江苏省自然科学基金(BK2010279)
- 作品数：21 被引量：55H指数：4
- 相关作者：邵义祥吴刘成刘春王生存郑良凤更多>>
- 相关机构：南通大学南通大学附属海安医院南通出入境检验检疫局更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 小鼠上皮细胞培养及其在EOB研究中的应用
- 2012年
- 小鼠眼睑发育需要表皮角质形成细胞的增殖、分化、凋亡及迁移的协调作用。表皮角质形成细胞是研究眼睑闭合不全机制重要的细胞模型。表皮角质形成细胞培养时,贴壁差,增殖力低,生活力弱,生长条件要求高,传代次数有限。对近年来表皮角质形成细胞的体外培养方法及其在遗传性眼睑闭合不全研究中的应用进行综述,以期为表皮角质形成细胞的长期培养和研究人类先天性眼睑发育缺陷机制提供参考。
- 卢泽艳邵义祥
- 关键词：皮肤角质形成细胞体外培养眼睑闭合不全
- 应用16S rDNA克隆文库法分析B6-Co小鼠角膜炎细菌组成被引量：1
- 2014年
- 目的鉴定B6-Co突变系小鼠角膜的病原菌组成,并与人类细菌性角膜炎病原菌组成进行比较分析。方法选取10 d龄B6小鼠和B6-Co小鼠各6只为实验动物,提取小鼠角膜组织刮取物细菌基因组DNA,通过PCR扩增构建16S rDNA克隆文库,采用随机测序法分析B6-Co小鼠角膜细菌组成,B6小鼠作为对照。结果 B6-Co角膜混浊小鼠中共鉴定出20种细菌,隶属于15个属,包括葡萄球菌属、假单胞菌属、链球菌属、微球菌属、棒状杆菌属等。葡萄球菌属和假单胞菌属为优势群,葡萄球菌属丰度为19.7%~53.1%,假单胞菌属的丰度为17.4%~32.8%。其中葡萄球菌属主要是表皮葡萄球菌,丰度为13.8%~20.9%;缓慢葡萄球菌,丰度为14.0%~30.9%;金黄色葡萄球菌,丰度为7.4%~20.3%。此外,棒状杆菌和微球菌也比较常见。10 d龄B6小鼠未检测出细菌。结论 B6-Co突变系小鼠角膜细菌组成与人类角膜炎病原菌相似,是研究人类角膜炎诊断方法、发病机理及临床用药的很好的动物模型。
- 宋鸿雁仇保丰刘春朱顺星缪进王生存吴刘成王旭邵义祥
- 关键词：细菌性角膜炎
- B6-Co小鼠眼睑体外培养的形态学研究被引量：1
- 2011年
- 目的:通过体外组织培养,研究小鼠眼睑体外生长发育情况。方法:剖宫产取18.5dpc胎鼠,分别切取正常彼此融合的上下眼睑及开裂的眼睑,在琼脂小岛上做组织培养,动态观察眼睑外形变化,并作HE染色观察。结果:18.5dpc胎鼠正常眼睑经过14d的培养未发生分离,睑裂沟处的组织松散,细胞凋亡呈无序性;开裂眼睑上皮细胞增殖受阻,周皮与间质部位发生分离。结论:琼脂小岛法体外培养小鼠眼睑,其组织结构及细胞增殖与迁移都不能完全重现体内情况,可能还需要添加多种生长因子。
- 缪进王生存刘春邵义祥
- 关键词：眼睑多种生长因子小鼠
- B6-Co与B6小鼠眼睑胚胎发育的形态观察被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)胚胎期眼睑发育形态学差异。方法:将B6-Co小鼠与B6小鼠对照,取胚胎期16.5天(E16.5)的胚胎,切取整个头部固定、脱水,冷冻切片。采用HE染色观察胚胎期眼睑闭合状况;FITC-鬼笔环肽染色眼睑部位的细胞骨架;Hoechst染色眼睑部位细胞核。结果:B6小鼠在E16.5天眼睑完成闭合,而B6-Co小鼠眼睑不能闭合,眼睑细胞骨架异常,无微丝束形成,不利于细胞迁移。结论:B6-Co小鼠由于眼睑边缘部位细胞迁移障碍引起的眼睑发育缺陷,造成出生时眼睑开放。
- 王旭吴刘成刘春郑良凤邵义祥
- 关键词：角膜混浊细胞骨架免疫荧光染色法
- 延续护理干预对食管癌放疗患者自我照护水平及预防放射性皮炎发生的效果分析被引量：21
