农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室开放基金 作品数:20 被引量:203 H指数:9 相关作者: 雷爱莹 梁万文 黄维义 黄婷 余晓丽 更多>> 相关机构: 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 中华人民共和国农业部 广西水产研究所 更多>> 发文基金: 国家科技支撑计划 公益性行业(农业)科研专项 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
奥利亚罗非鱼外周血白细胞分离与血细胞指数研究 2008年 鱼类外周血白细胞分离一直是一项技术难题,为探讨一种便捷、高效的奥利亚罗非鱼外周血白细胞分离方法,本实验使用76%泛影葡胺(Urografin)调整标准人淋巴细胞分离液比重,通过梯度密度离心筛选最佳奥利亚罗非鱼白细胞分离液比重,并对分离前后的细胞进行分类计数与形态观察。结果发现分离前奥利亚罗非鱼外周血细胞总数为1.5×10^9个/ml,白细胞占35%,最佳奥利亚罗非鱼白细胞分离液比重为1.082,每毫升外周血可分离得到6×10^6~8×10^6个细胞,其中白细胞可达90%以上。对分离前后的细胞进行瑞氏染色分析可明显区分出单核细胞、大淋巴细胞、小淋巴细胞和嗜中性粒细胞,且各类白细胞之间的比例分离前后基本一致。本研究成功建立了奥利亚罗非鱼外周血白细胞分离技术,测定奥利亚罗非鱼血细胞指数,并对血细胞进行了形态学观察与鉴定,这对罗非鱼细胞免疫学研究具有一定的实际意义。 李超 陈明 黄维义 余晓丽 王瑞 雷爱莹 黄婷 秦春香 梁万文关键词:奥利亚罗非鱼 外周血白细胞 用链球菌疫苗免疫罗非鱼前后其差异表达基因的鉴定与分析 被引量:5 2009年 采用抑制性差减杂交技术(SSH)成功构建了罗非鱼O reochrom is nilotica被链球菌Streptococcus iniae疫苗免疫前后正、反两个淋巴细胞cDNA差减文库,富集了免疫过程中表达谱发生变化的淋巴细胞基因,并对文库进行了斑点杂交筛选、测序和ESTs初步分析。结果表明:文库富集了高丰度的差异表达基因,阳性率较高。正向文库中筛选得到21个免疫期间表达丰度上调的基因,其中1个基因与罗非鱼已知基因具有相似性,10个基因与其他鱼类已知基因相似,1个基因与其他物种已知基因具有相似性,9个为未知新基因;负向文库中筛选得到24个免疫期间表达丰度下调的基因,其中3个与罗非鱼已知基因具有相似性,15个与其他鱼类已知基因相似,6个为未知新基因。进一步功能注解发现,正向文库功能基因包括免疫信号传导相关蛋白、防御相关蛋白、肿瘤免疫相关蛋白和淋巴细胞相关蛋白,这些基因免疫后表达丰度升高,提高了机体免疫抵抗力。负向文库功能基因包括细胞免疫相关蛋白、感染相关蛋白和肿瘤发生相关蛋白,这些基因免疫后表达丰度降低,可以降低机体感染和发病几率。 李超 陈明 李莉萍 黄维义 余晓丽 黄婷 张彬 雷爱莹 陈福艳 梁万文关键词:罗非鱼 链球菌 疫苗 差减文库 免疫相关基因 微卫星标记分析罗非鱼群体的遗传潜力 被引量:27 2011年 利用25个微卫星标记,对奥利亚罗非鱼2个群体["夏奥1号"(ZA)、广西群体(GA)]和尼罗罗非鱼4个群体[埃及品系(ZN)、88品系(XN)、广西群体(GN)、美国品系(MN)]进行检测。共检测到7 775个扩增片段,长度在100~400 bp;等位基因数3~8个不等,共计143个等位基因;平均每个基因座扩增得到5.72个等位基因。各群体平均观测杂合度(H o)在0.7253~0.8160之间,平均期望杂合度(He)在0.5146~0.6834之间,平均多态信息含量(PIC)在0.4212~0.6105之间,平均有效等位基因数(A e)在2.20~3.23之间。