广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(0816004-14)
- 作品数：14 被引量：43H指数：5
- 相关作者：刘剑仑杨华伟蒋奕韦薇李景涛更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属肿瘤医院广西医科大学北京煤炭总医院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科学研究与技术开发计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 赖氨酰氧化酶与乳腺癌侵袭转移相关因子的研究被引量：3
- 2013年
- 目的探讨赖氨酰氧化酶(LOX)与乳腺癌侵袭转移相关因子基质金属蛋白酶(MMPs)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的相关性以及LOX在乳腺癌侵袭转移中的可能机制。方法构建LOX基因的特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌细胞MDA-MB-231,实验设空白组、干扰组和阴性对照组,实时定量荧光PCR检测3组细胞中LOX、MMP-2、MMP-9和HIF-1α的表达,Western blot检测各组LOX蛋白的表达;构建乳腺癌细胞MDA-MB-231,MCF-7和LOX基因干扰的MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型,6周后测定移植肿瘤的生长及转移情况,SP免疫组织化学技术检测移植瘤中LOX、MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白的表达情况。结果转染LOX-RNAi-LV后乳腺癌细胞MDA-MB-231中的LOX mRNA和蛋白被明显抑制,抑制率为89.20%和82.97%,差异有统计学意义(P<0.05);干扰组的MMP-2、MMP-9及HIF-1α表达与阴性对照组及空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);6周后裸鼠的MDA-MB-231组LOX、MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白表达水平明显高于LOX基因干扰组及MCF-7组,相关分析显示,LOX蛋白与MMP-2(r=0.696,P=0.000)、MMP-9(r=0.735,P=0.000)、HIF-1α(r=0.737,P=0.000)蛋白呈显著正相关。结论 LOX-RNAi-LV可有效下调乳腺癌细胞MDA-MB-231中LOX mRNA和蛋白表达水平;LOX促进乳腺癌侵袭转移的机制可能与MMP-2、MMP-9及HIF-1α的异常表达相关。
- 杨华伟刘剑仑李景涛刘起鹏韦薇唐玮蒋奕
- 关键词：乳腺肿瘤赖氨酰氧化酶基质金属蛋白酶低氧诱导因子-1Α
- siRNA干扰LOX基因对乳腺癌细胞株侵袭性影响的研究被引量：7
- 2010年
- 目的检测赖氨酰氧化酶(LOX)基因在低侵袭性乳腺癌细胞MCF-7和高侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达差异,并探讨LOX基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法 RT-PCR扩增MCF-7和MDA-MB-231LOX基因,采用SYBR G reen I实时荧光定量RT-RCR技术相对定量两种细胞的LOX基因表达。瞬转MDA-MB-231,并于转染后24、48、72 h行体外运动试验侵袭实验,观察干扰LOX基因表达后对MDA-MB-231侵袭的影响。结果 MDA-MB-231较MCF-7高表达LOX基因(P<0.05)。MDA-MB-231细胞中LOX mRNA在转染48 h表达下降明显。干扰LOX表达后,体外运动实验结果显示RNA i组中MDA-MB-231细胞穿过微孔滤膜到达下室面的细胞数少于未转染组和阴性对照组(P均<0.05)。结论 MDA-MB-231细胞高表达LOX基因,干扰其LOX基因表达后细胞的侵袭运动能力明显减弱。
- 杨华伟彭浩刘剑仑耿莹蒋奕韦薇
- 关键词：转染
- 核糖体S6蛋白激酶4在乳腺癌中的异常表达及临床意义被引量：8
- 2011年
