国家自然科学基金(81273465)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 相关作者：徐宇虹李琛张丽瑞陈晓龙吴彩兴更多>>
- 相关机构：上海交通大学西安交通大学医学院第一附属医院上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 非病毒载体介导的siRNA细胞内导入机理研究
- 2014年
- 比较了两类非病毒载体,包括阳离子聚合物载体(HPAMAM-PHE45,PEI)和阳离子脂质载体(DOTAP)运载siRNA进入细胞的动态过程.DOTAP/siRNA能够很快地被内吞进入内涵体途径,6 h内就能将绝大多数的siRNA从内涵体中释放出来.而HPAMAMPHE45,PEI/siRNA复合物在与细胞接触0.5 h后首先附着在细胞膜表面,逐渐地部分复合物也经由内涵体途径将siRNA从内涵体中释放出来进入细胞质.但也有一部分复合物可能从窖蛋白介导的内吞途径进入细胞.实验结果显示,细胞摄取阳离子脂质/siRNA主要通过网格蛋白介导的内吞实现,而阳离子聚合物/siRNA主要通过网格蛋白介导的内吞和窖蛋白介导的内吞共同完成.这两种不同的内吞方式可能对非病毒载体的不同转染机理及优化理论有较大影响.深入研究其中的关键因素可以为非病毒载体运载siRNA内吞和胞内途径的机理提供线索.
- 刘玉洁吴彩兴徐宇虹
- 关键词：基因沉默
- RNA干扰NF-κBp65抑制膀胱癌BLS细胞的增殖和侵袭被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨RNA干扰核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65对膀胱移行细胞癌BLS细胞增殖和侵袭能力的影响,以及NF-κBp65在膀胱癌组织中的表达及意义。方法:构建靶向NF-κBp65的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)重组表达载体pRNAT-U6.1-NF-κBp65-shRNA/Neo,并将其转染至膀胱癌BLS细胞中,蛋白质印迹法验证NF-κBp65的沉默效果。MTT法、平板克隆形成实验及Transwell实验观察pRNAT-U6.1-NF-κBp65-shRNA/Neo转染后BLS细胞的增殖和侵袭能力,蛋白质印迹法检测NF-κB下游分子c-myc、cyclin D1和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的表达。免疫组织化学法检测60例膀胱移行细胞癌组织中NF-κBp65和MMP9的表达。结果:成功构建重组载体pRNAT-U6.1-NF-κBp65-shRNA/Neo,并获得稳定转染的NF-κBp65shRNA-BLS细胞。与转染空载体的阴性对照(negative control,NC)NF-κBp65shRNA-NC-BLS细胞比较,NF-κBp65shRNA-BLS细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降(P<0.05),同时c-myc、cyclin D1和MMP9蛋白的表达水平下调(P<0.05)。浸润性(T_2~T_4)膀胱癌组织和有淋巴转移的膀胱癌组织中NF-κBp65的表达强度及MMP9的阳性表达率高于浅表性膀胱癌组织(Tis^T_1)和无淋巴转移的膀胱癌组织(P<0.05),且NF-κBp65与MMP9蛋白表达呈正相关(r=0.329,P<0.05)。结论:NF-κB信号通路可能在膀胱癌的增殖和侵袭中发挥作用。
- 张丽瑞陈葳李琛李旭
- 关键词：膀胱肿瘤核转录因子ΚB肿瘤浸润
- 棕色脂肪活动状态对肿瘤组织摄取^(18)F-FDG的影响
- 2013年
- 目的:应用正电子发射断层扫描(positron emission tomography,PET)/计算机断层成像(computed tomography,CT)技术研究棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)活动情况对荷瘤小鼠肿瘤组织摄取18F-氟-2-脱氧葡萄糖(^(18)F-luoro-2-deoxyglucose,^(18)F-FDG)的影响。方法:建立人肺癌NCI-H1299小鼠移植瘤模型,随后采用人工控制实验条件的方法调节小鼠BAT的活动;实验分为2组:抑制组通过禁食、麻醉和加热处理抑制BAT的活动,激发组则通过食物干预和冷刺激激发BAT的活动。对2组小鼠进行micro-PET/CT成像检测,比较BAT不同活动状态下小鼠肿瘤摄取18F-FDG的情况,并计算标准摄取值(standard uptake value,SUV)。结果:BAT激发组小鼠的肿瘤在PET/CT图像中几乎是不可见的,其摄取18F-FDG的SUV值为0.15±0.06,显著低于BAT抑制组的0.58±0.20(P<0.05)。结论:BAT活动的增加会显著降低肿瘤对^(18)F-FDG的摄取,从而影响肿瘤的成像效果。
- 吴欣李彪海汪溪徐宇虹彭金良
- 关键词：正电子发射断层显像术棕色脂肪
- 大肠杆菌热诱导赖氨酰-tRNA合成酶二腺苷多磷酸三重催化活性研究
- 2013年
- E.coli热诱导赖氨酰-tRNA合成酶(LysU,EC 6.1.1.6)是高效的Ap4A/Ap3A合成酶,已知反应模式为双重动态过程:2ATP→Ap4A+2Pi→Ap3A+3Pi。为进一步研究LysU"中间物可逆"催化模型,表达纯化了LysU蛋白并验证结构稳定性,构建了二腺苷多磷酸产物检测系统并分离了各阶段催化产物,观察了AMPPCP和AMPCPP阻断Ap3A/ADP合成的反应。圆二色光谱和荧光光谱扫描证明纯化后的LysU蛋白结构完整。LysU首先催化ATP合成83%的Ap4A,接着可逆生成67%的Ap3A。实验中发现,Ap3A并非LysU二腺苷多磷酸催化反应的终产物,Ap3A可继续逆生成80%的ADP。以AMPPCP或AMPCPP代替ATP为起始底物,发现无Ap3A转化ADP反应。上述结果证明LysU具有三重催化活性:2ATP→Ap4A+2Pi→Ap3A+3Pi→2ADP+2Pi,符合"磷酸捕获机制"催化模型:活化的赖氨酰-腺苷中间物捕获核苷酸或磷酸小分子,形成对应的二腺苷多磷酸化合物。这些研究结果可为阐明不同形式功能性腺苷酸衍生物间的相互转化提供更多的信息,有助于进一步认识功能性腺苷酸分子在生命活动中的作用。
- 陈晓龙徐宇虹