ZA与GA遗传相似系数最高(0.9130),ZA与ZN遗传相似系数最低(0.4352)。总的说来,4个尼罗罗非鱼群体的遗传潜力较高,2个奥利亚罗非鱼群体的遗传潜力适中。 杨弘 李大宇 曹祥 邹芝英 肖炜 祝璟琳关键词:奥利亚罗非鱼 尼罗罗非鱼 微卫星 罗非鱼免疫前后白细胞cDNA差减文库的构建及鉴定 被引量:9 2010年 为筛选罗非鱼链球菌疫苗免疫前后白细胞表达变化基因及探讨鱼类白细胞免疫机理,利用抑制性差减杂交(SSH)技术,以链球菌疫苗免疫前后罗非鱼白细胞cDNA为材料,构建了罗非鱼免疫前后正、负2个cDNA差减文库,并采用地高辛(DIG)标记差减文库cDNA作为探针,进行差异表达片段的筛选鉴定。结果显示:2个文库重组率均在90%以上,插入片段在300~900 bp,接头连接效率超过50%,差减效率非常高效,阳性率均超过70%。杂交筛选后正、负文库各挑选30个阳性克隆进行测序组装聚类,正、负文库各获得16和18条非冗余EST(unigene),所得序列经GenBank同源性分析,正、负文库各有10和11条unigene获得功能注释,且各有6和7条unigene没有同源性匹配,为未知新基因。 李超 陈明 李莉萍 黄维义 余晓丽 黄婷 张彬 雷爱莹 陈福艳 梁万文关键词:罗非鱼 链球菌 差减文库 罗非鱼外周血白细胞分离与血细胞指数研究 被引量:3 2009年 采用Ficoll-Urografin法探讨了罗非鱼外周血白细胞的最佳分离条件,并通过瑞氏染色和细胞分类计数对罗非鱼外周血血细胞指数进行测定。结果表明:罗非鱼最佳白细胞分离条件为18℃,且细胞分离液的相对密度为1.082;分离前罗非鱼外周血血细胞总数为1.5×109个/mL,红细胞约占65%,白细胞约占35%,其中小淋巴细胞、大淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞比例分别是5.81%、12.79%、12.79%和1.16%;每毫升外周血可分离得到(1.3~1.5)×107个细胞,其中白细胞可达90%以上,用瑞氏染色可明显区分出单核细胞、大淋巴细胞、小淋巴细胞、嗜中性粒细胞和血栓细胞,但嗜碱性和嗜酸性细胞较难分辨,且各类白细胞之间的比例分离前后保持一致。血细胞指数测定显示,单核细胞最大,其次为嗜中性粒细胞和红细胞,淋巴细胞和血栓细胞最小,各类血细胞指数与鲤科鱼类同源性较高。 李超 陈明 王瑞 黄维义 余晓丽 黄婷 雷爱莹 梁万文关键词:罗非鱼 外周血白细胞 日本鳗鲡健康养殖技术 被引量:4 2009年 日本鳗鲡俗称鳗鱼、白鳝,是世界性的优质养殖鱼类,其营养价值和经济价值都相当高,素有“水中人参”之称,在分类学中属鳗鲡科(Anguillidae)、鳗鲡属(Anguilla),自然界广泛分布于我国江河沿海,是中国长江及以南地区淡水养殖的主要名贵品种之一,以其肉质鲜美,营养丰富,深受人们的喜爱,素有“水中人参”之称。 王广军 胡隐昌 牟希东 王志勇关键词:日本鳗鲡 健康养殖技术 淡水养殖 养殖鱼类 营养价值 营养丰富 中草药添加剂对日本鳗鲡生长和非特异性免疫效应的研究 被引量:20 2008年 在基础饲料中分别添加0.5 g/kg、1.0 g/kg和1.5 g/kg的自制中草药免疫添加剂,配制成3种试验饲料,以基础饲料为对照组饲料,每处理设3个平行样,对体重为30~40 g的日本鳗鲡(Anguilla japonica)进行为期60 d的饲养试验,每20 d取样一次,以相对增重率、成活率和血清中的溶菌酶(LZM)、一氧化氮合酶(NOS)、碱性磷酸酶(AKP)和超氧化物歧化酶(SOD)活性为指标,探讨了中草药免疫添加剂对日本鳗鲡生长和非特异性免疫效应的影响。