国家高技术研究发展计划(2006AA02A107)
- 作品数：21 被引量：72H指数：4
- 相关作者：裴雪涛王韫芳南雪岳文陈琳更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中国人民解放军总医院吉林大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 胆汁酸代谢对肝细胞功能的影响被引量：8
- 2007年
- 郑吉春王韫芳裴雪涛
- 关键词：胆汁酸代谢肝细胞功能胆固醇代谢胃肠外营养生物人工肝代谢过程
- 脂肪来源干细胞的多向分化性及其在组织工程中的应用被引量：1
- 2009年
- 近期研究表明间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)可以从脂肪组织获得,这类细胞被称为脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)。ADSCs与骨髓来源MSC具有相似的多向分化性,并且存在容易获取、取材创伤小和细胞获得量大等优点,因此有望成为组织工程中另一种很有前景的种子细胞来源。本文介绍了ADSCs多向分化性的最新研究进展,以及在各种组织工程中的应用情况。
- 王敏裴海云裴雪涛
- 关键词：脂肪组织间质干细胞细胞分化
- 用慢病毒转染RNAi技术沉默胆固醇7α羟化酶的基因表达,降低肝细胞中胆汁酸的分泌
- 2008年
- 为了降低生物人工肝(bioartificial liver system)中肝细胞胆汁酸的分泌,构建了胆固醇7α羟化酶慢病毒RNA干涉载体,并转染人肝脏细胞(L-02)。根据绿色荧光蛋白的表达评估转染效率后进行流式分选,获得高表达慢病毒干涉载体的细胞,并以野生型L-02细胞和仅转染pSicoR空载体的L-02细胞作对照,观察肝细胞胆固醇7α羟化酶的表达以及培养上清中总胆汁酸含量。利用半定量PCR、实时荧光定量PCR及Western-blot等实验方法检测了转染细胞中基因的干涉效果,结果显示:与对照组相比,在mRNA水平,转染慢病毒siRNA载体的L-02细胞,其胆固醇7α羟化酶基因的表达量仅为野生型L-02细胞表达量的31.2%,为转染pSicoR空载体的L-02细胞的34.1%,干涉效率分别为68.8%和65.9%,均具有显著差异(P<0.05);Western-blot结果显示胆固醇7α羟化酶在蛋白质水平表达也明显受到抑制,表明转染慢病毒siRNA下调了肝细胞中胆固醇7α羟化酶基因的表达,减少了胆汁酸的分泌。以上研究结果表明,利用RNAi技术可以获得低表达胆固醇7α羟化酶基因的肝细胞,并有效降低肝细胞中胆汁酸的分泌,为临床上生物人工肝的构建及应用奠定基础。
- 郑吉春裴海云杨印祥姚海雷罗海英王婧陈琳南雪白慈贤王韫芳岳文裴雪涛
- 关键词：RNAI慢病毒肝细胞胆汁酸
- 苯肼致小鼠溶血性贫血模型的建立被引量：8
- 2010年
- 目的:应用苯肼致小鼠发生溶血性贫血,建立急性溶血性贫血模型,筛选苯肼致小鼠贫血最佳浓度和红细胞移植的最佳时机。方法:30只C57BL/6小鼠随机分为6组,经腹腔注射不同浓度的苯肼溶液,于注射前和注射后第1、3、5、7、9天采集小鼠外周血进行检测,记录相关指标的变化,比较各组之间的差异,筛选出最佳溶血效果的给药浓度和红细胞移植治疗介入的时机。结果:注射苯肼溶液可使C57BL/6小鼠短期内产生明显的急性溶血性贫血症状,皮肤黏膜颜色苍白;外周血红细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积降低;随着苯肼溶液浓度的增加,小鼠体重显著减轻,存活率下降。结果表明,苯肼注射小鼠致贫血的最佳作用浓度为1.2mg/10g体重,小鼠贫血状态可维持7d。结论:建立了小鼠溶血性贫血模型,此模型可应用于红细胞输注效果的评价。
- 王若永习佳飞何丽娟谢小燕杨超陈琳李艳华裴雪涛
- 关键词：急性溶血性贫血苯肼动物模型红细胞
- 人羊水来源MSC的分离培养鉴定及其免疫抑制特性的初步研究被引量：2
- 2009年
