山东省自然科学基金(ZR2010CL023)
- 作品数：6 被引量：23H指数：4
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- 水貂犬瘟热病毒受体——信号淋巴细胞激活因子的细胞定位及组织分布被引量：6
- 2014年
- 为探讨犬瘟热病毒受体——信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的细胞定位、在水貂组织中的分布及病毒感染对受体表达水平的影响,本研究采用间接免疫荧光法(IFA)进行了SLAM细胞定位。以IFA检测感染水貂肝、脾、肺、肾、脑组织的犬瘟热病毒抗原,以半定量PCR和间接免疫组化法(IHA)检测健康水貂及感染水貂SLAM在以上组织中的分布。结果表明,在Vero-SLAM细胞膜及细胞质内可见SLAM特异性荧光;感染水貂肝、脾、肺、肾、脑组织均可见大量犬瘟热病毒抗原阳性细胞,健康水貂及感染水貂肝、脾、肺、肾、脑组织SLAM PCR阳性,IHA检出数量不一的SLAM阳性着色细胞,且感染水貂相应组织的SLAM阳性着色细胞显著多于健康水貂(P<0.05);感染水貂的肾、脾、肺组织中犬瘟热病毒阳性细胞显著多于SLAM阳性着色细胞。说明SLAM受体表达于细胞膜和细胞质,在肝、脾、肺、肾、脑组织中均有分布;犬瘟热病毒感染引起SLAM受体表达的上调;在水貂体内除了SLAM受体,还有其它犬瘟热病毒受体存在。
- 黄娟王聪张洪亮单虎
- 关键词：犬瘟热病毒受体细胞定位
- 水貂犬瘟热流行病学调查被引量：5
- 2013年
- 为了调查山东省水貂犬瘟热的流行病学情况,对2010年8月-2012年8月期间由诸城、文登等地养貂场送诊的996份水貂病例进行了临床诊断和病原学检查。结果显示,共检出犬瘟热病毒阳性病料223份,阳性率为22.39%。其中,犬瘟热病毒与其他病原混合感染136例,占阳性病例的60.99%;阳性样本中未免疫病例116个;诸城检出阳性病例数最多,为147例;3月龄水貂发病率最高,占阳性病例的43.0%;水貂感染犬瘟热病毒主要症状为眼、鼻黏液性分泌物增多、脚垫增厚、呼吸困难;主要病理变化为肠、脑部出血。结果表明,犬瘟热依然是危害水貂养殖的重要疫病,且犬瘟热病毒易与其他病原混合感染;免疫接种能有效预防水貂犬瘟热,且宜在3月龄以前进行。
- 王聪邴啟政张荧黄娟单虎
- 关键词：水貂犬瘟热流行病学调查
- 犬瘟热病毒山东株的分离及N蛋白基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2012年
- 本试验采用Vero细胞从临床疑似患犬瘟热的犬组织病料中分离出一株病毒,通过观察细胞病变,提取细胞培养物RNA并扩增克隆分析N蛋白基因部分序列进行了鉴定。结果表明,该毒株接种于Vero细胞后,出现了典型的细胞病变;对接种病料后的Vero细胞培养物提取总RNA进行RT-PCR扩增,得到了287bp的目的片段;序列分析表明该分离株与犬瘟热病毒弱毒(Onderstepoort和Snyder Hill)的同源性为95.5%～96.9%,与标准强毒株(A75/17和2544/Han95)及野毒株(XJ-4、ZJ7、98-2646等)的同源性较高,为97.2%～99.0%,证明该毒株为犬瘟热病毒野毒株,命名为QD10。
- 孟培培张洪亮黄娟单虎
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白基因
- 犬瘟热病毒一步RT-PCR检测方法的建立被引量：5
- 2012年
- 根据犬瘟热病毒(CDV)弱毒株Onderstepoort的核蛋白(N)基因的相对保守区序列设计了1对特异性寡聚核苷酸引物,在国内首次建立了CDV一步RT-PCR检测方法。该法可以特异地扩增出N基因265 bp大小的目的片段,可以检测到0.043 6μg/mL的总RNA,与两步法RT-PCR的敏感性相当。对25例犬瘟热临床疑似病例样品,一步法RT-PCR检测出17份阳性,与两步法RT-PCR的阳性符合率达94.4%,胶体金检测试纸条检测出13份阳性。研究结果表明,建立的CDV一步法RT-PCR检测方便、敏感、特异,适用于CDV临床病料的检测和分子流行病学调查。
- 张洪亮孟培培宋晓明杨瑞梅秦晓冰丰艳妮黄娟单虎
- 关键词：犬瘟热病毒
- 鉴别犬瘟热病毒疫苗株和野毒株RT-PCR-RFLP方法的建立及应用被引量：3
- 2013年
- 根据Onderstepoort株H基因序列,设计1对引物建立RT-PCR-RFLP检测方法,对不同宿主来源的疑似犬瘟热临床样品进行检测,并对检出的犬瘟热病毒野毒山东株PCR产物进行克隆和序列分析,验证RT-PCR-RFLP检测方法。结果RT-PCR扩增片段为1 921bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被NdeⅠ酶切为1 282、345和294bp 3个片段,弱毒疫苗株则不能被切开;病毒RNA的最小检出量为2.15ng。临床检测共检出19份样品为犬瘟热阳性,其中15份为野毒株感染,其H基因编码区全长为1 824bp,均在1 279和1 543处有NdeⅠ酶切位点,推导氨基酸与野毒株的同源性在92.9%～96.9%,与疫苗株的同源性在89.0%～90.8%,进化树分析显示这些毒株在基因型上属于Asia-1型,为野毒株谱系。该方法的建立为临床上犬瘟热病毒的鉴别检测和诊断提供了依据。
- 张洪亮张传美王聪黄娟任颖超单虎
- 关键词：犬瘟热病毒
- 水貂犬瘟热病毒受体SLAM的原核表达被引量：6
- 2013年
- 为了获得犬瘟热病毒受体信号淋巴激活分子(SLAM)蛋白,本试验以pMD18-T-SLAM为模板,应用PCR方法扩增得到水貂SLAM基因,将SLAM基因连接到经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后的pGEX-6p-1原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-6p-1-SLAM,转化至大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果表明,目的基因插入位置和阅读框正确,经诱导成功表达出分子质量约为63.2ku的SLAM-GST融合蛋白,该融合蛋白能与鼠抗GST标签单克隆抗体发生特异性反应,具有良好的抗原性。
- 王聪张洪亮黄娟靳继惠王怡男单虎
- 关键词：犬瘟热病毒原核表达水貂
