86,P＜0.05）,混合组减少的程度更加明显（11.7±1.54,P＜0.01）,PKC抑制剂干预组nephrin mRNA的表达较混合组有所增高,差异有统计学意义（62.79±1.53,P＜0.05）,随着作用时间延长,各损伤环境下nephrin mRNA表达逐渐减少;（3）在损伤环境作用初期24h时,高糖组、高Ang-Ⅱ组CD2AP mRNA表达与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）,48 h后高糖组、高Ang-Ⅱ组及混合组CD2AP mRNA的表达均低于对照组（56.09±1.46、67.68±2.58、54.08±2.74,P＜0.05）,干预组CD2AP mRNA的表达较混合组有所增高,差异有统计学意义（90.75±1.33,P＜0.05）;（4）培养48、72 h后高糖组、高Ang-Ⅱ组及混合组足细胞凋亡率与对照组比较升高（P＜0.05）,PKC抑制剂干预组于72 h时显示出降低细胞凋亡的趋势.结论 高糖、Ang-Ⅱ可激活足细胞PKC活性,下调足细胞nephrin、CD2AP mRNA表达,诱导足细胞凋亡.PKC通路的激活参与了高糖、Ang-Ⅱ对足细胞nephrin、CD2AP mRNA表达的影响.
- 秦洁聂琳张晓亮柳洁
- 关键词：足细胞蛋白激酶C
- α-硫辛酸对高糖 高同型半胱氨酸诱导的小鼠足细胞凋亡的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨α-硫辛酸对高糖、高同型半胱氨酸(Hcy)作用下小鼠足细胞凋亡及Nephrin mRNA表达的影响。方法将体外培养的足细胞用高糖(25mmol/L)、Hcy(1mmol/L)、α-硫辛酸(0.5mmol/L)干预,分别在干预24、48、72h时收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Nephrin mRNA表达。结果 24h时,高糖组、高Hcy组及混合组未见明显细胞凋亡(P>0.05);48h时,上述3组可见明显的细胞凋亡,且混合组凋亡更加明显(P<0.01);72h时,上述差异更加明显(P<0.01);α-硫辛酸可对抗高糖、高Hcy引起的足细胞凋亡(均P<0.05),且有一定的时间依赖性;高糖、高Hcy环境下,足细胞Nephrin mRNA表达呈下降趋势,且有一定的时效性;α-硫辛酸可对抗上述趋势。结论α-硫辛酸可减弱高糖、高Hcy对足细胞促凋亡作用,还可对抗其下调Nephrin mRNA的表达。
- 秦洁张晓亮聂琳张姬欣马春明柳洁
- 关键词：硫辛酸半胱氨酸高糖足细胞