- 目的研究核糖体s6蛋白激酶4（RSK-4）在乳腺癌中的表达及意义，探讨RSK-4在乳腺癌发生发展中的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及免疫组织化学染色法，检测RSK-4mRNA和蛋白在56例乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织和20例乳腺良性病变组织中的表达。结果RSK-4mRNA在乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织和乳腺良性病变组织中的阳性表达率分别为48．2％、76．8％和75．0％，RSK-4mRNA在乳腺癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁正常乳腺组织和乳腺良性病变组织（P〈0．05）。RSK-4mRNA在乳腺癌组织中的表达与肿瘤大小和临床分期有关，肿瘤越大、临床分期越晚，RSK-4mRNA的表达率越低（P〈0．05）。RSK-4蛋白在乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织和乳腺良性病变组织中的阳性表达率分别为39．3％、71．4％和75．0％，RSK-4蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁正常乳腺组织和乳腺良性病变组织（P〈0．05）。RSK-4蛋白在乳腺癌组织中的表达与肿瘤大小、临床分期以及有无淋巴结转移有关，肿瘤越大、临床分期越晚以及伴淋巴结转移者RSK-4蛋白的表达率低（P〈0．05）。56例乳腺癌组织中，RSK-4mRNA和蛋白的表达一致率为73．2％，二者的表达显著相关（χ^2=10．254，P〈0．05）。结论RSK-4可能足乳腺癌的抑癌基因，其表达降低或缺失可能引起乳腺癌的发生和发展。
- 刘剑仑杨华伟陈祖舜蒋奕
- 关键词：乳腺肿瘤逆转录聚合酶链反应免疫组织化学
- 干扰赖氨酰氧化酶基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)基因表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖的影响及其机制。方法将乳腺癌MDA-MB-231细胞分为实验组(RNAi组)、阴性对照组(Mock组)和空白对照组(Con组);设计合成特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染MDA-MB-231细胞。以荧光定量PCR检测LOX mRNA及增殖因子Ki-67、cyclinD1的表达;Western blot法检测LOX基因蛋白的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞集落形成实验观察各组细胞生长及增殖情况。结果转染LOX-RNAi-LV后,MDA-MB-231细胞中LOXmRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞生长、增殖能力明显减弱,细胞集落形成率明显降低,相关增殖因子Ki-67和cyclin D1 mRNA的表达均明显下降(P<0.05)。结论转染LOX-RNAi-LV可有效干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞中LOX mRNA和蛋白的表达,抑制肿瘤细胞的生长、增殖,其作用机制可能与下调Ki-67、cyclinD1的表达有关。
- 李景涛刘剑仑韦薇杨华伟蒋奕唐玮
- 关键词：乳腺肿瘤赖氨酰氧化酶RNA干扰增殖因子
- 赖氨酰氧化酶在乳腺癌侵袭转移中的作用机制被引量：6
- 2012年
- 目的探讨赖氨酰氧化酶（LOX）基因特异性RNA干扰对乳腺癌细胞侵袭转移的影响及机制。方法构建LOX基因特异性的慢病毒干扰载体（LOX-RNAi-LV），转染至乳腺癌细胞MDA—MB-231，实时定量荧光PCR检测MDA-MB-231细胞中LOX及转移相关因子基质金属蛋白酶（MMP）2、9的表达，Western印迹检测LOX蛋白的表达，细胞侵袭试验（Transwell小室）检测转染前后细胞侵袭迁移能力变化。免疫组织化学法检测111例乳腺癌组织、癌旁乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOX的表达，并对其与临床病理资料及MMP-2、MMP-9的相关性进行分析。结果转染LOX—RNAi-LV后乳腺癌细胞MDA—MB-231中的LOXmRNA和蛋白被明显抑制，抑制率分别为89．2％±1．3％和8414％±0．4％；干扰组细胞MMP-2、MMP-9mRNA相对表达量分别为0．496±0．021和0．571±0．099，均明显低于阴性对照组（0．846±0．047，0．786-4-0．042）和空白对照组（1．000±0．000，1．000±0．000）（均P〈0．05）；Transwell侵袭和迁移实验中，干扰组穿过Transwell小室滤过膜细胞数分别为47±2和63±2，均明显少于阴性对照组（100±1，118±2）和空白对照组（100±1，118±2）（均P=0．000）：LOX蛋白在人乳腺癌、癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织中的表达率分别为48．