- 目的:体外分离培养鉴定具有间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)特征的人羊水来源细胞,并对其免疫抑制特性进行初步评价。方法:贴壁法体外分离培养人羊水来源细胞,多次传代扩增后,采用形态学观察、流式细胞术分析表型以及定向诱导分化为脂肪样细胞、成骨样细胞等方法进行鉴定后,以细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)体外检测人羊水来源间充质干细胞(amniotic fluid derived-mesenchymal stem cells,AFMSC)对ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,并对其时效、量效关系进行分析。结果:具备MSC形态、表型及分化潜能特征的人羊水来源细胞,可于体外显著抑制ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖(P<0.05),时效、量效关系显著(P<0.05)。结论:从免疫抑制特性角度证明羊水可成为替代骨髓的MSC新来源。
- 胡洁杨丽娟刘慧王韫芳岳文魏林王润田裴雪涛
- 关键词：羊水间质干细胞免疫抑制
- 骨髓间充质干细胞亲和肽MMP底物肽复合物的构建及其作为小分子药物载体的初步研究
- 2009年
- 为了探讨骨髓间充质干细胞亲和肽与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)底物肽复合后作为小分子药物载体的可行性,采用噬菌体肽库技术,用分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞(mouse mesenchymal stem cells,MSCs)筛选噬菌体环七肽库,获得MSCs高亲和性多肽.合成FITC(FITC-CSTNPKVLC,FITC-P1)和生物素(Biotin-CSTNPKVLC,Bio-P1)标记的亲和肽,流式细胞术和ELISA方法检测其与MSCs的亲和性;将DAPI标记的MSC-Bio-P1复合物植入裸鼠肿瘤组织周围,检测复合物在体内的稳定性.将亲和肽与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)特异性底物肽(GPLGIAGQ)连接,合成FITC标记的亲和肽-底物肽复合物(FITC-Ahx-CSTNPKVLCGPLGIAGQ,FITC-P1-P2),通过流式细胞术检测其对MSCs的亲和性,毛细管电泳方法检测MMP对FITC-P1-P2的酶切效果.结果表明,通过噬菌体肽库筛选获得的MSCs亲和肽,在体内外对MSCs均具有良好的亲和性和稳定性;亲和肽与底物肽的复合物(FITC-P1-P2)对MSCs仍有较好的亲和性,并且能够被MMPs酶切.以上研究表明,MSCs亲和肽-MMP底物肽复合物(CSTNPKVLCGP-LGIAGQ,P1-P2)可以作为MSCs与小分子药物相连的连接子,从而对MSCs作为小分子药物(如化学药物)载体的可行性提供了实验依据.
- 赵敬湘杨立平刘大庆岳文裴雪涛
- 关键词：骨髓间充质干细胞噬菌体肽库
- 神经元限制性沉默因子在NTera2/CloneD1细胞向神经元分化模型中表达的检测
- 2011年
- 目的:建立NTera2/CloneD1细胞向神经元分化的模型,检测神经元限制性沉默因子(NRSF)经分化培养基诱导后表达的变化。方法:收集正常培养的NTera2/CloneD1细胞及经全反式维甲酸(RA)、阿糖胞苷(AraC)、尿苷分阶段诱导共28 d的细胞,显微镜下观察诱导前后细胞的形态学变化;免疫荧光法检测NTera2/CloneD1细胞诱导前后干性标志Nestin、Sox2和成熟神经元特异性标志NF-200、β-tubulinⅢ的表达情况;应用RT-PCR和免疫荧光法对NRSF进行mRNA和蛋白水平的检测。结果:显微镜下观察到正常培养的NTera2/CloneD1细胞呈克隆样生长,经分化培养基诱导后的NTera2/CloneD1细胞表现出典型的神经元样细胞形态。免疫荧光检测表明,未诱导的NTera2/CloneD1细胞表达神经干细胞的标志Sox2、Nestin,不表达成熟神经元特异性蛋白NF-200、β-tubulinⅢ;而经RA等诱导分化的细胞则不表达Sox2、Nestin,表达NF-200、β-tubulinⅢ。RT-PCR和免疫荧光检测显示,NRSF在诱导分化后的NTera2/CloneD1细胞中的表达量显著降低。结论:建立了NTera2/CloneD1细胞向神经元分化的模型,NRSF在诱导后的NTera2/CloneD1细胞中表达量显著下调,提示NTera2/CloneD1细胞在诱导过程中可能通过下调NRSF,使受到NRSF负性调控的神经元特异性蛋白启动表达并上调,进而实现NTera2/CloneD1细胞向神经元的定向分化。
