国家自然科学基金(39870813)
- 作品数：14 被引量：43H指数：4
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- 顺铂诱导的人卵巢癌多药耐药细胞系基因表达谱分析被引量：4
- 2006年
- 目的卵巢癌多药耐药性的产生是导致其化疗失败的主要原因,为研究卵巢癌耐药机制,本研究建立了人卵巢癌细胞多药耐药模型COC1/DDP,并进行了基因表达谱分析。方法以顺铂为诱导剂,采用中等剂量、间歇作用法建立多药耐药细胞系COC1/DDP,然后以其亲本细胞COC1为对照,应用cDNA微阵列检测COC1/DDP细胞的基因表达。结果与COC1细胞相比,COC1/DDP细胞对顺铂有6.2倍耐药性,细胞倍增时间延长了8.9h,S期细胞减少了(27.4±2.13)%,而G1和G2期细胞则分别增加了(19.6±3.71)%和(8.3±1.95)%,对阿霉素、5-氟脲嘧啶和长春新碱也有明显的交叉耐药性。较之COC1亲本细胞,COC1/DDP细胞有143个基因的表达水平发生改变,表达上调的有71个基因,表达下调的有72个基因,包括大量的凋亡和抗凋亡基因、信号转导和细胞周期调节基因、DNA转录与修复基因以及蛋白激酶和磷酸酶基因。结论COC1/DDP细胞具有多药耐药的特性,耐药性的产生与其特异的基因表达谱有关。
- 曹漫明张积仁汪森明胡喜钢周媛
- 关键词：多药耐药顺铂CDNA微阵列基因表达
- 靶向逆转KB细胞多药抗性时c-myc基因表达的改变
- 2002年
- 何英袁亚维陈俊张积仁
- 关键词：C-MYC基因多药耐药性KB细胞靶向逆转基因表达
- 糖基转移酶反义核酸对人脑胶质瘤细胞SWO-38作用的分子机理
- 2002年
- 背景与目的:红细胞系列的鞘糖脂与很多人类肿瘤的生物学活性相关。α1,4半乳糖糖基转移(α1,4-galactosyltransferase,α1,4Gal-T)是红细胞系列鞘糖脂合成的特异的糖基转移酶。本实验目的是研究α1,4Ga反义寡核苷酸对脑胶质瘤细胞系SWO-38的作用及其分子机理。方法:人工合成α1,4Gal-T基因的反义寡核苷酸采用脂质体介导的基因转染方法将α1,4Gal-T基因反义核酸转入SWO-38细胞中。应用RT-PCR检测其对α4Gal-TmRNA表达的影响,应用克隆形成实验检测其对细胞增殖的作用,应用流式细胞术(FCM)和琼脂糖凝胶电检测细胞凋亡的发生,应用FCM检测细胞fas、p53、bax和bcl-2表达的变化。结果:细胞转染反义核酸后,经RT-P检测证实其α1,4Gal-TmRNA基因的表达下降;克隆形成实验显示细胞生长明显受到抑制(P<0.01);DNA电泳像呈凋亡表现;FCM检测表明,导入α1,4Gal-T基因反义核酸的SWO-38细胞凋亡明显增加(P<0.05),bcl-2蛋表达显著下降(P<0.01),而fas和bax蛋白表达显著提高(P<0.01),p53蛋白表达无显著变化。结论:α1,4Ga基因硫代反义核酸可诱导脑胶质瘤细胞系SWO-38细胞凋亡,其机理与fas、bcl-2和bax基因调控及其相互作用关。
- 郑刚张积仁刘发全王雄文张新宇
- 关键词：糖基转移酶分子机理脑胶质瘤反义核酸
- 多药耐药细胞MCF-7/ADR及其亲本细胞MCF-7人类白细胞抗原和B7表达的对比研究被引量：1
- 2001年
