国家高技术研究发展计划(2006AA10Z138)
- 作品数：18 被引量：82H指数：6
- 相关作者：杨公社李惠侠鞠大鹏郑雪莉杨永青更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学河南农业大学南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- Leptin对猪原代脂肪细胞脂解及其关键脂酶mRNA表达的影响被引量：11
- 2008年
- Leptin是由脂肪组织分泌的内源因子,在调节机体能量平衡过程中起重要作用。Leptin促进脂解的研究由来已久,但其作用机理尚不完善。本研究旨在通过系统检测关键脂酶mRNA的表达变化来探讨Leptin促进脂解的分子机理。运用形态学观察、油红O染色和RT-PCR鉴定培养的猪原代脂肪细胞;甘油测定试剂盒和游离脂肪酸(FFA)测定试剂盒分别检测甘油和FFA的释放;半定量RT-PCR检测关键脂酶mRNA的表达。结果显示:100nmol/L的Leptin可显著上调ATGL、TGH-2、HSL、MGL和LPLmRNA的表达(P<0.01),但同时下调PerilipinmRNA的表达(P<0.01);Leptin呈浓度依赖性促进甘油的释放(P<0.01),但对FFA的释放影响不显著(P>0.05)。以上结果提示,Leptin可能主要通过上调ATGL、MGL、LPL和下调Perilipin的表达促进猪原代脂肪细胞的脂解;同时推测,FFA释放的相对稳定可能是由Leptin通过上调UCPs的表达而增加FFA的消耗引起的。
- 李玉成郑雪莉杨公社
- 关键词：LEPTIN脂解
- 高表达FoxO1抑制猪骨骼肌成肌细胞的分化被引量：7
- 2010年
- FoxO1(Forkhead box O1)是调控肌肉生长、代谢和细胞分化的重要转录因子,但其在成肌细胞分化中的作用还不甚清楚。为了研究FoxO1对哺乳动物成肌细胞分化的影响,以原代培养的长白仔猪成肌细胞作为实验材料,用2%马血清诱导分化,采用实时荧光定量PCR、Western blotting和脂质体转染等方法检测FoxO1及早期和晚期生肌调节因子MyoD和myogenin在猪成肌细胞分化过程中的表达变化。结果显示,在猪成肌细胞分化过程中,FoxO1mRNA表达量显著增加,但总蛋白量变化不显著,其磷酸化水平显著上调。同时,高表达FoxO1的猪成肌细胞中,生肌调节因子MyoD和myogenin mRNA表达受到显著抑制,而MyoD蛋白变化不显著,myogenin却显著下调(P<0.05)。以上结果表明,FoxO1能够推迟猪成肌细胞的分化时间并抑制分化;同时推测,FoxO1可能通过抑制生肌调节因子的表达控制骨骼肌纤维类型的终末分化。
- 袁媛史新娥刘月光杨公社
- 关键词：FOXO1分化
- 雌激素受体关联受体α调节脂肪细胞甘油三酯分解被引量：5
- 2011年
- 雌激素受体关联受体α(Estrogen-related receptorα,ERRα)是调控机体能量代谢的关键转录调控因子,也是脂肪生成的关键调控者。为研究ERRα对脂肪细胞甘油三酯分解的影响及其分子机制,分化的猪脂肪细胞在PKA(Proteinkinase A)或/和ERK(Extracellular signal-related kinase)抑制剂预处理和不处理的情况下,再用Ad-ERRα侵染或XCT790处理48 h。通过测定脂肪细胞中甘油三酯浓度和培养液中的甘油释放量分析脂肪细胞的脂解变化;Western blotting方法检测PPARγ(Peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、perilipin A、p-perilipin A、HSL(Hormone sensitivelipase,HSL)和ATGL(Adipose triglyceride lipase,ATGL)蛋白表达。结果显示,ERRα显著促进猪脂肪细胞分化及甘油三酯积累,同时促进了甘油三酯水解;分别及同时阻断PKA和ERK通路并不影响ERRα对脂肪细胞甘油释放的促进作用;ERRα显著上调HSL、ATGL、PPARγ及perilipin A蛋白表达,但p-perilipin A水平并未发生变化。推测过量表达ERRα可能导致HSL和ATGL蛋白表达上调并促进甘油三酯水解,从而为脂肪细胞分化提供更多的游离脂肪酸(Free fat acid,FFA)作为甘油三酯合成周转的底物。
- 鞠大鹏何晶晶郑雪莉赵丽丽杨公社
- 关键词：脂肪细胞
- PGC-1β在脂肪细胞分化过程中调节线粒体及脂肪生成相关基因的表达
