陕西省自然科学基金(2006C257)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：张健陈苏宁刘新平药立波曲璇更多>>
- 相关机构：第四军医大学第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- Sp1基因RNA干扰载体的构建及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:构建干扰载体pSilencer3.1-Sp1,并初步研究其对Sp1基因的干扰作用。方法:根据Sp1cDNA编码序列,设计并合成针对Sp1基因的特异性RNA干扰片段,并将其克隆入pSilencer3.1-H1neo干扰载体中,构建Sp1基因小干扰RNA(siRNA)真核表达载体pSilencer3.1-Sp1;分别将阴性对照载体pSilencer3.1与重组载体pSilencer3.1-Sp1经脂质体LipofectAMINE2000介导转染HeLa细胞,采用RT-PCR、Western blot方法分别检测Sp1基因的转录与表达水平。结果:构建了Sp1基因siRNA真核表达载体pSilencer3.1-Sp1,经酶切、测序鉴定证实克隆正确,并在mRNA水平和蛋白水平证实了载体的干扰效果。结论:特异性siRNA能明显抑制Sp1基因在HeLa细胞中的表达,为进一步研究Sp1的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。
- 曲璇陈苏宁吴琳申亮亮林伟赵华栋刘新平张健
- 关键词：RNA干扰小干扰RNA
- 人NDRG2启动子的克隆与活性鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:克隆人NDRG2的启动子,并进行启动子的活性鉴定。方法:用Advantage-GC Taq酶,采用PCR方法,以BCA克隆R-998D1为模板,克隆人NDRG2(-1455/+274)的启动子。分别构建NDRG2(-1131/+274)、NDRG2(-273/+274)、NDRG2(-135/+274)、NDRG2(-79/+274)和NDRG2(-79/+57)等不同长度的截短体,并分别亚克隆入pGL3-basic报告基因载体,测序鉴定。分别转染HEK293和HeLa细胞后,运用双荧光报告基因系统进行启动子活性分析,从而判断核心启动子的位置。结果:人NDRG2的启动子克隆成功,并构建了不同长度的截短体,DNA测序结果与报道一致。报告基因分析结果将人NDRG2启动子的核心区域定位于NDRG2(-79/+57)。结论:随着人NDRG2的启动子的长度逐渐被截短,启动子的基础活性也逐渐降低,可将人NDRG2启动子的核心区域定位于NDRG2(-79/+57)。
- 张健陈苏宁于江天苏金药立波刘新平
- 关键词：NDRG2启动子转录调控
- 人NDRG3 cDNA的克隆与表达被引量：1
- 2006年
- 目的：为了获得NDRG3(N-Myc downstream regulated gene3)的cDNA,以成人脑组织为模板。方法：由特异性的引物通过RT—PCR方法扩增人NDRG3的编码基因,大小约为1．1 kb。将此基因插入PMD 18-T载体中,并进行酶切鉴定和序列测定。然后,将测序正确的片段亚克隆人原核表达载体pPROEX-HTb表达载体中,转化DH5α感受态细胞,并在LB培养基中获得高效表达。结果：这表明成功地进行了人NDRG3的克隆和表达,为进一步研究NDRG3的功能奠定了良好的基础。
- 张健陈苏宁药立波刘新平
- 关键词：N-MYCPCR