6％（54／111）、26．1％（29／111）、20．0％（4／20），乳腺癌组织中LOX蛋白的表达率明显高于癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织（P=0．019）。LOX蛋白在不同肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移的表达率差异有统计学意义。相关分析显示，LOX蛋白表达与MMP-2（r=0．262，P=0．005）、MMP-9（r=0．424，P=0．000）蛋白之间呈显著正相关。结论LOX可以促进乳腺癌的侵袭转移；LOX和MMP-2、MMP-9转移因子可能具有协同促进作用，促进了乳腺癌的侵袭转移。
- 刘剑仑韦薇唐玮蒋奕杨华伟李景涛
- 关键词：乳腺肿瘤RNA干扰肿瘤侵袭肿瘤转移
- 干扰赖氨酰氧化酶基因对乳癌 MDA-MB-231细胞生物学的影响
- 2013年
- 目的观察抑制赖氨酰氧化酶（LOX）基因表达后对MDA-MB-231细胞的生物学特性的影响。方法将细胞分为实验组、空白对照组和阴性对照组，采用病毒转染法，应用噻唑蓝（MTT）法、细胞集落形成实验、流式细胞仪和细胞侵袭迁移实验检测结果。结果24、48、72、96h3 组细胞抑制率分别是（12. 73 ±3. 30）% .（33.93 ± 1. 99）% ,（52. 63 ± 1.04）% ,（63. 80 ±0. 70）%;0、0、0、0;（7. 60 ±6. 27）%、（ 10. 30 ± 1. 49）%、（9.10 ±2. 69）%、（6. 03 ± 1. 21）%，差异有统计学意义（P 〈0.05）。细胞周期时相差异无统计学意义（P〉0.05）。细胞侵袭实验结果分别为47±2、100±1、88±2,差异有统计学意义（P〈0.05）;细胞迁移实验结果分别为63 ±2,118 ±2,96 ±2，差异有统计学意义（P〈0. 05） 0结论干扰LOX基因的表达可抑制MDA-MB-231细胞的生物学特性。
- 李德全李景涛刘剑仑杨华伟
- 关键词：乳癌RNA干扰生物学特性
- 赖氨酰氧化酶在乳腺癌中的表达及临床意义
- 2011年
- 目的研究赖氨酰氧化酶(LOX)在乳腺癌组织、正常乳腺组织及乳腺良性病变组织中的表达,并与乳腺癌常规预后指标比较,探讨其与乳腺癌侵袭/转移的关系。方法逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测56例乳腺癌组织、56例正常乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOX mRNA与低氧诱导因子1(HIF-1α)mRNA的表达;应用免疫组织化学技术检测相应组织中LOX蛋白及HIF-1α的表达,并行统计学分析。结果 LOX mRNA在乳腺癌组织、正常乳腺组织及乳腺良性病变组织中的表达率分别为57.14%、32.14%、25.00%,乳腺癌组织中LOXmRNA的表达率明显高于正常乳腺组织及乳腺良性病变组织(P<0.01);LOX蛋白在乳腺癌组织、正常乳腺组织及乳腺良性病变组织中的表达率分别为48.21%、26.78%、20.00%,乳腺癌组织中LOX蛋白的表达率明显高于正常乳腺组织及乳腺良性病变组织(P<0.05);LOX mRNA及LOX蛋白在不同临床分期及淋巴结转移中的表达率差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌LOX mRNA及LOX蛋白的表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P均<0.01),但在不同年龄及肿瘤大小患者的癌组织中LOX mRNA及LOX蛋白的表达率差异无统计学意义(P>0.05);LOX蛋白的表达与HIF-1α呈正相关(r=0.368)。结论 LOX蛋白及LOX mRNA在乳腺癌组织中的表达率高于正常乳腺组织及乳腺良性病变组织,LOX与乳腺癌的发生可能有关;LOX高表达的乳腺癌其恶性程度更高,更易发生远处转移;HIF-1α与LOX在乳腺癌的侵袭/转移过程中具有协同作用。
- 杨华伟刘剑仑蒋奕唐玮韦薇黄真
- 关键词：乳腺肿瘤赖氨酰氧化酶免疫组织化学
- 慢病毒载体介导RNA干扰对乳腺癌MDA-MB-231细胞LOX基因表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:观察慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染对乳腺癌高侵袭转移潜能MDA-MB-231细胞LOX基因表达的影响。方法:设计合成特异性的LOX RNA干扰慢病毒载体,稳定转染至MDA-MB-231细胞中,实时定量PCR、Western blot检测LOX mRNA和蛋白的表达情况。结果:稳定转染慢病毒RNAi后,60h后有GFP荧光表达,72h后表达明显增强,转染率达90%;LOX mRNA和蛋白的表达被显著抑制,抑制率分别为89.2%和83%。结论:稳定转染慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)可有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231中LOX mRNA和蛋白表达。