结果显示:饲料中添加中草药免疫添加剂可以显著提高日本鳗鲡的增重率,降低饲料系数(P〈0.05)。试验组日本鳗鲡血清中的LZM、NOS、AKP和SOD等活性均高于对照组。因此,中草药免疫添加剂具有显著促生长和增强机体免疫能力的作用,建议在实际生产中的添加量为1.0 g/kg较为合适。 王广军 谢骏 胡隐昌 余德光关键词:中草药制剂 免疫 恩诺沙星在异育银鲫体内的组织分布及消除规律 被引量:17 2012年 在24~26℃水温条件下,以10 mg.kg-1剂量,用高效液相色谱法检测组织中药物浓度,研究静脉注射和口服给药后恩诺沙星在健康异育银鲫组织内的代谢分布规律。结果表明:静脉注射后,药物在组织中代谢动力学特征符合二室模型;口服给药后,药物吸收良好,生物利用度(F)为86%,组织药物浓度-时间曲线呈现双峰,推测是由于药物在异育银鲫体内的肠肝循环作用所致。静脉注射和口服两种给药方式下,恩诺沙星在异育银鲫体内均具有良好的组织分布,肾脏、肌肉、肝胰脏、鳃和血液5种组织中的药物浓度时间曲线下总面积(AUC)分别为624.2、965.9、721.8、298.0、239.6μg·h·mL-1和465.3、343.1、542.9、411.4、205.9μg·h·mL-1,最大药物浓度(Cmax)分别为33.48、16.91、26.44、18.71μg.g-1和15.30μg·mL-1,9.20、5.39、7.78、6.88μg.g-1和4.50μg·mL-1;药物在各组织中消除时间较长,消除半衰期(T1/2β)分别为169.0、141.4、113.4、36.7、63.5 h和27.3、49.2、77.0、38.5、62.7 h。结论:恩诺沙星以10 mg.kg-1剂量单次口服给药,对细菌引起的异育银鲫病可以起到较好的治疗作用,但需注意药物残留问题。 方星星 刘秀红 丁相卿 赵文婷 刘文斌 陆承平关键词:恩诺沙星 异育银鲫 芙蓉鲤鲫(芙蓉鲤♀×红鲫♂)的性腺组织学及繁殖性能研究 被引量:6 2010年 采用解剖观察、组织切片及人工催情等方法,研究芙蓉鲤鲫(Cyprinus capiofurong.♀×Carassius auratus red var.♂)的性腺发育及繁殖性能。结果显示:解剖观察,芙蓉鲤鲫性腺发育异常的个体占83.64%,性腺外观基本正常的个体占16.36%。组织学观察,芙蓉鲤鲫性腺可分三类:两性嵌合体占21.13%,其中以精巢为主的16.90%,以卵巢为主的4.23%,它们性腺发育迟缓,在繁殖季节成熟系数也没有明显变化,性腺多为一侧发育或两侧不对称,两种性腺细胞均不能成熟;雌性个体占40.84%,在生殖季节卵巢可发育到第IV时相,但未见其细胞核发生偏移;雄性个体,占38.03%,在生殖季节只能发育到精子细胞阶段,不能产生成熟的精子。经人工催产,芙蓉鲤鲫少部分个体有发情产卵行为但不能正常受精。结果表明芙蓉鲤鲫为两性败育类型。 李传武 王金龙 曾春芳关键词:RED 性腺 可育性 芙蓉鲫(芙蓉鲤♀×红鲫♂)及其原始亲本的形态学分析 被引量:4 2009年 本研究随机采集芙蓉鲫及其原始亲本(芙蓉鲤、红鲫、散鳞镜鲤、兴国红鲤),测定了7项可数性状和12项可量性状,研究芙蓉鲫与其原始亲本之间的表型差异。结果表明:芙蓉鲫(Cyprinus capiofurong.♀×Carassiusauratusred var.♂)可数性状稳定,介于父母本之间,可量性状中芙蓉鲫有5项偏向父本,3项偏向母本、4项超父母本。聚类分析显示芙蓉鲫可量性状更接近于父本红鲫,而与另3种亲本差异较远。判别分析结果也显示芙蓉鲫与红鲫形态更为接近,各组判别准确率依次为芙蓉鲫100%,红鲫96%,兴国红鲤87%,散鳞镜鲤81.3%,芙蓉鲤73.1%。 王冬武 李传武 王金龙 曾国清 肖调义关键词:RED 形态学