- 引言脂肪细胞分化除甘油三酯大量沉积外还伴随着线粒体的大量增殖及氧化呼吸功能的增强,但这一现象在前体脂肪细胞分化过程中的意义尚不明确,线粒体发育规律还不明晰。PGC-1β是转录辅助活化因子PGC-1
- 卢荣华吉红常志光苏尚顺杨公社
- 关键词：前体脂肪细胞分化RNAI超表达
- 文献传递
- 猪PGC-1β和PRC基因的部分cDNA克隆及表达分析被引量：2
- 2010年
- 以猪心脏组织为材料,克隆猪PGC-1β(PPARγcoactivator-1β)和PRC(PGC-1-related coactivator)基因的cDNA序列,并进行生物信息学分析,同时明确其组织表达特征。根据人PGC-1β和PRC基因的已知mRNA序列和在猪ESTs数据库中搜索得到的同源序列,利用RT-PCR技术克隆猪PGC-1β和PRC基因的部分cDNA序列,并用SQ-RT-PCR和Western blot方法检测其在猪心脏、肌肉、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏、小肠、脂肪组织中的表达。结果,获得长度分别为1251和1254bp的猪PGC-1β和PRC基因的部分序列,分别编码415和417个氨基酸(GenBank登录号分别为:FJ377680和FJ479791),其核苷酸序列和氨基酸序列与其它物种的同源性均达到80%左右,并包含有TPPT-TPP和DHDY2个保守性序列,以及RNA识别基序(RRM)的保守性结构域。PGC-1β在8个组织中均有表达,而PRC主要在心脏、肝脏、肾脏和骨骼肌中表达,在脾脏和小肠中未检测到。本研究成功获取了猪PGC-1β和PRC基因部分序列,且组织表达存在差异,所获得的结果为研究PGC-1家族的生理功能及调节机制积累了资料。
- 常志光卢荣华吉红苏尚顺高晓娟杨公社
- 关键词：PRCCDNA克隆组织表达谱
- 猪脂肪组织发育过程中Wnt/β-catenin信号通路相关基因及脂肪转录因子的时序表达被引量：9
- 2008年
- 为研究Wnt/β-catenin信号通路对猪脂肪组织发育的影响,并探讨其可能的作用机制,以1-120日龄长白猪脂肪组织为试验材料,采用SQRT-PCR法检测Wnt信号通路中相关基因β-catenin、GSK3β、Fz1及主要的脂肪转录因子PPARγ、C/EBPα和分化早期标志基因LPL mRNA的表达变化;石蜡切片免疫组化方法定性检测β-catenin在脂肪组织发育中的时序表达变化。SQRT-PCR结果显示,β-catenin mRNA在猪出生第1天有高水平表达,随着个体日龄的增长,其表达量逐渐降低,60日龄后维持在一个较低水平。GSK3β和Fz1mRNA的表达量也伴随脂肪组织的发育而逐渐降低。而LPL、PPARγ和C/EBPα的mRNA表达量随着个体日龄的增长而逐渐升高,60日龄后仍保持高水平的表达。石蜡切片免疫组化结果显示,随着脂肪组织的发育,β-catenin蛋白的表达也随之降低,并且β-catenin蛋白的表达部位逐渐由细胞核和细胞质共表达变为只在细胞质中表达。上述基因表达的时序变化规律提示,β-catenin在维持前体脂肪细胞的未分化状态,抑制脂肪组织发育中具有重要作用,其作用机制可能是通过对脂肪细胞转录因子PPARγ、C/EBPα及分化早期标志基因LPL mRNA的调控来进行的。
- 罗肖李惠侠杨公社
- 关键词：WNT/Β-CATENIN
- 干扰素-γ对猪前体脂肪细胞分化的影响
- 2008年
- 为探讨干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)对猪前体脂肪细胞分化的影响,以体外培养1日龄猪前体脂肪细胞为研究对象,分别以0IU/mL(对照组)、10、100和1000IU/mL的IFN-γ处理细胞.采用油红O染色提取法定量分析细胞内脂肪生成和细胞分化程度;选取浓度为100IU/mL的IFN-γ处理猪前体脂肪细胞,用半定量反转录—聚合酶链式反应(SQRT-PCR)分析脂肪细胞分化标志基因脂蛋白脂酶(LPL)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)mRNA表达情况;免疫印迹分析PPAR-γ2蛋白表达情况,探讨IFN-γ影响猪前体脂肪细胞分化可能的分子机制.结果显示,各处理组细胞油红O染色的OD值均显著低于对照组(p<0.05),并且100IU/mL组显著低于10IU/mL(p<0.05),显著高于1000IU/mL组(p<0.05);此外,100IU/mL组LPL和PPAR-γ2 mRNA以及PPAR-γ2蛋白的表达水平均显著低于对照组(p<0.05).上述结果表明,IFN-γ抑制猪前体脂肪细胞的分化,效果呈剂量依赖性;此抑制作用可能是通过降低LPL和PPAR-γ2 mRNA以及PPAR-γ2蛋白的表达实现的.
