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湖北省自然科学基金(2003ABA144)
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
相关作者:
曹勇
熊盛道
熊维宁
宋青凤
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曹勇
传媒
1篇
肿瘤防治研究
年份
1篇
2009
共
1
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HSV-TK与IL-2共表达真核载体的构建及其在A549细胞中的表达
被引量:2
2009年
目的构建含有自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和人类细胞因子白细胞介素-2(IL-2)的联合表达质粒载体并观察其在人类肺腺癌细胞系A549细胞中的表达。方法设计、合成多克隆位点(MCS)插入到质粒TPNAV中,然后分别从其他不同的质粒剪切片段HSV-TK、内部核糖体进入位点(IRES)、IL-2并依次接入到MCS中,最终得到目的质粒TPNAV-TK-IRES-IL2(pMTⅡ)。目的质粒经酶切、DNA测序鉴定正确后,转染到A549细胞中。用RT-PCR方法、ELISA法检测转染后细胞目的基因的转录和表达;进一步倒置显微镜观察、MTT法检测更昔洛(GCV)对转然后细胞的杀伤作用。结果经酶切、DNA测序、RT-PCR法和ELISA法鉴定,双基因真核表达载体pMTⅡ序列正确并能有效表达。进一步倒置显微镜观察和MTT法检测表明HSV-TK/GCV自杀基因系统对A549细胞有明显的杀伤作用。结论成功构建了pMTⅡ真核表达载体,并观察了其对A549细胞的杀伤效应,为进一步研究HSV-TK/GCV联合IL-2基因治疗肺癌提供实验基础。
宋青凤
方慧娟
熊维宁
徐永健
熊盛道
曹勇
关键词:
肺癌
基因治疗
IL-2
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