黑龙江省自然科学基金(D0249)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
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- 杆状病毒介导的哺乳动物细胞基因转移及其影响因素被引量：1
- 2009年
- 杆状病毒作为优良的哺乳动物细胞基因转移载体已在基因治疗、疫苗开发、药物筛选以及基因调控研究等方面发挥巨大作用。但杆状病毒对哺乳动物细胞的嗜性不够广泛、转导效率和转基因表达水平偏低,以及表达持续时间短暂等问题制约其进一步发展,因此如何突破这个制约的瓶颈成为学者们新的关注焦点。针对以上问题,围绕杆状病毒介导哺乳动物细胞基因转移的各种影响因素进行综述。
- 李梅王昆葛菁萍高冬妮楼庄伟平文祥
- 关键词：基因转移哺乳动物细胞
- 杆状病毒——高效蛋白表达载体被引量：4
- 2009年
- 杆状病毒（Baculovirus）是昆虫专一性的病原病毒，是目前为止发现最早、研究最多且实用意义很大的昆虫病毒。杆状病毒表达载体系统 （Baculovirus expression vector ,ystem, BEVS）是一个以杆状病毒为外源基因载体，昆虫和昆虫细胞为受体的表达系统。与其他表达系统相比，它具有能容纳较大的外源基因插入；可同时表达多个基因；表达水平高；表达产物可进行包括糖基化、磷酸化、酰基化、信号肽切除及肽段的切割和分解等在内的翻译后加工修饰；
- 葛菁萍高冬妮陈娜楼庄伟平文祥
- 关键词：表达载体系统杆状病毒EXPRESSION昆虫病毒VECTOR基因载体
- 腺病毒反向重复序列ITRs的人工合成与克隆
- 2009年
- 为获得高GC含量(72%)的腺伴随病毒AAV反向末端重复序列ITRs(178 bp),以自行设计的4段寡核苷酸引物(约59 bp)为模板,采用融合PCR方法将其人工合成。回收目的片段后,通过TA克隆、PCR和酶切鉴定获得8个阳性转化子。经测序鉴定,得到了5个序列完全正确的克隆。本实验为研究含有ITRs的重组杆状病毒介导外源基因在哺乳动物细胞中表达持续时间的影响奠定了基础。
- 王昆葛菁萍李梅隋栋高冬妮楼庄伟平文祥
- 关键词：PCR基因合成
- 以杆状病毒为载体在鸡原代骨骼肌细胞中表达IBDV VP2基因被引量：1
- 2009年
- 【目的】本研究旨在构建在鸡原代骨骼肌细胞中表达IBDV病毒VP2基因的重组杆状病毒。【方法】从IBDV适应细胞毒中提取RNA,用RT-PCR技术扩增VP2基因,将其克隆到自主构建的杆状病毒转移载体的CMV启动子之下,通过Bac-to-Bac系统获得VP2重组Bacmid,并将其转染Sf9昆虫细胞,获得了VP2重组杆状病毒。重组病毒经扩增后以50个MOI感染鸡原代骨骼肌细胞,接种72h后裂解细胞收获蛋白。【结果】蛋白样品经SDS-PAGE和Western blot证实VP2蛋白获得表达,分子量约48kDa,与预测蛋白大小一致,且能被IBDV阳性血清所识别。【结论】重组杆状病毒可以有效地将VP2基因导入鸡原代细胞,并在CMV的启动下表达具有抗原性的VP2蛋白,本研究为研制IBDV及其他重要禽类传染病的杆状病毒载体疫苗奠定了基础。
- 葛菁萍高冬妮楼庄伟平文祥
- 关键词：IBDVVP2基因杆状病毒