- 摘要:目的研究乳腺癌多药耐药细胞人类白细胞抗原(HLA)和免疫共刺激分子B7的表达,探讨乳腺癌多药耐药与免疫逃避的关系。方法应用免疫荧光-单克隆抗体直接标记的流式细胞技术,检测并分析比较阿霉素和长春新碱耐药的乳腺癌细胞(MCF-7/ADR)及其化疗敏感的亲本细胞(MCF-7)HLA和B7分子(B7-1/CD80、B7-2/CD86)的表达。结果MCF-7/ADR细胞多药耐药糖蛋白P-170表达的阳性细胞百分率(PECR)和平均相对荧光强度(RLFI)分别为85.3%和40.65±5.54,明显高于MCF-7细胞(分别为3.38%、5.13±3.27,P<0.001、P=0.0030)。MCF-7/ADR细胞HLA-Ⅰ表达的PECR和平均RLFI分别为76.26%和51.77±7.55,明显低于敏感细胞MCF-7(分别为98.22%和129.08±9.97,P<0.001);MCF-7/ADR细胞HLA-DR的PECR和平均RLFI分别为13.92%、19.20±5.23,MCF-7细胞分别为10.06%、19.20±5.23;两种细胞B7-1表达的PECR和平均RLFI没有显著差异(P=0.348,P=0.105)。敏感细胞B7-2表达的PECR为14.4%,平均RLFI为11.72±4.15,MCF-7/ADR细胞分别为1.28%(P=0.011)、30.06±3.20(P=0.026)。结论乳腺癌多药耐药细胞HLA和B7分子表达与敏感细胞有显著区别,主要表现为HLA-Ⅰ类分子表达下调,表明乳腺癌多药耐药细胞存在HLA-I相关的免疫逃避机制。
- 但汉雷赵燕张健张积仁
- 关键词：药物耐受性HLA抗原多药抗药性
- 乳腺癌多药耐药细胞人类白细胞抗原和B7分子表达的体外调节被引量：3
- 2002年
- 目的研究乳腺癌多药耐药细胞人类白细胞抗原(HLA)和免疫共刺激分子B7-1(CD80)、B7-2(CD86)表达的可调控性。方法应用免疫荧光FITC-抗体直接标记的流式细胞检测技术(FCM)检测乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR经重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)不同浓度(0、100、400、800IU/ml)和不同作用时间(0、12、24和48h)处理后HLA和B7表达及其变化。结果rhIFN-α2b在浓度小于1×103 IU/ml时对MCF-7/ADR细胞生长和增值无明显影响。经rhIFN-α2b(400IU/ml)处理,MCF-7/ADR细胞HLA和B7表达的阳性细胞百分率(PECR)有不同程度升高,以24h时比较明显。当不同浓度rhIFN-α2b(100、400、800IU/ml)处理24h后,MCF-7/ADR细胞HLA-Ⅰ表达的PECR由未处理时的(76.26±7.55)%升至(78.12±8.34)%、(87.84±12.45)%、(83.98±10.37)%(P<0.05);HLA-DR由未处理时的(13.92±5.23)%升至(24.26±9.02)%、(31.48±6.33)%、(30.00±4.68)%(P<0.005);B7-1变化不明显,分别为(2.42±1.28)%、(1.91±2.71)%、(3.33±3.92)%和(2.62±1.27)%(P>0.05);B7-2由未处理时的(1.28±0.81)%升至(3.01±2.44)%、(4.62±2.81)%和(8.68±4.45)%(P<0.05)。平均相对荧光强度(RLFI)以HLA-Ⅰ变化最为明显,由未处理时的57.77±7.55升至79.29±8.34、79.85±10.23和89.
