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农业部全国畜牧总站动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题: 作品数：170 被引量：712H指数：13; 相关作者：田永祥杨克礼郭锐段正赢周丹娜更多>>; 相关机构：湖北省农业科学院华中农业大学长江大学更多>>; 发文基金：湖北省农业科技创新中心资助项目公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>

ΦC31整合酶介导猪基因组定点修饰的探讨被引量：4: 2014年; 高效与特异的基因组定点修饰是基因工程动物研究的前沿与难点.链霉菌噬菌体ΦC31整合酶能介导含attB位点的外源基因定点整合于多种真核生物基因组的假attP位点,可维持外源基因的正常结构及高效表达.本文探讨ΦC31整合酶介导外源基因在猪基因组内定点整合的分子基础.构建含attB位点的报告载体pEGFP-N1-attB,与ΦC31整合酶表达载体pCMV-INT共转染猪肾PK15细胞,G418筛选获得单克隆细胞系.实时荧光定量PCR筛选出单拷贝整合的转基因细胞系.TAIL-PCR鉴定出1个猪基因组假attP位点,位于猪1号染色体,watson链,坐标114220087-114220126,命名为pig-attP-1.测序结果显示,pEGFP-N1-attB在attB位点处断开插入到pig-attP-1.用荧光计测定细胞培养基上清EGFP含量发现,该转基因细胞系EGFP的表达水平是本底的50倍(13500 AU vs.280 AU),表明pig-attP-1是利于外源基因高效表达的"友好位点".该研究不仅为实现外源基因在猪基因组内的定点整合提供了新策略,也为创制基因工程猪、建立动物生物反应器等研究注入了新思路.; 毕延震刘西梅华再东张立苹郑新民肖红卫

猪卵巢采集月份、保存温度及时间对其卵母细胞体外成熟的影响被引量：2: 2013年; 为了探讨猪卵巢采集月份、保存温度及保存时间对卵母细胞体外成熟的影响,对不同月份、不同保存温度及不同保存时间的猪卵巢采用抽吸法获得卵丘卵母细胞复合体（COCs）,体外培养统计其第一极体排出情况.结果表明,从屠宰场所取卵巢的COCs数5～7月和8～10月期间显著（P＜0.05）高于2～4月和11月至次年1月,而且其卵母细胞体外核成熟率在5～7月和8～10月期间也显著（P＜0.05）高于2～4月和11月至次年1月;采集的猪卵巢分别置于15、20、25、30和35℃的生理盐水中2h,收集卵巢的COCs数差异不显著（P＞0.05）,但是存放在30和35℃的生理盐水中的卵巢的卵母细胞体外成熟率极显著（P＜0.01）高于其他3组;置于35℃生理盐水中2、4、6、8h的卵巢的COCs数差异不显著（P＞0.05）,但存放2h的卵巢的卵母细胞体外成熟率显著（P＜0.05）高于存放4、6和8h的.; 李莉华再东郭帅刘西梅华升郑新民; 关键词：卵母细胞温度体外成熟

Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能评价被引量：10: 2014年; 选择标记的使用和残留可引起消费者对转基因生物环境安全和产品安全的担忧,建立消除选择标记的有效对策甚为必要.本研究的目标是评价Cre-LoxP重组系统删除内源性选择标记基因的效能,为猪安全转基因研究提供实验依据和技术支撑.本文所用的打靶载体ΔMSTN含有LoxP位点锚定的选择标记表达框(LoxP-CMV-NeoR-IRES-EGFP-LoxP).经电穿孔将该打靶载体导入猪肾PK15细胞,经G418筛选,获得稳定整合该载体、EGFP表达均一的单克隆细胞系.将Cre重组酶表达载体pTurbo-Cre导入该细胞系,借助流式分选(FACS)、终点PCR、荧光定量PCR、TA克隆与测序等手段,证明Cre-LoxP重组系统可在猪细胞内高效介导内源性选择标记基因的删除反应,EGFP水平的删除效率达到46.1%,DNA水平的删除效率则达到97%.本文的研究结果为消除选择标记的安全隐患提供了可靠的解决方案,为建立猪安全转基因技术提供了重要的科学依据.; 王志蕊刘西梅周荆荣郑新民魏庆信董发明毕延震; 关键词：CRE LOXP 绿色荧光蛋白删除

