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编码山羊补体C3d与口蹄疫病毒VP1融合蛋白重组质粒的构建及表达被引量：2: 2008年; 旨在构建含分子佐剂山羊补体C3d基因的O型口蹄疫病毒VP1基因真核表达质粒。克隆山羊C3d基因,通过linker(G_4S)_2将3拷贝C3d基因串联;克隆羊源O型口蹄疫病毒VP1基因,通过linker(G_4S)_2与3拷贝C3d基因相连,构建重组质粒pUC19-VP1-C3d_3。将VP1-C3d_3融合基因亚克隆入含有分泌表达信号肽tPA序列的pcDNA3.1(+)CMV启动子下游,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d_3。在脂质体介导下,将pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d_3转染HeLa细胞。间接免疫荧光分析表明,VP1-C3d_3在HeLa细胞中获得了瞬时表达,Western blot分析证实转染的阳性细胞能分泌预期大小(133 kD)的融合蛋白。重组质粒pcDNA3.1-tPA-VP1-C3d_3为研制以羊补体C3d为分子佐剂的口蹄疫新型疫苗奠定了基础。; 凌洁玉刘朝佟铁铸樊惠英张德坤陈焕春郭爱珍; 关键词：口蹄疫病毒VP1基因分子佐剂真核表达

湖北省部分猪场弓形虫感染的血清学调查被引量：13: 2007年; 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对湖北省部分猪场的弓形虫病进行血清学调查,共检测猪血清293头份。结果表明,阳性血清103头份,平均阳性率为35.2%,其中,母猪的感染率最高(53.8%),育肥猪次之(42.6%),仔猪最低(12.8%)。; 江涛何会时赵年彪韩有元赵俊龙; 关键词：感染率

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ-ELISA抗体检测试剂盒的研制与应用被引量：4: 2009年; 根据胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的特点,建立了一种能够诊断猪传染性胸膜肺炎和进行免疫后效果评估的血清学方法ApxⅡ-ELISA。本研究将该诊断方法进一步研制成试剂盒,对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进行了测试,与间接血凝试验试剂盒进行了对比研究,并用该试剂盒检测了来自中国、英国、丹麦、美国、加拿大和澳大利亚的临床猪血清1 453份。结果表明,ApxⅡ-ELISA试剂盒具有很高的特异性和敏感性;3批试剂盒的批内和批间的重复性良好(变异系数均<15%);试剂盒在2～8℃保存9个月,稳定性良好;ApxⅡ-ELISA试剂盒能够有效的诊断猪传染性胸膜肺炎,同时也可作为一种评价猪群免疫后免疫效果的有效方法。; 贾凡王建银胡军勇石碧李树清陈焕春周锐; 关键词：胸膜肺炎放线杆菌

几种不同免疫程序制备抗弓形虫高免血清的比较被引量：6: 2007年; 用弓形虫血清抗体阴性的健康家兔,以4种不同的免疫程序皮下接种弓形虫速殖子裂解抗原制备高免血清。研究结果表明,先以完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂分别进行一免和二免,然后再以抗原进行三免或四免制备高免血清,其抗体效价高达1∶4 096(IHA),与每次都使用抗原的传统免疫程序制备的抗体效价相当,但所用抗原剂量减半,该法优于另外2种免疫程序。; 江涛龚大春陈声国聂浩姚宝安赵俊龙; 关键词：刚地弓形虫免疫方法抗体

siRNA对乙型脑炎病毒复制的抑制效果被引量：1: 2009年; 以JEV的NS1基因mRNA为靶序列,设计合成了4个siRNA序列,构建了各自的表达质粒pS-NS1A、pS-NS1B、pS-NS1C和pS-NS1D。通过间接免疫荧光、Western blot检测、RT-PCR和病毒空斑检测等方法对这些siRNAs抑制JEV复制的效果进行了评价。结果表明4个siRNA表达质粒均对JEV在细胞中的复制具有不同程度的抑制作用,其中pS-NS1C、pS-NS1D有显著的抑制作用。说明针对NS1基因的siRNAs可以有效抑制JEV的复制,并有望成为应对JEV感染的治疗方法。; 刘学芹曹胜波李么明孙敏轩叶静周锐杨影徐高原陈焕春; 关键词：乙型脑炎病毒 NS1

弓形虫与附红细胞体人工混合感染猪的临床试验: 2007年; 为探讨弓形虫与附红细胞体混合感染猪的临床症状,将试验猪分为4组,分别皮下接种弓形虫RH株速殖子、附红细胞体、弓形虫+附红细胞体及生理盐水,观察其临床症状。结果表明,分别接种弓形虫和附红细胞体的试验猪出现发热、食欲减退、皮肤发红、便秘等临床症状;混合感染弓形虫和附红细胞体的试验猪上述症状加重。该试验为弓形虫和附红细胞体混合感染猪的临床诊断提供了一定的资料。; 江涛赵年彪陈声国赵俊龙; 关键词：刚地弓形虫附红细胞体临床症状

鸡传染性支气管炎病毒S1基因与猪IgG Fc基因在HeLa细胞中的融合表达: 2008年; 根据Genbank中发表的猪IgG Fc段基因及IBV S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41 S基因的质粒为模板扩增出IBV S1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5 kb,IgG Fc大小为1kb,序列正确。将IBV S1与IgG Fc基因串连,插入含有人组织型纤维蛋白溶酶原激活物分泌信号肽序列(tPA)真核表达载体pcDNA3.1-tPA上,在HeLa细胞上进行瞬时融合表达。经免疫荧光和斑点杂交检测,表达产物同时具有IBV S1蛋白和IgG Fc活性。; 张明富陈汉阳彭博佟铁俦陈焕春郭爱珍; 关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因真核表达

血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较被引量：1: 2007年; 应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较。结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4d)早于ELISA(第14d)和IHA(第20d);检出持续时间方面,LAT(54d)长于ELISA(44d)和IHA(19d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8)。试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测。; 江涛何会时龚大春陈声国聂浩姚宝安赵俊龙; 关键词：龚地弓形虫 LAT IHA

绿荧光蛋白基因在猪霍乱沙门氏菌C500株asd^-缺失株平衡致死载体系统中的表达被引量：9: 2007年; 猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱用于预防仔猪副伤寒病的弱毒疫苗株,毒力弱且免疫原性良好。为将猪霍乱沙门氏菌开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体并保持原有免疫原性,构建了以C500为亲本菌,用负向选择的重组自杀性质粒介导接合转移的方法构建了无抗性标记的asd-缺失株。首先构建asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因缺失1408bp的带有蔗糖敏感基因sacB的重组自杀性质粒,与C500接合转移,两步法筛选无抗性的asd-缺失株,通过PCR鉴定。该缺失株在无外源DAP(二氨基庚二酸)条件下溶菌死亡,它的生长必需外源DAP。PCR扩增绿荧光蛋白突变体4基因,克隆到带有asd基因的原核表达载体pYA3493中,电转化C500asd-缺失株,转化子在LB中生长,并激发强的绿荧光。上述结果表明,该asd-缺失株的构建是成功的,并且可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因,为开发C500为载体的口服多价疫苗奠定了基础。; 徐引弟郭爱珍刘维红贾爱卿陈焕春

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湖北省科技攻关计划(2006AA205A02)