- 张静王思涵张博文姚海雷陈琳吕洋南雪岳文李艳华裴雪涛
- 关键词：神经元分化神经元限制性沉默因子
- 大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立与评价
- 2008年
- 目的:建立大鼠肝脏移植急性排斥反应模型,并对所建模型进行评价。方法:采用改良Kamada"二袖套"法,以近交系大鼠Dark Agouti(DA)为供体、Lewis(LEW)为受体(A组)建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型,通过观察手术情况、生存情况及肝功能和病理学检查对此模型进行评价,同时以LEW→LEW作为对照组(B组)。结果:手术成功率为91.3%;手术时间为(90.70±5.68)min;无肝期时间(9.96±1.19)min;平均存活时间A组为(12.44±3.43)d,B组超过100d;A组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及血清总胆红素术后不断升高,在第10～14d最为明显,血清白蛋白在术后第3d开始逐渐降低,在相同时相点,与B组相比差异显著;A组移植肝脏病理检查有明显的排斥反应,而B组没有。结论:DA→LEW为稳定、强烈的大鼠肝移植急排模型,是研究肝移植排斥及免疫耐受的理想动物模型。
- 罗海英翟树森张玉君白慈贤尉承泽孔维王韫芳裴雪涛
- 关键词：肝移植排斥反应近交系
- 腺病毒介导CTLA4Ig及CTLA4双基因在骨髓间充质干细胞中的表达
- 2008年
- 目的制备CTLA4Ig及CTLA4双基因共表达腺病毒载体,检测重组腺病毒在骨髓间充质干细胞(BMMSCs)中的表达。方法构建大鼠CTLA4Ig融合基因,将CTLA4Ig及CTLA4基因经IRES2连接,通过同源重组获得重组腺病毒表达载体,并在293细胞中进行病毒包装和扩增。检测CTLA4Ig和CTLA4在BMMSCs中的共表达情况及其免疫抑制功能。结果通过同源重组获得携带CTLA4Ig-IRES2-CTLA4的重组腺病毒表达载体,PacⅠ酶切鉴定正确,与脂质体共转染293细胞获得重组腺病毒。用重组腺病毒感染的BMMSCs可同时表达CTLA4Ig及CTLA4,且此类细胞具有明显抑制淋巴细胞反应的功能。结论重组腺病毒感染的BMMSCs可同时表达分泌型CTLA4Ig和膜结合型CTLA4,通过阻断协同刺激通路方式进一步增强BMMSCs的免疫抑制功能。
- 罗海英王韫芳南雪白慈贤施双双尉承泽孔维裴雪涛
- 关键词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4腺病毒科间质干细胞免疫抑制
- 人羊水来源干细胞的体外培养及其生物学性状分析被引量：1
- 2010年
- 目的:体外分离培养人羊水来源干细胞(hAFSC),观察分析其基本的生物学性状。方法:取孕中期产前诊断所抽取的羊水,离心收集细胞,然后贴壁培养获得hAFSC。在细胞培养的基础上,观察hAFSC的形态;研究其增殖能力;用流式细胞术测定细胞周期及不同代次细胞表面阶段特异性胚胎抗原4(SSEA-4)表达率的变化;利用RT-PCR方法检测细胞干性基因的表达;利用诱导培养基诱导,检测其向肝样细胞与成骨细胞分化的潜能。结果:在体外培养条件下,hAFSC表现为成纤维细胞形态;具有良好的增殖能力,群体倍增时间约为36 h;细胞周期检测G0/G1期细胞约占86.7%,S+G2/M期细胞约占13.3%;流式细胞术检测结果表明,hAFSC表达SSEA-4,且SSEA-4阳性率随传代次数呈现先上升后下降的趋势;hAFSC在mRNA水平上表达Nanog、Oct4和Rex1等胚胎干细胞标志性基因;经诱导培养基诱导后,hAFSC可以向肝样细胞与成骨细胞分化。结论:hAFSC是一群呈成纤维细胞样,有良好增殖能力,且具有多向分化潜能的细胞,加之其来源方便,伦理学限制较少,因此在细胞治疗及组织工程等方面有着广泛的应用前景。
- 李保伟刘慧刘大庆吕洋陈琳岳文李艳华裴雪涛
- 关键词：细胞培养多潜能性
