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广东省科技计划工业攻关项目(20118031800259)
作品数:
1
被引量:10
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相关作者:
陈玉婷
张福萍
梁敏
宋祥晨
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相关机构:
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陈玉婷
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2013
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促凋亡蛋白Bim、Bax和Bak在牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡中的表达
被引量:10
2013年
目的建立牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡模型,检测成骨细胞凋亡过程中与Bc|-2蛋白相互作用的细胞死亡调解子(Bcl-2 interacting mediator,Bim)、Bcl-2蛋白相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)和Bcl-2蛋白拮抗剂(Bcl-2 antagonist/killer,Bak)的表达,探寻保护成骨细胞的方法,为牙周炎的发病机制研究提供依据。方法提取牙龈蛋白酶并测定其活性;将0.453、0.906、1.812U/L牙龈蛋白酶分别与成骨细胞共培养0、16、24和48h,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色及膜联蛋白V-碘化丙啶双染色检测牙龈蛋白酶诱导成骨细胞(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)凋亡,建立牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡模型;1.812U/L牙龈蛋白酶与成骨细胞共培养0、4、8、16、24和48h,蛋白质印迹法确定成骨细胞凋亡过程中Bim、Bax、Bak的蛋白表达;胰蛋白酶抑制剂抑制1.812U/L牙龈蛋白酶活性后与成骨细胞共培养24h,蛋白质印迹法检测Bim蛋白表达与成骨细胞凋亡率的改变。结果精氨酸-牙龈蛋白酶活性为(18.11±2.11)U/L,赖氨酸-牙龈蛋白酶活性为(1.02±0.25)U/L;DAPI染色显示1.812U/L牙龈蛋白酶可诱导成骨细胞凋亡,16h凋亡率为(6.31±0.37)%,24h达(11.20±0.35)%,48h为(10.80±0.46)%;膜联蛋白V-碘化丙啶染色结果与DAPI染色结果基本-致。成骨细胞凋亡过程伴随促凋亡蛋白Bim的表达升高,4h时Bim相对蛋白表达量为(0.31±0.03),约为对照组(0.17±0.03)的2倍,24h时Bim相对蛋白达峰值(0.57±0.05),为对照组的3~4倍;胰蛋白酶抑制剂可有效抑制牙龈蛋白酶活性,使Bim蛋白表达量由(0.58±0.04)降至(0.14±0.03);同时DAPI染色显示胰蛋白酶抑制剂可逆转牙龈蛋白酶诱导的细胞凋亡,24h成骨细胞凋亡率由(11.20±0.35)�
陈玉婷
宋祥晨
张福萍
梁敏
关键词:
细胞凋亡
胰蛋白酶抑制剂
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