鸭黄病毒荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2: 2013年; 根据鸭黄病毒HBJL株NS5基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量PCR检测鸭黄病毒的方法。结果表明,该方法具有很好的特异性和重复性,荧光定量PCR敏感性是常规PCR的100倍左右。同时对30枚人工接种的鸭胚进行检测并与常规PCR方法进行比较,检测结果也表明荧光定量PCR法比常规PCR的敏感性高。; 张蓉蓉温国元罗青平王红琳邵华斌; 关键词：鸭黄病毒 TAQMAN探针荧光定量PCR

猪卵母细胞回收方法对其体外成熟及体外受精的影响被引量：1: 2009年; 研究采用刺破法、切剖法和抽吸法采集猪卵母细胞,比较3种不同方法对卵母细胞在体外成熟及受精后发育的影响。结果表明:刺破法和切剖法所得A、B级卵母细胞数显著高于抽吸法(P<0.05);三种方法回收的A、B级卵母细胞成熟率差异不显著(P>0.05),但三种方法获取的A级卵母细胞成熟率均显著高于B级卵母细胞(P<0.05);刺破法得到的成熟卵母细胞受精后的卵裂率显著高于抽吸法(P<0.05),与切剖法相比差异不显著(P>0.05),但在卵裂胚胎中胚胎各发育阶段所占比例相同(P>0.05)。; 田永祥刘西梅李莉李莉郑新民; 关键词：猪卵母细胞回收方法卵裂率

狼尾草种子萌发条件的研究被引量：3: 2013年; 以采自河南、湖北、湖南和江西4个不同地区的狼尾草种子为试验材料,设20、25、30℃和35℃4个恒温处理,研究狼尾草种子萌发的适宜温度。结果表明,25℃和30℃处理下,种子萌发时间较其它处理早1～2 d,发芽率和发芽指数显著高于20℃和30℃,综合考虑,狼尾草种子的最适宜萌发温度为恒温25～30℃,初次计数时间为第5天。; 田宏刘洋张鹤山熊军波蔡化; 关键词：狼尾草种子萌发温度

高致病性猪蓝耳病毒及猪圆环病毒2型混合感染的诊断被引量：1: 2014年; [目的]对湖北省某猪场发生的以体温升高、部分病猪死亡等为主要特征的疾病进行诊断。[方法]采集发病猪的脾脏、淋巴结等样品,应用PCR方法进行实验室检测。[结果]经实验室检验,结合临床症状,诊断为HP-PRRSV及PCV2混合感染。高致病性猪蓝耳病毒阳性率为40%,猪圆环病毒2型阳性率为90%。[结论]通过采取综合防控措施,病情得到有效控制,减少了猪场的经济损失。; 段正赢戴德强郭锐廖仁芳杨克礼周丹娜刘泽文袁芳艳田永祥; 关键词：猪圆环病毒2型

副猪嗜血杆菌感染禁食初乳CD仔猪模型及感染相关表型组构建被引量：1: 2022年; 研究旨在围绕副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis,Gps)感染优化制备禁食初乳(Colostrum-Deprived Piglet,CD Piglet)仔猪,并构建Gps感染相关表型组。对同一家系的2头母猪经同一头公猪精液配种后,从2窝中选取体重相近的15头1日龄杜×长×大新生仔猪制备CD仔猪模型。攻毒前记录仔猪饲喂数据,并对Gps及其他易混合感染病原进行鉴定。30日龄实施攻毒,实验组(n=6)经气管接种2×10^(8)CFU细菌,对照组(n=3)注射等体积TSB培养基。攻毒前后,采集CD仔猪基础生长数据、血液参数及体温数据;攻毒后记录仔猪临床症状;剖检后对肺脏等关键组织进行Gps分菌鉴定和病理分析;qRT-PCR法检测肺脏等4个组织中细胞因子和肝脏、肺脏中急性期蛋白的表达情况。结果表明,攻毒前CD仔猪成活率达100%,各项基础指标正常;Gps感染后格拉瑟氏病症状明显。本研究建立了Gps感染的综合症状评分体系,并能够较好区分出轻重症感染猪。结合体温数据、血液参数、细胞因子和急性期蛋白检测,最终将综合症状评分、感染后体温上升至41℃以上、11项核心血液参数(MON%、MON#、WBC#、TP、ALB、ALT、CREA、GGT、GLU、LDL、LDH)、4种细胞因子(IL10、IL6、IL1B、IL8)和1种急性期蛋白(HP)初定为Gps感染的关键表型组。研究为利用实验性感染猪群开展针对Gps的抗病育种奠定了基础。; 刘正芳朱颖张烁刘青张晶周焕焕周傲史良玉陈洪波; 关键词：副猪嗜血杆菌抗病育种