- 但汉雷赵燕张健张积仁
- 关键词：HLA抗原多药抗药性
- 中性鞘糖脂在KBv_(200)细胞的表达及其与多药耐药性的关系被引量：6
- 2001年
- 目的 研究肿瘤细胞mdr1与其细胞表面中性鞘糖脂 (N GSLs)表达的关系。方法 利用特异性切割mdr1的核酶 (ribozyme)为工具 ,以表达mdr1的耐药细胞株KBv2 0 0 为靶细胞 ,采用脂质体转染技术 ,将含核酶的质粒pHβApr 1neo/ 5mR3及空载体pHβApr 1neo导入KBv2 0 0 及其亲本KB细胞内 ,运用Northern blotting、免疫组化方法观察核酶对mdr1mRNA及P gp的影响 ,用改良的Hakamori方法提取、纯化耐药逆转前后及KB细胞的N GSLs ,以高效薄层层析 (HPTLC)分析不同细胞亚株N GSLs的表达。采用MTT法分析糖脂合成抑制剂DL PPMP对肿瘤细胞多药耐药性 (MDR)的逆转作用。结果pHβApr 1neo/ 5mR3及pHβApr 1neo可以在KB、KBv2 0 0 细胞中稳定表达 ,mdr1 核酶可以特异性地切割mdr1,导致KBv2 0 0 / 5mR3的mdr1mRNA含量下降 ,P gp表达减低。KB和KBv2 0 0 的N GSLs表达有差异 ,KBv2 0 0 的单乙糖神经鞘氨醇 (monohexosylceramide ,CMH)、二乙糖神经鞘氨醇 (dihexosylceramide ,CDH)表达较KB强 ,核酶逆转MDR后 ,KBv2 0 0 / 5mR3的CMH、CDH表达降低 ,以CMH为著。DL PPMP可通过抑制CMH的合成 ,逆转KBv2 0 0 对长春新碱 (VCR)的耐药。结论 肿瘤细胞mdr1与其细胞表面N GSLs表达相关 ,CMH为耐药相关N GSLs,抑制耐药细胞CMH的合成可能?
- 张健张积仁袁亚维赵燕林学颜
- 关键词：多药耐药核酶肿瘤细胞肿瘤
- CD3AK、LAK对KB、KBv_(200)细胞株耐药逆转前后的杀伤作用被引量：16
- 2001年
- 目的 探讨免疫活性细胞对肿瘤细胞的杀伤活性与mdr1的关系。方法 利用特异性切割mdr1的ribozyme为工具 ,以表达mdr1的耐药细胞株KBv2 0 0 为靶细胞 ,采用脂质体转染技术 ,将含ribozyme的质粒pHβApr 1neo/ 5mR3及空载体pHβApr 1neo导入KBv2 0 0 及其亲本KB细胞内 ,运用North ernblotting、免疫组化方法观察ribozyme对mdr1mRNA及P 170的影响 ,采用MTT法检测了CD3AK、LAK对KB、KBv2 0 0 细胞株耐药逆转前后杀伤活性的变化。结果 含ribozyme的质粒pHβApr 1neo/ 5mR3及空载体pHβApr 1neo可以在KB、KBv2 0 0 细胞中稳定表达 ,ribozyme可以特异性地切割mdr1,导致KBv2 0 0 / 5mR3的mdr1mRNA含量下降 ,P 170表达减低 ,LAK和CD3AK对KBv2 0 0 的杀伤活性较对KB的强 ,MDR逆转后杀伤活性降至敏感株水平 ,LAK和CD3AK对KB/ 5mR3、KB/vec、KBv2 0 0 /vec的杀伤活性也较KB及KBv2 0 0 / 5mR3强。结论 mdr1 ribozyme在细胞内具有一定的逆转肿瘤多药抗性的生物学效应 。
- 张健张积仁汪森明袁亚维林学颜
- 关键词：免疫活性细胞杀伤活性P糖蛋白
- 卵巢癌细胞株COC1/DDP多药耐药逆转对中性鞘糖脂表达的调控作用被引量：5
- 2001年
