国家质检总局科技计划项目(2008IK262-2)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：杨俊兴林庆燕秦智锋曾少灵花群义更多>>
- 相关机构：深圳出入境检验检疫局学研究院湖南农业大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目深圳出入境检验检疫局科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2014年
- 为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的结构、功能及免疫学特性,提取PRRSV云南分离株A06RNA,设计特异性引物扩增全长N基因,得到长度为372bp的目的片段,克隆至杆状病毒Bac-To-Bac表达载体pFastBac HTB中,转化大肠埃希菌DH10Bac进行同源重组,成功构建了含有N基因的真核表达载体,转染Sf9细胞,回收得到重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,表达产物17ku,与预期大小一致,能与PRRSV阳性血清产生特异性反应。
- 廖立珊曾少灵孙洁杨俊兴阮周曦张彩虹曹琛福唐金明叶奕优吕建强秦智锋林庆燕花群义
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因杆状病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒A06株单克隆抗体的制备及鉴定
- 2009年
- 用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)A06株病毒抗原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3D12、4E10、6E2和7G6。其细胞培养上清效价分别为1∶256、1∶512、1∶512和1∶256,小鼠腹水效价分别为1∶1.024×106、1∶2.048×106、1∶1.024×106和1∶2.048×106。亚型鉴定表明,3D12、4E10、6E2和7G6分别为IgG2b、IgG2b、IgG1和IgG2a。ELISA检测结果显示,4种PRRSV单克隆抗体仅与PRRSV反应,不与其他病毒反应,表明均为抗PRRSV的型特异性单克隆抗体。对单克隆抗体腹水液进行IgG提取纯化,SDS-PAGE电泳验证,仅出现两条清晰条带,无杂带出现,证明纯化效果较好。这4种单克隆抗体的获得,为建立PRRSV检测方法提供了强有力的工具。
- 廖立珊詹爱军杨俊兴曾少灵花群义余兴龙秦智锋林庆燕
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体生物学特性
- PRRSV云南A06株ORF5和ORF7基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2010年
- 设计2对引物分别扩增PRRSV的ORF5和ORF7基因,对从云南某猪场分离到的毒株A06进行RT-PCR检测,得到2条特异性扩增带,克隆至pMD18-T载体并测序。将A06株的ORF5和ORF7基因及其推断氨基酸序列分别与PRRSV欧洲型代表株LV、美洲型代表株VR2332和7株中国分离的美洲型毒株相应基因进行核苷酸和氨基酸序列比对分析。结果显示,A06株属于美洲型,其ORF5和ORF7基因及推断氨基酸与我国2006年分离的4株HP-PRRSV代表株的相似性高达98%～99%,与欧洲型代表株LV的相似性只有56%～64%。分别构建了以上毒株ORF5和ORF7基因的亲缘关系图谱,反映了A06株ORF5和ORF7基因的进化位置,完成2个基因的遗传变异分析。
- 曾少灵林庆燕花群义张彩虹阮周曦杨俊兴孙洁秦智锋曹琛福陈兵吕建强
- 关键词：PRRSVORF5基因ORF7基因