厚朴酚对水杨酸钠致妊娠小鼠妊娠损伤的影响被引量：4: 2021年; 本研究旨在探究厚朴酚对高浓度水杨酸钠引起的妊娠小鼠妊娠损伤的修复作用及其作用机制。选取96只妊娠小鼠,随机均分为4组,分别为对照组、模型组(Ⅰ组)和修复组(Ⅱ和Ⅲ组),每组6个重复,每个重复4只。对照组给予正常饮水[含1%二甲基亚砜(DMSO)]并灌胃生理盐水,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别于正常饮水(含1%DMSO)中补充0、80和800μmol/L厚朴酚,并每天灌胃280 mg/kg水杨酸钠。试验持续9 d,其中妊娠第1天至第4天进行灌胃试验。结果表明:与对照组相比,Ⅰ组子宫全重和胚胎数显著降低(P<0.05);妊娠第4天时,子宫内膜组织还原型辅酶/醌氧化还原酶1(NQO1)基因相对表达量显著下调(P<0.05),而白血病抑制因子受体(LIFR)基因相对表达量显著上调(P<0.05);妊娠第9天时,血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、子宫内膜组织E-钙黏蛋白(CDH1)和核因子E2相关因子2(NRF2)基因相对表达量均显著降低(P<0.05),而血红素加氧酶-1(HO-1)和同源盒基因-A10(HOXA-10)基因相对表达量显著上调(P<0.05)。与Ⅰ组相比,Ⅲ组子宫全重和胚胎数显著上调(P<0.05);妊娠第9天时,血清中SOD活性和T-AOC显著上调(P<0.05)。此外,在子宫内膜组织中,妊娠第4天时,与Ⅰ组相比,Ⅲ组LIFR基因相对表达量显著下调(P<0.05);妊娠第9天时,CDH1和NRF2基因相对表达量显著上调(P<0.05),HO-1和HOXA-10基因相对表达量显著下调(P<0.05)。综上所述,厚朴酚可缓解高浓度水杨酸钠所引起的妊娠小鼠妊娠和胚胎损失,这一作用可能与其在妊娠胚胎定植期和妊娠中期对子宫内膜的适应性调节相关。; 樊启文陈芳张巍郭万正黄少文赵娜杜恩存魏金涛; 关键词：厚朴酚水杨酸钠小鼠

自配料与浓缩料饲养安杂牛试验: 2016年; 为比较自配料与商品浓缩料饲喂安杂牛的效果,将20头安杂牛分为2组,每组育肥牛和育成牛各5头,试验组用浓缩料代替日粮蛋白等原料,对照组饲喂自配料。经过60 d的试验,试验组育肥牛和育成牛的平均日增重高于对照组,差异不显著(P>0.05),育肥牛的平均日增重极显著高于育成牛(P<0.01);使用浓缩料后,育肥牛日均减少收益0.8元/头、育成牛增收1.8元/头。说明用浓缩料代替日粮蛋白原料,提高了肉牛的生长和育肥速度,可以在育成牛日粮中推广应用。; 李晓锋李容廖仁芳钱磊明肖凤鸣陈明新; 关键词：浓缩料育肥牛育成牛增重

农业部全国畜牧总站动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题

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