- 为探讨逆转卵巢癌细胞株的多药耐药性 (MDR)对细胞表面中性鞘糖脂 (N GSLs)表达的调控作用 ,以三苯氧胺 (TAM )和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,用MTT法分析了TAM、VRP的逆转效应 ,采用改良的Hakamori方法提取、纯化了耐药亚株COC1/DDPMDR逆转前后及亲本株COC1细胞的N GSLs,高效薄层层析(HPTLC)分析了N GSLs的表达。结果显示 ,COC1/DDP和COC1的N GSLs表达有显著差异 ,COC1/DDP的CMH表达较COC1强 ;经TAM、VRP作用后 ,COC1/DDP的耐药性发生逆转 ,CMH表达降低。说明卵巢癌的多药耐药性与中性鞘糖脂CMH相关 ,CMH可能为卵巢癌MDR相关鞘糖脂抗原。
- 李胜平王丽莉张积仁张健
- 关键词：多药抗药性神经酰胺类COC1/DDP
- CMH为KBv_(200)耐药相关中性鞘糖脂被引量：1
- 2001年
- 为了研究耐药细胞株KBv2 0 0 中性鞘糖脂表达的规律 ,采用改良的Hakomori法提取、纯化了KB及其耐药细胞株KBv2 0 0 的中性鞘糖脂 ,行高效薄层层析 ,分析其含量的异同 ;并以糖脂合成抑制剂PPMP抑制KBv2 0 0 中性鞘糖脂的合成 ,观察了其对KBv2 0 0 耐药性的逆转作用。结果发现 ,KBv2 0 0 的CMH和CDH表达较KB强 ,尤以CMH为著 ,PPMP能抑制KBv2 0 0 细胞CMH的合成 ,并能逆转KBv2 0 0 对长春新碱 (VCR)的耐药性。说明CMH为KBv2 0 0 耐药相关中性鞘糖脂 ,抑制耐药细胞CMH的合成可能是逆转肿瘤多药耐药的一种新方法。
- 张健汪森明赵燕张积仁
- 关键词：多药耐药性KBV200肿瘤
- KBv_(200)细胞株耐药逆转前后HLA、B7抗原的表达被引量：1
- 2000年
- 目的 探讨肿瘤多药抗性细胞的免疫逃避机制。方法 利用特异性切割mdr1的核酶为工具，以表达Mdr1的耐药细胞株KBv200为靶细胞，采用脂质体转染技术，将含核酶的质粒pHβApr-1neo/5mR3及空载体pHβApr-1neo导入KBv200及其亲本KB细胞内，运用Northern-blotting、免疫组化方法观察核酶对mdr1 mRNA及P-gp的影响，运用流式细胞仪技术检测各种不同细胞亚株HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ、B7-1、B7-2的表达。 结果 含核酶的质粒pHβApr-1neo/5mR3及空载体pHβApr-1neo可以在KB、KBv200细胞中稳定表达，核酶可以特异性地切割mdr1，导致KBv200/5mR3的mdr1 mRNA含量下降，P 糖蛋白（P-gp）表达减低，各种不同细胞亚株均表达较强的HLA-Ⅰ类抗原，而HLA-Ⅱ、B7-1、B7-2的表达较低。各亚株HLA-Ⅰ表达无明显差异，但HLA-Ⅱ、B7-1、B7-2的表达变化较大，KB的HLA-Ⅱ、B7-1、B7-2的表达较KBv200强，经化疗药物作用后KB的HLA-Ⅱ、B7-2进一步表达增强，核酶逆转后，KBv200/5mR3 HLA-Ⅱ、B7-1、B7-2的表达趋于接近KB水平。 结论 mdr1-核酶在细胞内具有一定的逆转肿瘤多药抗性的生物学效应；多药耐药细胞和敏感株细胞有着不同的免疫逃避特点，与敏感株相比，KBv200较易逃避机体的免疫反应。
- 张健张积仁袁亚维林学颜
- 关键词：多药耐药性HLA免疫逃避机制白血病