- 2018年
- 目的探讨食管癌放疗患者实施延续护理的应用效果。方法纳入2017年6月-2018年5月南通大学附属海安医院收治的120例行放疗的食管癌患者为本次研究对象,按照入院先后顺序将其分为实验组与对照组各60例,对照组行常规护理干预,实验组在对照组的基础上行延续护理干预,观察两组患者护理前后自我照护水平、生活质量及护理后放射性皮炎发生情况。结果护理前两组患者自我护理技能、自我概念、自护责任感、健康知识水平及情绪功能、躯体功能、认知功能、社会功能、角色功能评分比较均无统计学意义(P> 0. 05);护理后,实验组自我照护水平(自我护理技能、自我概念、自护责任感、健康知识水平)及生活质量(情绪功能、躯体功能、认知功能、社会功能、角色功能)评分均显著高于对照组(P <0. 05);实验组Ⅰ级放射性皮炎出现率显著高于对照组,而Ⅱ级、Ⅲ级放射性皮炎出现率显著低于对照组(P <0. 05)。结论对食管癌放疗患者出院后实施延续护理干预,可有效提高患者自我照护水平及生活质量,减轻放射性皮炎发生程度,值得推广实施。
- 邵春燕
- 关键词：延续护理干预食管癌放疗放射性皮炎
- C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养与纯化鉴定被引量：2
- 2015年
- 为了建立一种易于操作,能够获得高纯度、高活力C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养体系,并对分离提取的细胞进行纯化鉴定,试验在无菌环境下取E12.5胎鼠皮肤,剪碎至1 mm2大小,均匀铺于皿中,用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基连续培养4 d,以胰蛋白酶消化-再贴壁法分离纯化目的细胞,分别以NIH3T3、角质形成性细胞作为阳性与阴性对照,采用免疫荧光、Western-blot检测Vimentin及Keratin的表达情况,以鉴定所分离的细胞及其纯度。结果表明:组织块培养24 h即可见成纤维样细胞爬出,培养96 h细胞生长爬满全皿,经胰酶消化、筛网过滤再贴壁接种后能够获得形态均一、活力旺盛、具有成纤维细胞形态学特征的目的细胞;所分离细胞Vimentin表达阳性率为100%,而Keratin表达阳性率为0;与阴性对照角质形成性细胞相比,C57BL/6分离成纤维细胞和NIH3T3细胞均高表达Vimentin,且差异极显著,有统计学意义。说明以E12.5胎鼠皮肤为材料建立成纤维细胞分离培养体系,所分离培养的成纤维细胞具有更高的细胞活力和细胞纯度。
- 王胜洁景瑾杨万路吴刘成邵义祥
- 关键词：胚胎成纤维细胞纯化鉴定
- B6-Co小鼠感染角膜中TLR4/9的表达及意义
- 2019年
- 目的:研究TLR4和TLR9在B6-Co小鼠感染角膜中的表达水平及意义。方法:采用Trizol法提取小鼠角膜RNA,实时荧光PCR检测目的基因mRNA表达水平;取小鼠眼球作冰冻切片,进行TLR4/9免疫荧光染色。结果:B6-Co小鼠角膜组织中TLR4/9 mRNA的表达在不同周龄阶段均高于B6小鼠,随着小鼠周龄的增加呈上升趋势,第4周和第8周TLR4表达、第8周和第16周TLR9表达与B6小鼠的差异,均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光显示B6-Co小鼠角膜上皮层中TLR4/9蛋白表达高于B6小鼠,在第8周荧光信号最强。结论:TLR4/9在B6-Co小鼠感染角膜中的表达上调,提示TLR4/9在角膜感染免疫应答中发挥作用。
- 郑良凤彭晓清王旭蒋荧梅吴刘成
- 关键词：角膜感染实时荧光PCR免疫荧光染色
