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马铃薯Y病毒HC-Pro、CI、NIb和CP基因介导的病毒抗性比较研究被引量：7: 2010年; 根据已克隆的马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的基因组序列设计引物,利用PCR扩增HC-Pro、CI、NIb和CP4个基因的3′端400bpcDNA区段,分别反向插入含有査尔酮合成酶基因(Chalcone synthase,CHS)内含子的双元载体pRCHS中,构建了含内含子的发夹结构RNA(intron splicing hpRNA,ihpRNA)表达载体pRCHS-HC-Pro、pRCHS-CI、pRCHS-NIb和pRCHS-CP。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC89,获得了多种转基因植株。病毒抗性检测的结果显示:转pRCHS-HC-Pro、pRCHS-CI、pRCHS-NIb和pRCHS-CP的烟草中,抗性植株的比例分别为55.34%、73.69%、61.54%和84.21%。大分子RNA和siRNA的Northern blot分析表明,目的片段转录产物的积累量与转基因植株的抗病性呈负相关,转基因植株中可检测到siRNA,说明所获得的抗病性是RNA沉默介导的。; 刘静陈雪梅宋云枝吴斌朱常香温孚江; 关键词：马铃薯Y病毒

烟草蚀纹病毒山东分离物全基因组序列的克隆和保守性分析被引量：4: 2011年; 为利用RNA介导的病毒抗性策略,培育抗性稳定或抗多烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV)株系的转基因植株,采用RT-PCR及5'-RACE方法克隆了烟草蚀纹病毒山东分离物TEV-SD1的全基因组序列。TEV-SD1全基因组核苷酸序列长度为9494 bp,包含1个9165 bp的开放阅读框架(open reading frame,ORF),编码3054个氨基酸。将TEV-SD1基因组序列与GenBank中已公布的4个TEV全基因组序列和11个外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列比对分析发现,各分离物CP基因间的核苷酸和氨基酸序列平均相似性分别为96.65%和98.31%,高于其它功能基因间的相似性;各分离物CP基因3'端核苷酸序列相似性平均为96.55%,高于5'端序列。聚类分析发现TEV在自然界中的分子变异与其寄主关系密切。; 张林韩全军袁彤彤宋云枝朱常香温孚江; 关键词：烟草蚀纹病毒基因克隆外壳蛋白 RNA干扰

马铃薯Y病毒复制酶基因不同位置cDNA区段介导对PVY的不同抗性被引量：7: 2010年; 为探究靶序列位置对RNA介导的病毒抗性产生的影响，利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术扩增马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）复制酶基因（nuclear inclusion b，NIb）不同位置的cDNA区段，反向插入双元载体pROKII中，构建了发夹RNA（hairpin RNA，hpR—NA）结构的植物表达载体。将构建的植物表达载体采用冻融法转入农杆菌LBA4404，叶盘法转化烟草NC89，获得转基因植株。攻毒试验表明：PVYNIb基因不同位置cDNA区段介导的对PVY的抗性存在显著差异；3’端1／2处和中间位置的序列可介导高水平的病毒抗性，抗性植株的比例在50％以上，而5‘端、5’端1／2处和3’端的序列介导的抗性效率较低，抗性植株的比例仅为10％～30％。Northern杂交显示：抗病植株中RNA的积累量明显低于同类型的感病植株，抗性与RNA积累量呈负相关；抗病转基因植株中有siRNA存在，表明病毒抗性是由RNA介导的。; 徐丽宋云枝王文俊朱常香温孚江; 关键词：马铃薯Y病毒复制酶基因

原核表达dsRNAs抗PVY、TMV、CMV研究: 烟草病毒病是全世界烟草栽培区发生普遍、为害严重的一大类病害,其中分布广、为害严重的有马铃薯Y病毒(Potato virusY.PVY)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)和CMV (Cucu...; 孙兆楠宋云枝袁彤彤朱常香温孚江; 关键词：RNA沉默原核表达 DSRNA

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