- 李景涛刘剑仑韦薇杨华伟
- 关键词：乳腺癌赖氨酰氧化酶RNA干扰
- 赖氨酰氧化酶体内外对乳腺癌增殖和侵袭作用的研究被引量：3
- 2013年
- 目的探讨赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)对人乳腺癌细胞的生长增殖、侵袭及转移能力的影响及可能作用的机制。方法构建LOX基因的特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌细胞MDA-MB-231,实验设3个组,即空白组(Con)、干扰组(RNAi)、阴性对照组(Mock),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞集落形成实验及流式细胞仪观察细胞生长及增殖情况,细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭及迁徙能力改变;免疫组织化学法检测111例人乳腺癌组织、癌旁乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOX、基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)的表达,并对LOX与临床病理资料及MMP-2、MMP-9的相关性进行分析。结果转染72h后,MTT法显示干扰组细胞生长明显受抑制;细胞集落形成实验显示干扰组的细胞集落形成率明显低于空白组和对照组;Transwell侵袭和迁移实验结果显示RNAi组穿过Transwell小室滤过膜细胞数分别为47±2和63±2,差异有统计学意义(P=0.000);流式细胞仪测定细胞周期,3组之间差异无统计学意义。LOX蛋白在人乳腺癌、癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织中的表达率分别为48.64%(54/111)、26.13%(29/111)、20.00%(4/20),乳腺癌组织中LOX蛋白的表达率明显高于癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织(P=0.019)。LOX蛋白在不同肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移的表达率存在显著差异。相关分析显示,LOX蛋白表达与MMP-2(r=0.262,P=0.005)、MMP-9(r=0.424,P=0.000)蛋白之间呈显著正相关。结论 LOX可以促进乳腺癌的侵袭转移;LOX和MMP-2、MMP-9转移因子可能具有协同促进作用,促进了乳腺癌的侵袭转移。
- 杨华伟刘剑仑李景涛韦薇唐玮蒋奕
- 关键词：乳腺肿瘤赖氨酰氧化酶
- 乳腺癌组织LOX和HIF-1表达及其临床意义的探讨被引量：7
- 2011年
- 目的:探讨赖氨酰化酶(LOX)在乳腺癌组织、正常乳腺组织和乳腺良性病变组织中的表达,并与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移与否、临床分期及HIF-1进行比较,探讨其与乳腺癌侵袭/转移的关系。方法:应用免疫组织化学技术检测56例乳腺癌组织、56例正常乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOX和HIF-1的表达情况,并应用相关统计学方法进行分析。结果:LOX蛋白在乳腺癌组织、正常乳腺组织和良性病变组织中的表达率分别为48.21%(27/56)、26.78%(15/56)和20.00%(4/20),乳腺癌与正常乳腺组织(P=0.019)、乳腺癌与乳腺良性病变组织(P=0.028)之间的LOX蛋白表达率差异有统计学意义,而正常乳腺组织与良性病变组织之间的LOX蛋白表达率差异无统计学意义,P=0.519;LOX蛋白在不同临床分期(P=0.005)和淋巴结转移(P=0.042)中的表达率差异有统计学意义,但在不同年龄和肿瘤大小患者的癌组织中LOX蛋白的表达率差异无统计学意义,P值分别为0.182和0.058。LOX蛋白与HIF-1α蛋白之间呈正相关,r=0.368,P=0.005。结论:LOX蛋白在乳腺癌组织中高表达。乳腺癌临床分期越晚,肿瘤组织中LOX蛋白的表达率越高。伴淋巴结转移乳腺癌LOX蛋白表达率高于无淋巴结转移者。LOX蛋白表达率与肿瘤大小、患者年龄无关。LOX蛋白与HIF-1α蛋白之间呈正相关。
- 蒋奕杨华伟唐玮刘剑仑
- 关键词：乳腺肿瘤赖氨酰氧化酶低氧诱导因子-1免疫组织化学