- TGF-α在B6-Co小鼠胚胎发育后期眼睑中表达变化被引量：4
- 2012年
- 目的检测转化生长因子α(TGF-α)在遗传性角膜混浊(B6-Co)小鼠胚胎发育后期眼睑中的表达变化。方法雄性B6-Co和B6小鼠分别与雌性B6小鼠以1∶2比例配对,各10笼。体视显微镜下取不同胚胎期小鼠眼睑组织,采用实时定量PCR法和免疫组化法分别检测眼睑组织中TGF-αmRNA和蛋白表达。结果随着发育时间的推移,B6-Co小鼠上、下眼睑不能融合,角膜完全暴露;TGF-αmRNA表达低于B6小鼠(P<0.05),而TGF-α蛋白表达与B6小鼠比较差异无统计学意义。结论 TGF-α表达可能是导致B6-Co小鼠胚胎期眼睑发育缺陷的主要原因之一。
- 缪进王生存刘春邵义祥
- 关键词：转化生长因子Α
- 不同胚期B6-Co小鼠眼睑组织中血清反应因子的表达变化
- 2015年
- 背景 C57BL/6角膜混浊表型的突变系（B6-Co）小鼠具有出生眼睑闭合不全（EOB）表型,是研究眼睑发育机制的良好动物模型.探讨血清反应因子（SRF）与B6-Co小鼠EOB表型形成的关系可为人类先天性眼睑发育缺陷产生机制的研究提供理论依据.目的 检测SRF在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达.方法 采用肌内注射戊巴比妥钠安乐死术,分别剖取B6-Co母鼠以及表型正常B6母鼠体内胚胎期（E）16.5 d、E17.5 d和E18.5 d小鼠各9只,分离眼睑组织,分别采用实时定量PCR法和Western blot法检测小鼠眼睑组织中SRF mRNA及其蛋白的相对表达水平.取各胎龄的B6-Co小鼠和B6小鼠制作组织冰冻切片,利用免疫荧光技术检测并比较2种小鼠SRF在眼睑组织中的定位和表达强度.结果 B6-Co小鼠E16.5 d和E17.5 d眼睑组织中SRF mRNA的相对表达水平分别为0.41±0.06和0.24±0.17,明显低于B6小鼠的1.03±0.17和1.01±0.09,差异均有统计学意义（P=0.025、0.017）;B6-Co小鼠E16.5 d和E17.5 d眼睑组织中SRF蛋白的表达水平分别为0.08±0.01和0.08±0.01,明显低于B6小鼠的0.12±0.03和0.13 ±0.02,差异均有统计学意义（P=0.036、0.024）;而2种小鼠间E18.5 d时眼睑组织中SRF mRNA及其蛋白的表达量差异均无统计学意义（P=0.387、0.774）.免疫荧光染色显示,SRF蛋白多表达于B6-Co小鼠和B6小鼠眼睑组织的角质层细胞,但B6-Co小鼠眼睑角质形成细胞中SRF蛋白表达的荧光强度明显弱于B6小鼠.结论 SRF在B6-Co小鼠眼睑组织中的表达量明显下调,SRF可能参与眼睑发育缺陷的发生过程.
- 宋鸿雁李瑶卢泽艳吴刘成邵义祥
- 关键词：角质形成细胞表型
- 角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析被引量：4
- 2011年
- 对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T载体上,转化至感受态细胞,筛选阳性克隆,质粒DNA分子提取,电泳检测,EcoRⅠ酶切释放目的片段,送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。成功扩增出Map3k1基因的20个外显子和上游调控序列,B6-Co小鼠测序结果与基因组数据库序列比对,该基因位于13号染色体第112 559 574的碱基由T突变为A,编码的蛋白质第314氨基酸由亮氨酸变为谷氨酸,但是该基因的表达调控及蛋白质剪切机制仍有待深入研究。
- 吴刘成刘春蒋荧梅王生存邵义祥
- 关键词：PCR扩增