- 王博吴江维于太永杨公社
- 关键词：干扰素-Γ脂肪细胞分化
- 地塞米松和胰岛素调节猪脂肪细胞SOCS-3、OB、GLUT4和PPARγ基因的表达被引量：2
- 2008年
- 猪是研究糖尿病最理想的模型动物,研究胰岛素和胰岛素抵抗是研究糖尿病的重要环节。为明确SOCS-3在胰岛素抵抗中的作用,分别用100nmol/L的胰岛素,300nmol/L的地塞米松处理原代培养的猪脂肪细胞诱导胰岛素抵抗;利用半定量RT-PCR技术分别检测SOCS-3、OB、GLUT4和PPARγ基因表达变化。结果发现,胰岛素增加了GLUT4、SOCS-3和PPARγ基因的表达,对OB基因表达变化没有显著性影响;地塞米松诱导的胰岛素抵抗状态下OB和SOCS-3基因表达水平升高,而GLUT4和PPARγ基因表达水平显著下调。研究结果表明,GLUT4基因表达量水平的升高可能是由于PPARγ的高表达引起,SOCS-3基因的不同表达水平对胰岛素信号的抑制效果不同。地塞米松诱导的胰岛素抵抗不仅表现在对葡萄糖转运的抑制,也反映在抑制了胰岛素信号;而SOCS-3基因可能是消除胰岛素抵抗的一个有效靶基因。
- 张浩卫吴江维王博吕真杨公社
- 关键词：SOCS-3GLUT4PPARΓ胰岛素抵抗地塞米松
- Leptin通过JAK-STAT3通路抑制原代大鼠脂肪细胞perilipin mRNA的表达被引量：3
- 2009年
- 【目的】探讨瘦素(Leptin)影响大鼠脂肪细胞perilipin、ADRP和TIP47 mRNA表达的分子机理。【方法】以体外培养的原代大鼠脂肪细胞为研究对象,用50 ng/mL Leptin及Leptin与JAK-STAT3通路抑制剂(AG490)、MEK通路抑制剂(U0126)、PPARgamma激活剂(罗格列酮(Ros))联合处理原代大鼠脂肪细胞3 h,提取总RNA,半定量(Semi-quantitative,SQ)RT-PCR法检测PPAR gamma、perilipin、ADRP和TIP47 mRNA的表达情况。【结果】阻断JAK-STAT3通路,可以减弱50 ng/mL Leptin对原代大鼠脂肪细胞perilipin mRNA表达的抑制作用(P<0.05),但加剧了Leptin对大鼠脂肪细胞ADRP和TIP47 mRNA表达的抑制(P<0.05);阻断MEK通路可以加剧Leptin对大鼠脂肪细胞perilipin、ADRP和PPAR gamma mRNA表达的抑制作用(P<0.05)。【结论】Leptin通过JAK-STAT3通路抑制原代大鼠脂肪细胞perilipin mRNA的表达。
- 张明涛鞠大鹏杨永青杨公社
- 关键词：LEPTIN脂肪细胞PERILIPINADRPPPARGAMMA
- 猪miR-103实时定量PCR分析适宜归一化者确定和组织表达谱分析
- ＜正＞引言MicroRNAs为19—22个核苷酸的非编码小调控RNA,对基因表达进行转录后调控。miR-103序列在已知脊椎动物中高度保守,在人、鼠的各种组织中呈广泛性表达,参与脂类代谢、红细胞生成、免疫、发育、肿瘤
- 李国喜宁小敏吴宗松杨公社
- 关键词：组织表达谱实时定量PCR
- 文献传递
